金华猪公猪精液品质和精子运动参数研究

项 云，章啸君，屠平光，郭晓令，徐宁迎，赵静帆，吴承武，王文强

(1.金华市农业科学研究院，浙江 金华 321000；2.浙江大学动物科学学院； 3.南京农业大学淮安研究院)

金华猪是著名的国内地方猪种，具有肉质细嫩鲜美等优良特征，随着生活水平的提高，人们对金华猪等地方猪肉的需求逐年提高，因此饲养量也逐年增加。由于近年来猪疫情不断，为了避免疫情对地方猪的影响、保护地方猪种质资源，各地对地方猪开展了精液冷冻保存等工作。而公猪精液质量对精液冷冻和解冻效果有密切关系，因此本论文对金华猪选育场的两个金华猪品系公猪进行了精子运动参数的测定和分析，为后续金华猪公猪精液冷冻保存提供参考。

1 材料和方法

1.1试验材料 供试精液来源于金华市农科院金华猪选育场4头金华猪A型公猪和4头金华猪B型公猪。B型猪是在A型猪基础上培育而成的金华猪新品系。

1.2检测方法 8头金华猪公猪按A型和B型品系分组，每组4头。参试公猪采精时间为2019年3月25日，各组采集精液1头，3月26日，各组采集精液3头。A型公猪月龄范围为9.8月龄至39.3月龄，B型公猪月龄范围为11.3月龄至28.9月龄。参试公猪采精频率一致，公猪采用发情母猪诱情辅助人工采精，原精液进行1∶1稀释(稀释液为公猪精液冷冻专用稀释剂配制而成)，放入保温箱运输，及时送至实验室检测(采精与精液检测间隔时间约为1.5 h左右)。检测时将精液瓶轻微摇晃混匀，分别吸取1 mL精液至无菌的2 mL离心管中，置于恒温台统一回温至37℃后开始检测。采用红宝石(MACRO)精子计数板(网格0.01 mm2，间隙0.01 mm)，采用美国MOFA GLOBAL公司的计算机辅助精子分析系统(Computer-assisted Sperm Analysis，CASA)进行精子各参数计算和精液质量分析。

1.3测定参数及统计分析 公猪精液测定参数为公猪月龄、采精量mL、前进率(直线前进运动精子数占总精子数的百分率，又称精子活力)、运动率(会动的精子数占总精子数的百分率，又称精子活率)、DSL(直线运动距离，距离测定为CASA系统设定时间参数内测定的距离，有关距离测定下同)、 DAP(平均运动距离)、DCL(曲线运动距离)、VCL(曲线运动速度，精子头沿其实际行走曲线的运动速度，μm/s)、VAP(平均路径速度，精子头沿其空间平均轨迹的运动速度，μm/s)、VSL(直线运动速度，精子头从开始检测时的位置至最后所处位置之间的直线运动的平均速度，μm/s)、LIN(线性运动比例VSL/VCL)、STR(直线运动比例VSL/VAP)、WOB(摆动比例VAP/VCL)、ALH(头部摆动振幅，精子头部实际运动轨迹对平均路径的侧摆幅度，μm)、AOC(头部平均摆动度数)。

由于公猪精液质量受品种、营养、年龄、配种次数、疾病等多因素影响，统计分析建立在日粮营养和饲养管理一致、配种次数和健康状况等因素相同的基础上进行精液质量分析。为提高分析的准确性，对月龄进行回归处理。以精子参数为依变量，以品系为自变量，建立公猪品系为单因子最小二乘协方差数学模型：

Yij=μ+Li+btij+eij

式中：Yij=品系i参试公猪j的精液参数；μ=采精时公猪月龄都为零的总体平均数，即未校正总体平均数；Li=品系i的效应；b=精子参数对公猪月龄的回归系数；tij=品系i参试公猪j的采精月龄；eij=随机误差。

采用SAS 8.01软件对精液各参数最小二乘协方差模型进行统计分析，对P值大于0.1以上的回归系数的参数不进行最小二乘协方差模型分析，采用样本数相同的平均数t检验即可。

2 结果与分析

2.1精液各参数最小二乘协方差模型回归系数计算 经计算，运动率回归系数为-0.3645，达10%显著水准，B型运动率和A型的最小二乘均数分别为94.98%和90.00%，差异不显著。

由表1可见，其余参数回归系数显著水准p值均较大，为P≥0.2147以上。前进率、运动率、DAP、DCL、VAP、VCL和AOC的回归系数均为负值，其余回归系数均为正值。

2.2采精月龄、采精量和精子浓度等统计分析 公猪的月龄、采精量、精子浓度、前进率和运动率见表2。

表2 采精月龄、采精量、浓度、前进率和运动率平均数比较

由表2可知，A型和B型公猪的月龄、采精量、精子浓度、前进率和运动率平均数比较差异不显著(P>0.05)，但B型精子浓度比A型精子浓度高出115.3%。

2.3精子运动参数分析 由表3可见，B型和A型精子运动参数平均数比较均没达到5%显著水准，B型精子ALH头部摆动振幅平均数比A型高出13.3%。

表3 金华猪2个品系公猪精子运动参数平均数比较

3 小结与讨论

3.1本次参试公猪月龄在9.8月龄至39.3月龄之间，精子运动率对月龄的回归系数b为-0.3645，表明金华猪公猪精子运动率在1岁至3.3岁之间随着年龄增长而下降。采精量对月龄的回归系数b为1.768，表明精液量随年龄增长而有增加的趋势。

3.2由表1可见，精子前进率、运动率、平均运动距离(速度)、曲线运动距离(速度)和头部平均摆动度数的回归系数为负值，表明部分精子运动参数随年龄增长而有下降趋势。

3.3相关数据表明，金华猪B型公猪精子浓度比A型提高115.3%，B型和A型公猪精子的采精量、精子浓度、前进率、运动率和精子运动参数平均数比较差异不显著，表明培育后的金华猪新品系B型公猪除了精子浓度提高外采精量、前进率、运动率和运动参数基本保留原金华猪A型的精液质量。

3.4由表3可见，B型公猪精子头部摆动振幅比A型高出13.3%，表明B型公猪精子头部摆动幅度比改良前的金华猪A型有增加的趋势。

3.5金华猪精子前进率平均数大于77.27%，梅山猪、巴克夏、大约克、长白和杜洛克猪精子前进率平均数范围为53.44%至61.45%[1-5]，据高圣玥等测定的杜洛克和长白猪前进率分别为87.6%和86.3%[6]。精子前进率是精液品质的重要指标，本次试验表明具有较高的公猪精子前进率为金华猪优良的繁殖性能奠定了基础。精子前进率会受品种、日粮营养、饲养管理等因素影响，因此金华猪精子前进率是否与其它猪品种有差异还有待进一步探讨。

3.6据郭苹等测定梅山猪精子VSL、VAP、VCL分别为18.88 μm/s、33.89 μm/s、63.23 μm/s[1]，梅山猪LIN、STR、WOB分别为0.2986、0.5571和0.5359[1]，本次试验的金华猪VSL、VAP、VCL均高于梅山猪，但本次试验的金华猪LIN、STR、WOB与郭苹等测定的梅山猪精子运动参数[1]相差不大。运动速度与采精后的稀释液等因素有关，本次试验金华猪精液稀释液有减缓精子运动的趋势作用，因本次试验金华猪精液用作冷冻精液制作，金华猪与梅山猪精子运动速度差异是否因品种因素导致还有待进一步探讨。

3.7据伏彭辉等测定的大约克、长白和杜洛克猪精子运动参数VSL、VAP、VCL测定值[3]高于本次试验的金华猪，而LIN、STR、WOB[3]数值与本次试验的金华猪差别不大。但据陈永霞等测定的大约克、长白和杜洛克猪VSL、VAP、VCL测定值[5]要低于金华猪，但LIN、STR、WOB、ALH[5]数值与金华猪差别不大。表明精子运动参数与品种、饲养管理等诸多因素有关，金华猪精子VSL、VAP、VCL三个运动参数与外来猪是否有差异还有待进一步探讨。