乳腺癌组织中Bmi-1、miR-221-3P的表达及意义

李秀翠，赵成，邵华，孙志超，尚玉萍

(连云港市第二人民医院，江苏连云港 222023)

乳腺癌是全球女性最常见的恶性肿瘤和主要肿瘤死因之一，2012年女性乳腺癌新发病例约19万例，占女性发病率首位[1]，且乳腺癌的病死率逐年上升[2]。Bmi1是多梳基因(PcG)家族的成员之一，参与调节细胞增殖、分化与衰老，维持多种正常干细胞和肿瘤干细胞的自我更新和增殖活性[3]，并且在食管癌、舌鳞状细胞癌、口腔鳞癌等多种人类恶性肿瘤中表达上调[4～6]。miRNA是一种小分子非编码单链RNA，能结合靶基因转录本的互补位点，抑制靶基因的表达[7]，从而参与肿瘤细胞的增殖、凋亡等过程。有研究[8]表明miR-221在胰腺癌细胞的增殖过程中有重要作用。miR-221-3p是miR-221的一种成熟剪接体，参与乳腺癌细胞黏附、迁移、增殖等过程[9]。但有关Bmi1与miR-221-3p在乳腺癌中表达的相关性及临床意义研究报道较少。2011年2月～2017年7月，我们观察了乳腺癌组织中Bmi1和miR-221-3p表达变化，分析二者的相关性，探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 临床资料 收集2011年2月～2013年1月本院接受乳腺切除手术治疗的81例女性乳腺癌患者癌组织与癌旁正常组织，平均年龄51岁，其中<40岁者15例、≥40岁者66例；高中及高中以下学历68例，高中以上学历13例；肿瘤原发部位位于左、右两侧分别为39例和42例；单个肿瘤结节71例，2个肿瘤结节及以上10例；有淋巴结转移45例，无淋巴结转移36例；侵及皮肤、胸壁37例，未有局部浸润44例；根据国际抗癌协会的TNM分期标准分为Ⅰ期+Ⅱ期48例、Ⅲ期+Ⅳ期33例。纳入标准：①术前未接受化疗、放疗、内分泌治疗等抗肿瘤治疗；②术后经病理鉴定确诊为乳腺癌；③病历和随访资料完整。排除标准：①合并子宫颈癌、卵巢癌等恶性肿瘤；②其他肿瘤史；③合并严重肝、肾等重要器官功能不全。以患者术后出院开始观察随访，随访方式包括电话或来院复诊，所有随访资料完整。末次随访时间为2017年7月，随访时间5～60个月。本研究获医院伦理委员会批准，患者知情同意。

1.2 乳腺癌组织和癌旁组织中Bmi1和miR-221-3p表达检测 取一定量乳腺癌组织和癌旁组织，按照miRNA cDNA Synthesis kit说明书提取RNA，并用分光光度计测量RNA的浓度。按照逆转录试剂盒说明书操作，将总RNA反转录为cDNA。根据SYBR Green Master Mix试剂盒说明书上的反应体系及反应程序，行实时荧光定量PCR，检测相关基因表达。Bmi1、miR-221-3p引物序列由引物公司设计，U6正向引物序列为5′-CTCGCTTCGGCAGCACA-3′，反向引物序列为5′-AACGCTTCACGAATTTGCGT-3′；Bmi1正向引物序列为5′-GCTGCCAATGGCTCTAATGAA-3′，反向引物序列为5′-TGCTGGGCATCGTAAGTATCTT-3′；miR-221-3p的正向引物序列为5′-ATCCAGTGCGTGTCGTG-3′，反向引物序列为5′-TGCTTATGGCAGTGTATTGTT-3′。用2-ΔΔCT表示受检组织中Bmi1、miR-221-3p的相对表达量。

2 结果

2.1 乳腺癌组织、癌旁组织中Bmi1和miR-221-3p表达比较 乳腺癌组织、癌旁组织中Bmi1的相对表达量分别为24.23±1.23、1.04±0.12，二者比较差异有统计学意义(t=168.881，P<0.05)。乳腺癌组织、癌旁组织中miR-221-3p相对表达量分别为0.43±0.02、1.06±0.23，二者比较差异有统计学意义(t=-24.559，P<0.05)。

2.2 乳腺癌组织中Bmi1与miR-221-3p表达的关系 Pearson相关分析结果显示，乳腺癌组织中Bmi1与miR-221-3p表达呈负相关(r=-0.597,P<0.01)。

2.3 乳腺癌组织中Bmi1、miR-221-3p表达与患者临床病理特征的关系 乳腺癌组织中Bmi1和miR-221-3p表达与肿瘤结节数、肿瘤局部浸润、有无淋巴结转移及临床分期有关(P均<0.05)，与患者年龄、文化程度、肿瘤原发部位无关(P均>0.05)，见表1。

2.4 乳腺癌组织中Bmi1、miR-221-3p表达与患者预后的关系 以乳腺癌组织中Bmi1、miR-221-3p相对表达量的平均值为界，将乳腺癌患者分为Bmi1高表达(39例)与Bmi1低表达(42例)、miR-221-3p高表达(43例)与miR-221-3p低表达(38例)。Bmi1高表达者5年总生存率为61.54%(24/39)、低表达者为90.48%(38/42)，二者比较差异有统计学意义(χ2=9.432，P=0.002)。miR-221-3p高表达者5年总生存率为86.75%(37/43)、低表达者为57.89%(22/38)，二者比较差异有统计学意义(χ2=8.081，P=0.004)。

3 讨论

PcG家族是维持基因稳定的重要因子，能维持干细胞的自我更新和增殖，在胚胎发育、肿瘤发生和转移中发挥重要作用[3]。Bmi1是PcG家族成员，在细胞核中广泛表达，调控细胞增殖[10]，作为原癌基因，在人类多种恶性肿瘤如肺癌、乳腺癌、卵巢癌、鼻咽癌、结直肠癌中表达明显上调，能影响肿瘤细胞的生长和凋亡，在介导肿瘤的发生发展中发挥重要作用。Bmi1参与肿瘤的侵袭、转移，与肿瘤临床分期、淋巴结转移等恶性程度相关，可作为肿瘤患者预后的判断指标之一。许国定等[11]认为Bmi1可能参与乳腺癌细胞的浸润和转移，可能成为预测乳腺癌高度转移的新标志物。陈圣霖[3]研究结果显示，乳腺癌组织中Bmi1高表达，能作为浸润性乳腺癌预后判断的指标。本研究结果显示，81例乳腺癌组织中Bmi1表达高于癌旁组织，差异有统计学意义，说明Bmi1高表达可作为乳腺癌的诊断指标。同时，Bmi1在乳腺癌组织中的表达与肿瘤结节、局部浸润、淋巴结转移及临床分期相关。本研究还发现，Bmi1高表达者5年总生存率低于Bmi1低表达者，差异有统计学意义，此与刘洁等[12]研究结果一致，说明Bmi1可以作为预测乳腺癌预后的靶分子。

表1 Bmi1、miR-221-3p表达与乳腺癌患者临床病理特征的关系±s)

研究表明，miRNA能够结合反向mRNA，在转录水平调节mRNA表达，使mRNA转录或降解[13]，通过发挥癌基因或抑癌基因的作用，参与肿瘤细胞的增殖、凋亡、分化等过程[14]，可以作为治疗癌症的潜在靶分子。miRNA能够通过下调下游靶基因的表达，抑制甲状腺髓样癌细胞的增殖和迁移，加速癌细胞的凋亡[15]。莫鸿英等[16]报道显示，干扰miRNA221使E-钙黏素表达减少，从而抑制宫颈癌细胞侵袭转移。衰老细胞产生的衰老相关分泌表型(SASP)，由促炎细胞因子、生长因子、趋化因子和基质重塑酶等细胞因子组成，它们可以导致机体慢性炎症和疾病，并能反作用于衰老细胞及相邻细胞，进而加速衰老进程[17]。细胞衰老细胞炎症相关因子的分泌能促进肿瘤的发生[18]，研究证实，miRNA-221能改变PTEN-Akt、p53信号传导，促进衰老细胞凋亡[19]，从而抑制肿瘤的增殖。本研究结果显示，在乳腺癌组织中miRNA-221-3p表达量下调，此与李林株等[20]研究报道一致，提示miRNA-221-3p可能发挥抑癌基因作用;且miRNA-221-3p在乳腺癌组织中的表达与肿瘤结节、局部浸润、淋巴结转移及临床分期相关。本研究结果显示，miRNA-221-3p高表达者5年总生存率较低表达者高，差异有统计学意义，miRNA-221-3p可能成为乳腺癌治疗的靶标分子。

相关性分析结果显示，乳腺癌组织中Bmi1、miRNA-221-3p表达呈负相关。Bmi1可能是miRNA-221-3p的下游靶基因，miRNA-221-3p低表达导致Bmi1表达增加，促进肿瘤细胞的增殖[20]。

综上所述，乳腺癌组织中miRNA-221-3p表达下调，而Bmi1表达上调；乳腺癌组织中的miRNA-221-3p低表达和Bmi1高表达预示肿瘤结节较多且处于较高临床分期、淋巴结转移可能性较大并伴有局部浸润，患者预后较差。推测miRNA-221-3p与Bmi1有可能成为乳腺癌治疗的靶标分子。