囊胚发育速度对解冻移植周期妊娠结局的影响研究

丁婷 苏雪松 付蒙

【摘 要】目的：探讨囊胚发育速度对解冻移植周期妊娠结局的影响。方法：采用单因素logistic回归分析评估230例囊胚解凍移植周期妊娠结局的影响因素。 结果：移植D5囊胚临床妊娠的可能性显著高于移植D6囊胚（OR： 0.560， P<0.05）。结论：囊胚发育速度可能对囊胚解冻移植周期的妊娠结局有一定的影响。

【关键词】 玻璃化冷冻;囊胚发育速度;囊胚解冻移植;妊娠结局

【中图分类号】R285.5 【文献识别码】B【文章编号】1002-8714（2020）09-0009-01

玻璃化冷冻是一种快速冷冻方法，采用高浓度冷冻保护剂，使胚胎保持在相对稳定的玻璃样状态，减少冰晶对胚胎的机械性损伤。囊胚移植有助于选择发育潜能更好的胚胎。玻璃化冷冻囊胚移植能够改善囊胚存活率和妊娠结局。然而，囊胚发育速度对妊娠结局的影响目前尚无定论。本研究采用单因素logistic回归分析评估囊胚发育速度对囊胚解冻移植周期妊娠结局的影响。

1 材料与方法

1.1研究对象

对2017年3月～2019年10月共230例囊胚解冻移植周期进行单因素logistic回归分析。排除同时移植D5及D6囊胚的解冻移植周期。

1.2 方法

1.2.1 胚胎继续培养及囊胚评分

在取卵后第3天，挑选质量较好的2～4枚胚胎进行移植或冷冻，将剩余的胚胎继续培养至D5或D6，根据Garnder囊胚分级法进行囊胚评分。

1.2.2 囊胚玻璃化冷冻和解冻

冷冻标准为3～6期CB级以上的囊胚。冷冻前用激光系统（RI）对囊胚进行人工皱缩，采用玻璃化冷冻和解冻试剂（Kitazato）进行囊胚冷冻和解冻，解冻后进行辅助孵化，转移至G-2培养液（Vitrolife）液滴中，在6% CO2，5% O2和89% N2条件下培养2 h，细胞损伤<50%，囊胚腔扩张，则进行移植。

1.2.3 子宫内膜准备及胚胎移植

子宫内膜准备包括自然周期、人工周期或促排卵周期。在子宫内膜达到合适的厚度或排卵后进行黄体支持，6天后进行囊胚移植，移植后继续黄体支持至孕10～12周。移植后12天检测血清HCG，血清HCG阳性后4周检查超声，超声检查可见宫内孕囊为临床妊娠。

1.3 统计学方法

采用SPSS 20.0软件进行统计学分析。采用单因素logistic回归分析评估囊胚解冻移植周期临床妊娠的影响因素，因变量“临床妊娠情况”编码为0时代表未妊娠，1代表妊娠。P<0.05为有显著统计学意义。

2 结果

囊胚冷冻天数对妊娠为负向影响，D6冷冻囊胚妊娠的可能性是D5冷冻囊胚的0.560倍，降低了44%，移植D5囊胚临床妊娠的可能性显著高于移植D6囊胚;子宫内膜厚度及移植胚胎数对临床妊娠为正向影响;年龄、不孕年限、不孕类型及受精方式对临床妊娠的影响未达显著（见表）。

3 讨论

在Haas等[1]的研究中，与D5相比，D6进行玻璃化冷冻的囊胚临床妊娠的可能性显著较低（OR： 0.54， P<0.05）。优质囊胚进行单囊胚移植，D6的临床妊娠率及继续妊娠率（22%， 19% ）都显著低于D5（42%， 40%）。Alice Tubbing等[2]的结果表明，D5冷冻是囊胚解冻移植临床妊娠和活产的独立预测指标，在控制混杂因素后结果仍然是可靠的。

我们的研究结果显示，与D5冷冻囊胚相比，D6冷冻囊胚妊娠的可能性降低了44%（OR： 0.560， P<0.05），移植D5囊胚临床妊娠的可能性显著高于移植D6囊胚。

尽管玻璃化冷冻已经广泛应用于囊胚冷冻，玻璃化冷冻技术还远远没有标准化。扩张的囊胚腔中有较多的液体，在冷冻过程中容易受到损伤，人工皱缩能够减少液体体积，缩短平衡时间，提高囊胚解冻后的存活率。

在囊胚解冻移植周期中，囊胚形成的速度可能对胚胎的发育潜能和妊娠结局有一定的影响，D6囊胚发育较慢及相对较差的妊娠结局可能与胚胎自身的因素、非整倍性发生率及体外培养环境有关。由于D5囊胚具有显著较好的临床结局，冷冻1枚D5囊胚或2枚D6囊胚可能能够节省胚胎学家的时间及冷冻保存空间，并有利于降低多胎妊娠率。

参考文献

[1] Haas J， Meriano J， Laskin C et al. Clinical pregnancy rate following frozen embryo transfer is higher with blastocysts vitrified on day 5 than on day 6[J]. Journal of assisted reproduction and genetics， 2016， 33 （12）： 1553-1557.

[2] Tubbing A， Shaw-Jackson C， Ameye L et al. Increased live births after day 5 versus day 6 transfers of vitrified-warmed blastocysts[J]. Journal of assisted reproduction and genetics， 2018， 35 （3）： 417-424.