定量蛋白质组学筛选及分析山慈菇酯提物抗4T1乳腺癌的新启示

曹晓东，张 楠，杨冬冬，刘 颖，王 赫，张子英*

1内蒙古医科大学新药安全评价研究中心；2内蒙古医科大学公共卫生学院；3内蒙古医科大学基础医学院，呼和浩特 010110；4扎兰屯职业学院，呼伦贝尔 162650

乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一，是全球第2大高发癌，死亡率在全球排第5[1]。世界范围内乳腺癌的发病率和死亡率分别占12.2%和9.6%，呈快速增长的趋势，且发病趋于年轻化，给广大女性造成了严重困扰[2]。三阴性乳腺癌(hriple-negative breast cancer,TNBC)在诊断初期就合并远处器官转移，患者的存活率仅为23%，化学治疗TNBC虽有一定的疗效，但并未延长患者的总生存期和无进展生存期。

国医大师周仲瑛教授系我国著名中医药专家，1 374诊次恶性肿瘤病案中共用药物453味，其中使用频次最高的为山慈菇，1 062次，占77.29%[3]。山慈菇为中、蒙、苗医临床常用抗癌药，蒙医常用抗癌方剂益气托毒中药汤剂、蒙药乌门-17味散中均含有山慈菇。山慈菇能明显抑制人源TNBC类细胞MDA-MB-231和ER+的T-47D细胞的增殖和转移[4,5]。4T1属于鼠源的TNBC，本课题组特在相对具有免疫功能BALB/c小鼠上复制了4T1乳腺癌模型，应用TMT标记定量蛋白质组学筛选及分析Cr Ap相关的抗乳腺癌机制。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂

4T1乳腺癌细胞株(中国科学院细胞库)；DMEM培养基(Gibco公司)；0.25% Trypsin-EDTA(Gibco公司)；FBS(ExCell Bio公司)；Penicillin-Streptomycin双抗(ExCell Bio公司)；DMSO(北京索莱宝科技有限公司)；Trizol试剂盒(Generay公司)；Prime Script@ RTMaster Mix反转录试剂盒(Vazyme公司)；FastStart Universal SYBR Green Master (Rox)(Roche公司)；BCA试剂盒(碧云天公司)；TMT标记试剂盒(Thermo公司)；三乙基碳酸氢铵(TEAB)(Sigma公司)；DMEM培养基(Gibco公司)；0.25% Trypsin-EDTA(Gibco公司)；FBS(批号：11G313，ExCell Bio公司)；DMSO(北京索莱宝科技有限公司)；三氟乙酸(Sigma-Aldrich公司)；乙腈(Fisher Chemical公司)；二硫苏糖醇(Sigma公司)；……