miR-205-5p靶向CDKN1C调节滋养层细胞生物学行为的研究

曹文超,张青林

(首都医科大学附属北京妇产医院麻醉科,北京 100026;*通讯作者,E-mail:qinglinzhanglynn@163.com)

子痫前期(preeclampsia,PE)是一种妊娠期妇女特有疾病,以血压升高和蛋白尿为特征,该病对孕妇及胎儿危害较大,严重时甚至危及生命[1]。研究表明,滋养层细胞侵入过浅以及胎盘蜕膜部位血管发育障碍进而导致的胎盘缺血缺氧是引起PE的重要原因[2]。PE发生后,滋养层细胞侵袭、增殖能力下降且过度凋亡[3,4]。目前,滋养层细胞一直是探究PE发病的热点与重点,因此,探究滋养层细胞生物学行为的变化对于明确PE发病的具体机制具有重要意义。

当前研究发现,在PE发病中,多种microRNA的表达发生改变[5,6]。Mouillet等[7]研究发现,miR-205在缺氧条件下的滋养层细胞中表达增强,但其具体如何参与PE发病和对滋养层细胞是否有影响目前尚未明确。细胞周期蛋白依赖激酶抑制因子1C(cyclin-dependent kinase inhibitor 1C,CDKN1C)也被称为P57KIP2,其能够抑制大多数CDK-cyclin激酶活性,以往研究证实其在乳腺癌、胃癌、卵巢癌等癌症中表达下调[8-10]。刘广钰等[11]研究发现过表达P57KIP2使滋养层细胞的增殖、迁移、侵袭能力明显增强。本研究从滋养层细胞生物学行为改变的角度出发,探讨miR-205-5p靶向CDKN1C在调节滋养层细胞中的作用,进而发现参与PE的潜在机制。

1 材料与方法

1.1 实验材料

HTR8-SVneoh购自美国ATCC细胞库;DMEM/F12培养基(PM150110)、胎牛血清(SFBS)均购自上海语纯生物科技有限公司;lipofectamin2000试剂盒(11668027)、Trizol试剂(15596026)、细胞裂解液(78501)均购自Thermo Fisher公司;双荧光素酶报告基因试剂盒(ab228530),一抗CDKN1C(ab75974)、Bax(ab32053)、Bcl-2(ab185002)、TGF-β1(ab92486)、Vimentin(ab92547)、N-cadherin(ab18203)、E-cadherin(ab194982),二抗山羊抗兔IgG(ab6721)均购自Abcam公司;焦炭酸二乙酯(1609-47-8)购自上海信裕生物科技有限公司;逆转……