HPLC法测定鸿茅药酒中洛伐他汀含量

王建国，康 蕊，呼格吉勒图，梁红玉，红 丽，闫 丽，张 焕，周旋泽，梁国栋*

(1.内蒙古鸿茅药业有限责任公司 013750；2.内蒙古盛唐国际蒙医药研究院有限公司 010010)

鸿茅药酒由红曲、小茴香、肉桂、高良姜、荜茇等六十七味药材组成的复方制剂，标准收载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十四册(标准编号：WS3-B-2792-97)，目前标准中没有含量测定项。鸿茅药酒处方中红曲药材占比最高，红曲中富含他汀类物质，主要成分是洛伐他汀。为保证红曲产品的功效，生产上常要求其中洛伐他汀的含量达到一定水平。本文根据红曲在鸿茅药酒处方中占有较多(4.8mg/ml)的特点，以红曲中洛伐他汀为指标成分，进行HPLC含量测定方法的验证。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪(岛津LC-20AT)和(美国Waters H class型)；百万分之一电子天平(Mettler-T0ledo MS105DU型)；万分之一电子天平(SHIMADZU AUY220型)。

1.2 试剂与试药

鸿茅药酒各批号供试品由内蒙古鸿茅国药股份有限公司提供；洛伐他汀对照品(批号100600-201805,99.7%)，由中国药品生物制品检定所提供；甲醇为色谱纯,水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法学考察

2.1色谱条件：采用Shim-pack GIST C18,250mm×4.6mm I.D，5μm色谱柱和Bonshell C18Plus 4.6mm×50mm，2.7μm色谱柱；以甲醇-水(75∶25)为流动相，洛伐他汀的分离度大于1.5；30℃柱温；检测波长237nm；理论板数以洛伐他汀峰计4000以上。

2.2实验用溶液的制备：取鸿茅药酒250ml，精密量取，置坩埚中，水浴浓缩至约50ml，缓缓加入无水乙醇100ml，搅拌，转入三角瓶中，超声溶解30分钟，置冷藏箱(2-6℃)中放置2小时，使糖分充分沉淀。取上清液，滤过，滤液置250ml坩埚中，沉淀和烧瓶用无水乙醇20ml分次洗涤，滤过，合并滤液，浓缩至近干，加20ml、20ml、10ml甲醇分次溶解，转移到50ml量瓶中，并稀释至刻度，微孔滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。另外，取洛伐他汀对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1ml含 40μg的溶液，作为标准品溶液。再取按处方比例并以相同工艺制备的缺红曲的阴性对照样品，按供试品溶液制备法制得阴性对照溶液。

2.3专属性考察：在上述色谱条件下,分别精密吸取对照品溶液、阴性对照溶液、供试品溶液各10μl，分别注入液相色谱仪。

测得结果为：阴性对照色谱图中在与洛伐他汀对照品以及供试品色谱图相应的保留时间处无色谱峰出现，表明其他组分对洛伐他汀的测定干扰。见供试品图谱、洛伐他汀对照品图谱、阴性对照图谱。

2.4线性关系：取洛伐他汀对照品约4.0mg，精密称定，置100ml量瓶中，加甲醇使溶解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液(对照品溶液实际浓度为40.1μg/ml)；分别吸取对照品溶液6.0μl、8.0μl、10.0μl、12.0μl、14.0μl注入液相色谱仪，记录色谱图。洛伐他汀在0.2406μg-0.5614μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为y=2.65×106x-207.11，r=0.9999。标准曲线数值见表1。标准曲线图见图2。

表1 洛伐他汀标准曲线数值表

2.5取同一份供试品(批号：20191101)，连续进样测定。5针精密度RSD(%)=0.42；15h稳定性RSD(%)=0.35；5份供试品重复性RSD(%)=0.38。

2.6加样回收试验：精密量取含有洛伐他汀为9.86μg/ml的鸿茅药酒6份，各125ml，加入1.53mg/ml洛伐他汀对照品溶液5ml，按供试品制备方法制备并测定。加样回收率结果见表2。

表2 洛伐他汀加样回收试验结果

结果：本方法的平均回收率为102.4%，符合《中国药典》2015年版四部9101“药品质量标准分析方法验证指导原则”中“表2样品中待测定成分含量和回收率限度”的要求。

3 样品含量测定

取样品约250ml，各两份，精密量取，制备并测定，结果见表3。

表3 样品中洛伐他汀的含量测定结果

4 讨论

4.1 提取方法的选择

由于鸿茅药酒是由67味药材和糖、白酒构成，药材种类多，平均每味药材的量较少，再加上糖的干扰，供试品前处理比较难。经过对前处理方法比较，大孔树脂柱吸附法、氧化铝柱分离法、萃取法等处理样品方法，操作过程繁琐、时间较长，回收率仅能达到60%，测定结果平行性差，因此，以上处理方法作为含量测定均无法采用。

本文采用直接浓缩、乙醇溶解被测组分的方法，可以排除大量糖的干扰，再将乙醇回收、残渣甲醇溶解作为供试品溶液的制备方法。该方法的优点是操作简单，能够排除糖的影响；对待测组分有富集作用，回收率较高；制备的供试品溶液黏度很小，没有造成对色谱柱的堵塞等现象。故，前处理样品采用此制备方法。

4.2 柱温的选择

采用30℃柱温可以保证柱压较低，消除残留在样品溶液的糖分影响，分离效果稳定，保留时间变化小。温度的变化，对洛伐他汀出峰时间有影响，但对峰面积的影响较小。

5 结果

HPLC对鸿茅药酒中红曲药材的指标性成分测定，经分析方法验证，表明该方法重现性好，专属性强，方中其它组分对洛伐他汀的测定无干扰，为修订鸿茅药酒质量标准提供参考。