不同核质蛋白分离条件对研究核转位分子的分布的影响#

辜雷燕 郭丽娟 刘晴蓉 李宇豪 李婧瑜 黄宁

（四川大学华西基础医学与法医学院病理生理学教研室，四川 成都 610041）

许多信号，例如内毒素、细胞因子等，与细胞膜上的受体结合后，在细胞内产生一系列信号转导，最终会转入核内诱导相应靶基因表达，从而表现出相应的生物学效应，如巨噬细胞的极化等。真核细胞中，由于细胞质和细胞核被细胞核双层核模系统隔开[1]，信号分子跨核膜转运对细胞功能的发挥至关重要[2]。核转位通路的基本结构主要有三个：一是具有“分子筛”功能的核孔蛋白复合体（Nuclear pore complex, NPC），在NPC上存在靶蛋白与核转位受体的结合位点[3]；二是核转运受体；三是核转运信号[4]。信号转导和转录激活因子(STAT)是细胞外配体反应性转录因子，在胞质中被Janus激酶磷酸化、形成二聚体，然后跨过核膜转运到细胞核作用于靶基因，介导巨噬细胞极化等多种生物学过程[5-6]。因此，检测STAT这一类核转位分子的胞质、胞核的分布，对研究相关信号通路及细胞活动等十分重要。

研究核转位蛋白的核质分布变化常采用核质蛋白分离-WB的方法。其中核质蛋白分离常用的方法是两步裂解离心法，即先用破膜离心分离胞质蛋白（上清）和细胞核（沉淀），再次裂解细胞核得到核蛋白[7]。然而不同细胞的实验条件不尽相同，现有的分离条件对巨噬细胞核质分离效果不佳，这对开展核转位分子如STAT6的信号通路的相关研究造成一定限制。因此，本研究采用不同裂解液、裂解时间及离心条件，探究巨噬细胞系RAW264.7的核质蛋白分离的最佳条件。……