一起霍乱疫情分离株的耐药性和分子流行病学分析

王云霞 严寒秋 刘海波 史文凤 周海健 王斌

2017年7月，北京市房山区疾控中心接到辖区某医院疑似霍乱病例的报告，通过流行病学调查和实验室检测，最终确定其病原菌是O1群小川型霍乱弧菌，CT(cholera toxin)毒素阴性，溯源表明疫情与厨师有关。现分析该起霍乱疫情分离株的耐药性和分子流行病学特征，为霍乱疫情防控提供可借鉴的经验。

1 材料与方法

1.1材料

1.1.1样本来源：样本来自疫情中采集的患者便标本1件、密切接触者肛拭子37件(家属3件,其他密接34件)、患者就餐地厨师肛拭子4件、患者就餐地后厨外环境和食物原料等各种涂抹67件，共109件样本，均放置pH=8.8碱性蛋白胨水增菌液中，常温保存，立即送检。

1.1.2试剂：碱性蛋白胨水和庆大霉素平板购自友康恒业生物科技(北京)有限公司，霍乱弧菌血清购自泰国S&A REAGENTS LAB公司和郑州万泰生物科技有限公司，霍乱弧菌O1/O139群和霍乱弧菌 CTX基因核酸检测试剂盒购自江苏硕世生物科技股份有限公司；革兰阴性需氧菌药敏检测板购自上海星佰生物技术有限公司；限制性内切酶NotI、SfiⅠ购自美国NEB公司。上述试剂均在有效期内使用。

1.1.3仪器：瑞士Roche LightCycler 480实时荧光定量PCR仪；美国Bio-rad CHEF Mapper system脉冲场凝胶电泳仪；美国Bio-rad Gel Doc 2000凝胶成像系统；上海星佰生物技术有限公司微生物鉴定药敏分析系统。

1.2方法

1.2.1病原菌常规分离培养: 按《霍乱防治手册》(第6版)和《霍乱诊断标准》(WS 289-2008)对109件样本进行增菌、分离培养、玻片凝集实验和生化鉴定[1-2]。

1.2.2霍乱弧菌实时荧光PCR法: (1)实时荧光PCR检测霍乱弧菌O1/O139群特异性基因：取37 ℃培养6 h的碱性蛋白胨水增菌液2 mL，于无菌2 mL离心管中，共109件样本。……