miR-93对睾丸畸胎瘤细胞增殖、心肌分化的影响及其与NFATC3的调控关系

许耿，仲逢钰，顾海涛

1 南京医科大学第一附属医院小儿心胸外科，南京210009；2 南京医科大学第一附属医院儿童保健科

先天性心脏病（CHD）是由心血管异常发育引起的先天性疾病，发病率约为0.8%，是婴儿因出生缺陷死亡的主要原因［1］。心肌分化与增殖是心脏发育的必要过程，该过程的异常往往导致心脏发育畸形。微小RNA（miRNA）是非编码的单链小RNA 分子，可在许多细胞和生理过程中发挥调节作用，包括细胞生长、增殖、分化、凋亡以及组织和器官的形成［2］。研究显示，miRNA 在调节胚胎心脏发育、心脏形态发生以及心肌细胞生长和分化方面发挥重要作用，同时与CHD 及心血管疾病的发生密切相关［3］。既往研究显示，miR-93 在CHD 中差异表达显著，然而其是否参与细胞增殖、心肌分化及其相关下游基因的表达调控目前均尚不明了［4］。活化T 细胞核转录因子3（NFATC3）是NFAT 家族的一员，在免疫细胞以外的多种细胞中表达，并在胚胎发育期间发挥关键作用，参与包括炎症反应、心脏瓣膜形成、心肌发育和其他生物过程［5］。P19 细胞是小鼠的睾丸畸胎瘤细胞，可以分化成心肌细胞，被普遍应用于研究心脏发育［6］。2020年9 月—2021年6 月，我们利用P19 细胞作为心肌分化的细胞模型，探讨了miR-93对P19 细胞增殖及心肌分化的影响，并对miR-93 及其潜在下游基因NFATC3的靶向调控关系进行了分析，以期为CHD治疗提供新的靶点。

1 材料与方法

1.1 材料 细胞及试剂：P19 细胞购自美国典型培养物保藏中心，逆转录试剂盒、定量PCR 试剂盒、SYBR Green Master Mix 购自日本TaKaRa 公司；α-MEM 培养基、FBS胎牛血清、PBS缓冲液、青霉素/链霉素（P/S）、CCK-8溶液购自美国Gibco公司；……