下调miR-616-3p对补体攻击骨髓间充质干细胞的影响

周建国，刘如月，韩 枫，刘一亮

（1.商丘市第一人民医院骨一科，河南商丘476000；2.南华大学附属南华医院手足显微外科，湖南衡阳421002）

骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs）作为一类多功能干细胞，具有分化成多种细胞的潜能，如心肌细胞、成骨细胞、脂细胞等［1］。因而BMSCs能作为同种异体移植的种子细胞，参与多种细胞以及器官损伤等疾病的治疗［2］。但BMSCs的临床应用面临较多困难，例如BMSCs异体移植后存活率较低等。针对存活率较低的原因，目前认为可能是由于宿主补体系统识别并攻击BMSCs所致［4］。研究表明，补体系统的活化主要通过激活补体C3来实现，而膜补体调节蛋白如CD46、CD35以及CD55对活化物质C3b的分解起调节作用［5］。micorRNAs是一类由18～24个核苷酸组成的内源性非编码RNA小分子，能够通过与靶基因信使RNA互补序列结合抑制靶基因的转录，在转录后的调控中起重要作用［6］。有研究显示，抑制miR-616-3p表达能通过上调补体调节蛋白CD46促进人慢性髓原白血病细胞K562抵抗补体依赖的细胞毒效应［5］。因此，miR-616-3p可能通过调控CD46表达参与补体系统对BMSCs的攻击作用，但目前尚无相关研究。本研究通过构建miR-616-3p低表达的rBMSCs，探讨在大鼠异体血清（allogeneic rat serum,ARS）干预后，miR-616-3p低表达对rBMSCs存活的影响，并阐明miR-616-3p对ARS攻击rBMSCs作用产生影响的分子机制。

1 资料与方法

1.1 rBMSCs的分离及鉴定

SPF级健康雄性 Sprague Dawley（SD）大鼠 5只，鼠龄4-6周，体重（200.80±20.53）g，购自长沙市天勤生物技术有限公司，动物生产许可证号：SCXK（湘）2014-0010。用10%的水合氯醛腹腔注射麻醉SD大鼠，碘伏消毒后，从骨盆上离断取下股骨。将股骨置于碘伏内浸泡5 min后，剔除股骨周围软组织，剪断股骨。……