子宫内膜异位患者CXCL16的表达情况及诊断价值

陈惠娴 张真真 万贵平

[摘要] 目的 探討血清中人CXC型趋化因子配体16（CXCL16）对子宫内膜异位症的诊断价值。 方法 选取2016年1月～2017年12月，在江苏省中西医结合医院妇科住院行腹腔镜手术的47例患者，其中27例子宫内膜异位症患者及20例无子宫内膜异位症患者。分别测定患者的血清CXCL16水平，进行统计学分析，并绘制受试者工作特征曲线（ROC曲线），评价其对子宫内膜异位症的诊断价值。 结果 子宫内膜异位症患者的血清CXCL16水平明显高于无子宫内膜异位症患者，差异有统计学意义（P < 0.05）；不同月经分期（卵泡期、排卵期、黄体期）的子宫内膜异位症患者间CXCL16的表达水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。Ⅲ、Ⅳ期子宫内膜异位症患者的血清CXCL16水平显著低于Ⅰ期患者（P < 0.05），且与Ⅱ期患者比较差异无统计学意义（P > 0.05）。ROC曲线分析显示ROC曲线下的面积为0.768，CI：0.63～0.905，特异性和敏感性总和最高的截断值为0.9750，特异性为50%，灵敏度为96.3%。 结论 血清CXCL16是一种有价值的生物标志物，可为子宫内膜异位症提供一种简单的非侵入性诊断方法。

[关键词] 子宫内膜异位症；人CXC型趋化因子配体16；白介素-8；黏附分子

[中图分类号] R711.71 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2018）05（c）-0092-04

The expression and diagnostic value of CXCL16 in patients with endometriosis

CHEN Huixian1 ZHANG Zhenzhen2 WAN Guiping2▲

1.The Third Clinical Medicine， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210046； 2.Department of Gynaecology and Obstetrics， Affiliated Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Nanjing University of Chinese Medicine， Jiangsu Province， Nanjing 210028

[Abstract] Objective To investigate the diagnostic value of human CXC chemokine ligand 16 （CXCL16） in the diagnosis of endometriosis. Methods Forty-seven patients who underwent laparoscopic surgery from January 2016 to December 2017 in Affiliated Hospital of Integrated Traditional Chinese and Western Medicine， Nanjing University of Chinese Medicine were selected， and were divided into observation group with endometriosis （27 cases） and control group without endometriosis （20 cases）. All the levels of serum CXCL16 were tested and the receiver operating characteristic curve （ROC curve） was drawn in order to evaluate the diagnostic value. Results The serum CXCL16 levels in observation group were significantly higher than those in control group， the difference was statistically significant （P < 0.05）. Patients with different menstrual stages （follicular phase， ovulation phase， luteal phase） was found had no statistically significant difference （P > 0.05）. The CXCL16 leves of patients in stage Ⅲ and Ⅳ endometriosis were significantly lower than that in stage Ⅰ （P < 0.05）， and had no statistical difference with stage stage Ⅱ patients （P > 0.05）. The ROC curve analysis showed that the area under the ROC curve was 0.768， CI：0.63-0.905， and the cutoff value of the highest total of specificity and sensitivity was 0.9750， specificity was 50% and sensitivity was 96.3%. Conclusion The serum CXCL16 is a valuable biomarker and it may provide a simple， non-invasive tool for the diagnosis of endometriosis.

[Key words] Endometriosis； Human CXC chemokine ligand 16； IL-8； CAM

子宫内膜异位症是一种妇科常见疾病，特征在于功能性的子宫内膜出现在卵巢、宫底韧带、腹膜和子宫直肠凹等子宫体以外的部位。其主要临床表现包括痛经、慢性盆腔痛、性交困难、不孕等[1]，在生育期的女性中发病率为6%～10%[2]，在不孕症患者中的发病率甚至高达35%[3]，且呈逐年升高的趋势，成为严重影响育龄女性健康的良性疾病之一。目前临床诊断子宫内膜异位症的金标准是腹腔镜检查[4]，然而，这种侵入性的诊断方法会带来与手术相关的风险，且会导致平均10年的诊断延迟[5]。非手术方法如影像学检查、血液肿瘤标志物检测等，目前仍不能作为准确的诊断方法[6]。影像学检查包括阴道超声检查、盆腔磁共振成像、CT等，但子宫内膜异位症的影像学表现与其他不同性质的盆腔肿物的表现图像相似，易造成混淆、误诊[7-8]。鉴于临床子宫内膜异位症的高发病率及严重的临床表现，尽早发现一种用于早期筛查子宫内膜异位症的非手术方法，例如血清生物标志物，已成为近年来研究的重点。

血清中人CXC型趋化因子配体16（CXC chemokine ligand 16，CXCL16）作为趋化因子配体家族的成员，具有促炎及增加黏附的作用，可能与子宫内膜异位症的早期黏附种植有关。本项研究通过检测子宫内膜异位癥患者和无子宫内膜异位症患者血清中CXCL16的水平，判断其是否可以作为诊断子宫内膜异位症的可靠非侵入性生物标志物。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选取2016年1月～2017年12月在江苏省中西医结合医院妇科住院（以下简称“我院”），行腹腔镜手术的患者共47例，27例患者均为腹腔镜及术后病理明确诊断的子宫内膜异位症患者，其中腹壁子宫内膜异位症2例，卵巢子宫内膜异位症25例，符合《2015年子宫内膜异位症的诊治指南》的诊断标准[9]，②无子宫内膜异位症患者20例，其中子宫肌瘤15例，卵巢成熟型畸胎瘤5例，患者均经腹腔镜及术后病理明确诊断。

纳入标准：所有患者均为年龄在18～50岁的未绝经女性，所有入选研究者年龄组间比较差异无统计学意义（P > 0.05）。排除标准：哺乳期、有心肝肾慢性疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤、传染性疾病的患者，且术前3个月有激素治疗史。

按照1995年美国生育协会修正分期法（R-AFS）[10]对患者进行分期，在27例子宫内膜异位症患者中，Ⅰ期3例，占11%；Ⅱ期2例，占7%；Ⅲ期11例，占41%；Ⅳ期11例，占41%。本研究方案经我院医学伦理委员会审核批准，参与研究者均知情同意并签署知情同意书。

1.2 研究方法

1.2.1 标本采集及处理 所有入选对象手术前抽取静脉血2～3 mL，静置2 h后室温3000 r/min离心10 min，取上层血清进行分装，存放于-80℃冰箱，避免反复冻融。

1.2.2 主要试剂 CXCL16检测用上海恒远生物科技有限公司酶联免疫吸附测定（Elisa）试剂盒，内含酶标包被板96孔（12孔×8条）、标准品、标准品稀释液、样品稀释液、30倍浓缩洗涤液、酶标试剂、显色剂A液、显色剂B液、终止液、封板膜、密封袋。

1.2.3 主要仪器 台式低速离心机（湖南赫西仪器装备有限公司）、医用高速离心机（Eppendorf）、医用深冻冰箱（Thermo Fisher Scientific）、自动分析酶标仪（Tecan公司Infinite 200 Pro NanoQuant）。

1.2.4 检测方法 采用Elisa测定标本中的CXCL16浓度。将稀释的标准品、1︰5稀释后的血清样品加入到酶标板孔中，温育洗涤后加入酶标试剂，再次温育洗涤，依次加入显色剂A、B，避光37℃显色10 min后，加入终止液，用酶标仪测定450 nm波长各孔的吸光度（OD值），绘制标准曲线，最后通过标准曲线来计算样品中CXCL16的浓度。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差（x±s）表示，两样本计量资料比较采用独立样本t 检验，多组间比较采用多因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；以P < 0.05为差异有统计学意义。为了确定CXCL16在诊断子宫内膜异位症中的敏感性和特异性，采用ROC曲线分析，计算ROC曲线下面积（AUC）和95%CI。

2 结果

2.1 两组患者的血清中CXCL16水平比较

子宫内膜异位症患者血清CXCL16水平为（1.7437±0.6614）pg/mL，明显高于无子宫内膜异位症患者[（1.0700±0.5632）pg/mL]，差异有统计学意义（P < 0.05）。

2.2 子宫内膜异位症患者不同月经分期、不同疾病分期的血清CXCL16比较

不同月经分期（卵泡期、排卵期、黄体期）子宫内膜异位症患者间的CXCL16水平比较，差异无统计学意义（P > 0.05）；不同疾病分期（Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期）子宫内膜异位症患者间的CXCL16水平比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；Ⅲ、Ⅳ期的血清CXCL16水平显著低于Ⅰ期患者，与Ⅱ期患者比较，差异无统计学意义（P > 0.05）。见表1。

2.3 血清CXCL16在子宫内膜异位症诊断中的敏感性与特异性

为进一步研究血清CXCL16水平在子宫内膜异位症诊断中的可行性，对数据进行了ROC AUC分析。ROC曲线分析结果显示AUC为0.768（CI：0.63～0.905），特异性和敏感性总和最高的截断值为0.9750，提供50%的特异性和96.3%的灵敏度。

3 讨论

子宫内膜异位症是一种妇科慢性炎性疾病，在某些方面具有与恶性肿瘤相似的特点：进行性和浸润性生长、复发和转移倾向。目前诊断子宫内膜异位症的方法包括腹腔镜手术、病理活检、影像学检查等，这些方法均不能在疾病早期提示病情的发生，甚至腹腔镜会导致延迟10年的诊断。血清肿瘤标志物如CA125在临床诊断子宫内膜异位症中应用广泛，近年来研究发现血清CA125水平可用于辅助进行R-AFS分期和确诊病变部位，可作为鉴别子宫内膜异位症、卵巢囊肿及子宫腺肌症的辅助诊断指标，但其对早期疾病的诊断以及相关疾病的鉴别诊断仍缺乏敏感性和特异性[11]。与此同时，子宫内膜异位症有多种发病学说，包括经血逆流、体腔上皮化生、免疫缺陷等[12]，由于其病因及发病机制至今尚未明确，也成为早期诊断子宫内膜异位症的主要障碍。因此，临床上迫切需要一种高效、敏感、非侵入性的诊断方法。以往研究在寻找合适的标志物时是通过可能相关的生物标志物在血清中的水平的检测，并与无子宫内膜异位症患者比较分析后从中筛选出合适的结果，但结果经常不一致。

CXCL16是趋化因子配体家族的成员，通过与受体CXCR6结合后能够促进细胞的生长、迁移、侵袭[13]。CXCL16的可溶性形式可作为化学引诱剂促进细胞迁移[14]，跨膜CXCL16可以作为表达CXCR6的细胞的细胞黏附分子[15]。有研究提示CXCL16在动脉粥样硬化中有增加内皮黏附及促炎作用，与疾病发展有关，可用于冠心病的臨床诊断[16]；还与肾病的炎性反应、纤维化有关[17]。在宫颈癌患者中，其血清CXCL16水平与肿瘤的生长、侵袭有关[18]，近年来已成为多种临床疾病的研究热点。本研究检测了子宫内膜异位症和无子宫内膜异位症患者血清中CXCL16的水平，判断其是否可以作为非侵入性生物标志物，用于子宫内膜异位症的诊断；判断其诊断子宫内膜异位症的敏感性与特异性。结果发现，子宫内膜异位症患者的血清CXCL16水平与无子宫内膜异位症患者比较明显升高，差异有统计学意义（P < 0.05），提示血清CXCL16水平可用于区分子宫内膜异位症和无子宫内膜异位症患者。相关研究中发现，CXCL16在异位内膜的间质细胞中表达，能促进IL-8的分泌，通过调控子宫内膜异位症的炎性反应及细胞增殖，参与疾病的发生发展[19]，这些研究发现CXCL16能促进间质细胞IL-8的分泌，而IL-8又能调控细胞间黏附分子-1（ICAM-1）和血管细胞黏附分子-1（VCAM-1）的表达[20]，ICAM-1及VCAM-1作为黏附分子参与异位内膜的黏附种植，故血清CXCL16水平在早期诊断子宫内膜异位症中具有临床意义。不同月经分期（卵泡期、排卵期、黄体期）的子宫内膜异位症患者间CXCL16水平比较差异无统计学意义（P > 0.05），提示血清CXCL16作为诊断子宫内膜异位症的标志物具有稳定性。比较不同分期子宫内膜异位症患者血清CXCL16水平，发现Ⅲ、Ⅳ期患者显著低于Ⅰ期患者（P < 0.05），且与Ⅱ期患者差异无统计学意义（P > 0.05）。ROC曲线分析显示AUC为0.768，CI：0.63～0.905，特异性和敏感性总和最高的截断值为0.9750，提供50%的特异性和96.3%的灵敏度，提示CXCL16可以作为子宫内膜异位症早期诊断的稳定的生物学标志物，且具有较高的特异性及敏感性。

综上所述，本研究提供了新的证据表明，血清CXCL16是一种诊断子宫内膜异位症的有价值的新型生物标志物，但样本量相对较小，需谨慎参考结果，同时需要在其他独立的患者样本中进行验证和校准。此次研究优势在于具有专门研究子宫内膜异位症的课题组，使试验能够针对候选生物标志物的检测结果进行大样本的研究分析，从而进一步确定是否可以使用血清CXCL16水平作为诊断子宫内膜异位症的非侵入性方法，避免目前流行的诊断方法所致的延误和手术损伤。

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（收稿日期：2018-04-12 本文编辑：任 念）