霍山石斛多糖对溃疡性结肠炎小鼠的抗炎作用

谷仿丽 黄仁术 何晓梅

摘要 [目的]探究霍山石斛多糖对溃疡性结肠炎小鼠的抗炎作用。[方法]应用葡聚糖硫酸钠建立溃疡性结肠炎模型，灌胃给予模型小鼠不同剂量的霍山石斛多糖，观察霍山石斛多糖对模型小鼠DAI、血清细胞因子IL-1、TNF-α水平及结肠病理组织学的影响，分析霍山石斛对溃疡性结肠炎小鼠的抗炎作用。[结果]与模型组相比，霍山石斛多糖高、中剂量组显著降低DAI、血清细胞因子IL-1、 TNF-α水平（ P <0.05），改善结肠病理组织学。[结论]霍山石斛多糖通过抗炎治疗溃疡性结肠炎小鼠。

關键词 霍山石斛多糖;溃疡性结肠炎;小鼠;抗炎

中图分类号 R285 文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2020）14-0176-02

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2020.14.049

Abstract [Objective]To study the anti-inflammatory effect of Dendrobium huoshanense polysaccharide on ulcerative colitis mice.[Method]The ulcerative colitis model was established by dextran sodium sulfate，and different doses of Dendrobium huoshanense polysaccharide were given to the model mice by gavage.The effects of Dendrobium huoshanense polysaccharide on Dai，IL-1，TNF-α levels in serum and histopathology of colon were observed，and the anti-inflammatory effects of Dendrobium huoshanense on ulcerative colitis mice were analyzed.[Result]Compared with the model group，the levels of Dai，IL-1 and TNF-α in the high and medium dose group were significantly reduced （ P <0.05），and the histopathology of colon was improved.[Conclusion]Dendrobium huoshanense polysaccharide has anti-inflammatory effect on ulcerative colitis mice.

Key words Dendrobium huoshanense polysaccharide;Ulcerative colitis;Mice;Anti-inflammatory

溃疡性结肠炎（ulcerative colitis，UC）发病机制尚不清楚，多认为是肠道感染、自身免疫、遗传、精神心理等相互作用的结果[1]。溃疡性结肠炎发病时炎症因子水平升高，导致结肠黏膜损伤，甚至糜烂[2];患者表现为腹泻、腹痛、黏液脓便血、体重减轻等。目前主要通过抗炎促进结肠组织恢复、增加肠道黏膜免疫力治疗溃疡性结肠炎[3]。

霍山石斛被誉为“中华九大仙草之首”，具有益胃生津、滋阴清热、润肺止咳、明目强身等功效[4]。现代研究表明，霍山石斛主要含有多糖类物质、石斛碱、多种游离氨基酸及丰富的微量元素等成分[5]，具有抗炎、增强免疫、调节胃肠道、降血糖、肝保护等作用[6-7]。因此，笔者研究霍山石斛多糖对溃疡性结肠炎小鼠的抗炎作用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物。昆明种健康小鼠，体重（22+2）g，购自安徽医科大学动物研究所动物实验中心。

1.1.2 仪器设备。

电子分析天平（郑州万博仪器设备有限公司）;旋转蒸发仪（R52A，上海亚荣）;Synergy H1 多功能酶标仪 （美国佰腾仪器有限公司）。

1.1.3 药品和试剂。霍山石斛采自皖西学院石斛种植园;葡聚糖硫酸钠由美国sigma公司生产;柳氮磺砒啶肠溶片由上海信宜天平制药有限公司生产;粪便隐血定性检测试剂盒（邻联甲苯胺法）由北京雷根生物技术有限公司生产;IL-1、 TNF-α检测试剂盒由南京建成生物工程研究所生产;乙醇、硫酸、蒽酮等均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 霍山石斛多糖的制备。

取新鲜的大别山产霍山石斛，除去杂质，清水洗净，50 ℃烘干，粉碎过40目筛，药粉继续烘干至恒重。以料液比1∶30，80 ℃水提3次，每次2 h。合并提取液，减压浓缩至相对密度1.12。浓缩液中加入95%乙醇，边加边搅拌，加至浓缩液的2倍，保鲜膜密封，放置于4 ℃冰箱24 h，3 000 r/min离心10 min，取沉淀物去蛋白，纤维柱法分离得霍山石斛多糖，采用蒽酮-硫酸法[8]测定多糖含量。

1.2.2 溃疡性结肠炎模型复制。

取体重相近的健康小鼠60只，雌雄性各半，随机分为空白组（10只）和模型组（50只）。正常组小鼠正常摄食、饮水，模型组小鼠自由饮用配制的5%葡聚糖硫酸钠（dextran sulfate sodium，DDS）水溶液5 d，建成溃疡性结肠炎模型[9]。

1.2.3 动物分组与给药。

将溃疡性结肠炎模型小鼠随机分为霍山石斛多糖高剂量（200 mg/kg）、中剂量（100 mg/kg）、低剂量（50 mg/kg）组，柳氮磺砒啶（sulfasalazine，SASP）组，模型组。于试验第6天，分别灌胃给予霍山石斛多糖高、中、低剂量组霍山石斛多糖200、100、50 mg/kg，SASP组300 mg/kg，正常组蒸馏水，一天1次，连续灌胃14 d。

1.2.4 指标采集与检测。

试验期间，分别在造模第5天、给药7 d、14 d末，检测试验小鼠体重、大便性状及便血，并根据表1评分計算DAI=（体质量下降百分率+大便性状+便血）/3[10]。给药第14天各小组实验鼠末次给药1 h后，摘眼球取血后即刻颈椎脱臼处死小鼠，解剖，取距肛门8 cm处部分结肠，用生理盐水冲洗，除去多余脂肪及附着粪便，观察结肠黏膜病变情况，随后浸泡在10%甲醛溶液中固定，乙醇脱水，石蜡包埋、切片，苏木精-伊红染色，显微镜下观察每个结肠组织状况。血液离心后取血清，ELISA法检测白介素-1（Interleukin-1beta，IL-1）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alph，TNF-α）水平。

1.3 数据统计与分析 所有数据采用SPSS 23进行统计分析，组间比较 采用t检验，P <0.05为有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 霍山石斛多糖对溃疡性结肠炎小鼠DAI的影响

模型组小鼠自由饮用葡聚糖硫酸钠水溶液5 d后，出现了明显的溃疡性结肠炎症状，黏液脓血便、身体时而蜷曲状、体重下降、精神不佳;持续灌胃给药14 d 后，各给药组与模型组比较，症状明显改善，体重增长，大便性状趋于正常。从图1可看出，小鼠造模5 d，DAI评分显著升高（ P <0.01）;给药7 d，霍山石斛多糖高、中剂量组DAI显著降低（ P <0.05），低剂量组有降低趋势，但不明显（ P >0.05）;给药14 d，霍山石斛高、中、低剂量组均显著降低DAI评分，与SASP组相当;表明霍山石斛多糖具有改善溃疡性结肠炎小鼠一般症状的作用。

2.2 霍山石斛多糖对溃疡性结肠炎小鼠细胞因子IL-1、TNF-α水平的影响

从表2可以看出，与正常组比较，模型组血清IL-1、TNF-α水平显著升高（ P< 0.01或 P< 0.05），表明模型组小鼠产生了炎症反应;与模型组比较，霍山石斛多糖高、中、低剂量组显著降低UC小鼠血清IL-1水平（ P< 0.05），霍山石斛多糖高、中剂量组显著降低UC小鼠血清TNF-α水平（与模型组比较 P< 0.05），降低效果与阳性药SASP相当，表明霍山石斛多糖具有明显的抗炎作用。

2.3 结肠黏膜大体观察及组织病理学观察

从图2可以看出，正常组结肠黏膜完整，肉眼观察未见水肿及溃疡。模型组结肠黏膜损伤最严重，溃疡数目多且范围广，组织水肿明显，有炎症细胞浸润，部分腺体被毁坏。各治疗组与模型组相比结肠黏膜光滑平整，能看到愈合的溃疡组织，无炎症细胞浸润，无明显溃疡及水肿，其中SASP组和霍山石斛高剂量组与正常组最为接近。

3 小结

有研究表明，遗传、环境、精神等因素会激发机体的免疫系统，促使免疫细胞释放IL-1、TNF-α等炎性细胞因子，损伤肠黏膜，引起结肠黏膜渗漏、水肿，甚至溃疡，引发黏液脓血便、体重减轻等[11]。该研究结果发现，霍山石斛多糖可显著降低炎性细胞因子IL-1、TNF-α水平，减轻结肠黏膜损伤，促进溃疡愈合，降低了DAI评分，表明霍山石斛多糖具有通过抗炎治疗溃疡性结肠炎作用。

参考文献

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