PKC拮抗剂对SD大鼠疼痛及DRGs外周神经元兴奋性的作用研究

李萌

苏州大学附属第一医院骨科苏州大学骨科研究所，江苏 苏州 215006

本研究通过测量骨癌大鼠DRG神经元的行为特征和兴奋性，研究了鞘内注射PKC拮抗剂GF109203X对大鼠DRG外周神经元疼痛和兴奋性的影响。

1 实验准备

1.1 实验分组 将100只雌性SD大鼠平均分为4组：

① 假手术组，25只平均体重200.4 g的大鼠，右胫骨骨髓腔注射PBS；

②骨癌BC组，25只平均体重201.1 g的大鼠；

③ DMSO组，25只平均体重0.4 g的大鼠。F 199.2 g，骨癌大鼠。鞘内注射二甲基亚砜DMSO；

④ GF109203X组，大鼠20只，平均体重197.9 g，鞘内注射GF109203X治疗组GF109203X组。

模型建立后15天给药。将10 uL GF109203X10nM注入GF109203X组，在DMSO组给予等量的DMSO。

1.2 实验结果检测 SD大鼠7天前适应了实验环境，从而降低了由于紧急效应而导致的实验结果的准确性。采用“上下”法测定大鼠机械痛阈值，直至出现收缩反应。并将些过程重复3-5次，以减少因个体差异或实验操作不当对实验结果的准确性的影响。

1.3 实验结果数据处理工具选择 实验数据提交和整理工具是HEKA EPC 10，处理和汇总为Patch Master软件，统计分析采用Origin Pro 8和Matlab软件。

2 实验方法

在SD大鼠股骨内注射乳腺癌细胞15天，建立模型。将背根神经节L4-L6段DRG神经元消化成单个细胞，采用单细胞膜片钳技术检测神经兴奋性。鞘内注射GF109203X抑制剂，测量机械性疼痛和神经兴奋性。

3 实验结果与分析

3.1 结果 表1所示：①BC组的缩足阈值明显低于sham组P＜0.01。②BC组的静息电位明显高于sham组；BC组的域值明显低于sham组；BC组的激强度明显小于sham组；100pA斜坡刺激下，BC组激发的动作电位个数显著多于sham组。P＜0.05，0.01，0.001。③GF109203X组的缩足阈值明显高于DMSO组P＜0.05。④GF109203X组的静息电位低于DMSO组很多；GF109203X组的域值高于DMSO组很多；GF109203X组的激强度高于DMSO组很多；与DMSO组相比，GF109203X在100pA斜坡刺激下的动作电位个数要低很多。P＜0.05，0.01，0.001。

表1 实验数据对比

3.2 分析

3.2.1 骨癌导致大鼠痛阈降低 在SD大鼠股骨内注射乳腺癌（Walker 256）细胞15天检测其机械性疼痛，发现骨癌组的机械痛范围要低于假手术组（P＜0.05）很多。可见，骨癌所致大鼠疼痛阈值低于假手术组P＜0.05。

3.2.2 骨癌疼痛增加大鼠DRG神经元的兴奋性 建模后15天，测定假手术组和BC组SD大鼠右腰椎L4-L6期的神经元兴奋性，BC组DRG神经元的静息膜电位要高于sham组很多，提示BC组神经元的去极化、BC组神经元的阈值有所下降，BC组的兴奋强度增加明显。所以说，骨癌对外周DRG神经元的兴奋性的提高有一定的作用。

3.2.3 PKC对骨癌痛阈值的逆转 把同样剂量的二甲基亚砜和GF109203X分别注射到二甲基亚砜组（DMSO）和GF109203X组大鼠鞘内1小时后的测量骨癌模型的机械阈值。实验结果表明，机械阈值是GF109203X组要高于DMSO组很多，说明GF109203X能对SD大鼠的骨癌疼痛的机械阈值进行调节。

3.2.4 GF109203X能降低神经元的兴奋性 建模后15天，DMSO组和GF109203X组鞘内同剂量注射DMSO和GF109203X。采用DMSO组和GF109203X组大鼠右腰段DRG(L4-L6)检测神经元的兴奋性。结果表明，GF109203X组DGR神经元的静息膜电位是低于DMSO组的，DMSO组神经元的阈值高于DMSO组许多。在100pA时，斜坡刺激所激发动作电位的数量有所减少，说明GF109203X能降低外围神经元的兴奋性。

4 概述

结果表明，鞘内注射GF109203X能显著降低SD大鼠外周神经元的机械阈值和兴奋性。这将在降低骨癌疼痛患者的疼痛方面发挥重要的作用。