枳实生品及麸炒品对脾虚大鼠肝组织物质能量代谢酶活性及CaMK Ⅱ通路CaM、CaMK Ⅱ蛋白表达的比较研究

林桂梅 来有雪 高慧 鞠成国 单国顺

基金项目：

国家自然科学基金资助项目（编号：81503248）；辽宁省自然科学基金项目（编号：2019-MS-230）；辽宁省教育厅面上项目（编号：LJKMZ20221314）。

作者简介：林桂梅（1982—），女，汉族，博士，副教授，研究方向为中药炮制机理。E-mail： linguimei1982@163.com

通信作者：

【摘  要】

目的：观察枳实生品及麸炒品提取液对脾虚大鼠肝组织能量代谢相关酶活性及对CaMK Ⅱ通路CaM、CaMK Ⅱ蛋白表达水平的影響。方法：SD大鼠随机分为7组，空白对照组，利血平模型组，阳性药组，枳实生品高、低剂量组及枳实麸炒品高、低剂量组。除空白对照组外，其余各组均采用利血平注射制成脾虚模型。测定各组大鼠肝匀浆中物质能量代谢相关指标的活性差异，采用蛋白免疫印迹法比较研究肝组织中CaM、CaMK Ⅱ及p-CaMK Ⅱ蛋白表达差异。结果：与模型组比较，枳实麸炒品高剂量组钠钾ATP酶（Na+-K+-ATPase）活性升高；枳实麸炒品高、低剂量组钙镁ATP酶（Ca2+-Mg2+-ATPase）活性升高；枳实麸炒品高剂量组柠檬酸合成酶（CS）及异柠檬酸脱氢酶（ICD）均升高；枳实生品低剂量组CaM蛋白表达量升高；枳实麸炒品高剂量组CaMK Ⅱ表达量升高；枳实生制品高、低剂量组p-CaMK Ⅱ蛋白表达量均升高。结论：枳实麸炒品不论在三磷酸腺苷酶活性或是CaMK II信号通路关键分子蛋白表达方面均较生品有显著提高，说明麸炒品能更好改善脾虚大鼠症状。

【关键词】  枳实；钙调蛋白；肝组织；脾气虚证

【中图分类号】R285.5    【文献标志码】 A    【文章编号】1007-8517（2023）24-0008-06

DOI：10.3969/j.issn.1007-8517.2023.24.zgmzmjyyzz202324003

Effect of Raw and Stir-frying with Bran Aurantii Fructus Immaturus on the Metabolism of Substance and

Energy and Expression of CaM and CaMK II Protein in CaMK II Signaling Pathways in the

Liver Tissue of Rats with Spleen Deficiency Syndrome

LIN Guimei1，2  LAI Youxue3  GAO Hui1，2  JU Chengguo1，2  SHAN Guoshun1，2

1. Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600， China；

2. Traditional Chinese Medicine Processing Technology Inheritance Base （Liaoning） of the

State Administration of Traditional Chinese Medicine， Dalian 116600， China；

3.Dalian Sixth Peoples Hospital， Dalian 116600， China

Abstract：

Objective  To investigate the effect of raw and stir -frying with bran Aurantii Fructus Immaturus on the energy metabolizing enzyme activity and expression of CaM and CaMK II protein in CaMK II signaling pathways in the liver tissue of rats with spleen deficiency syndrome.

Methods SD rats were randomly divided into 7 groups：normal control group，Reserpine model group，Positive medicine group，Aurantii Fructus Immaturus raw and bran fried high and low dose groups. The spleen deficiency syndrome rat models were generated by reserpine injection，and ATPase activity were evaluated.Western blotting was used to test CaM，CaMK II，p-CaMK II expression in liver tissue of the spleen deficiency syndrome rats. Results Compared with the model group，he activity of Na+-K+-ATPase was increased in the high-dose of stir-frying with bran Aurantii Fructus Immaturus，the activity of Ca2+-Mg2+-ATPase was increased in the high and low dose of stir-frying with bran Aurantii Fructus Immaturus. the expression of CS and ICD increased in high-dose of stir-frying with bran Aurantii Fructus Immaturus. The expression of CaM protein was increased in low dose of raw Aurantii Fructus Immaturus，the expression of CaMK Ⅱ increased in high-dose of stir-frying with bran Aurantii Fructus Immaturus， the expression of p-CaMK Ⅱ increased in high-dose of raw and stir-frying with bran Aurantii Fructus Immaturus. Conclusion The stir-frying with bran Aurantii Fructus Immaturus could significantly improve the activity of adenosine triphosphatase and the expression of key molecular proteins in CaMK II signaling pathway.It shows that stir-frying with bran Aurantii Fructus Immaturus can better improve the symptoms of deficiency syndrome rats.

Keywords：

Aurantii Fructus Immaturus；CaM；CaMK II；p-CaMK II；Liver；Spleen deficiency syndrome

枳实为临床常用的胃肠气分药，具有破气消积，化痰散痞的作用，在临床上治疗胃肠疾病的经验由来已久。但枳实生品的破气作用较强，有损伤正气之虑，因此常采用麸炒的炮制方法，缓和其峻烈之性［1-2］。中医认为脾胃为后天之本，为气血生化之源，能够为机体组织提供营养和能量，严重脾虚则会导致各种生理功能障碍［3］。肝脏作为人体最大的代谢器官，与消化、吸收密切相关［4］。因此实验通过脾虚动物实验模型，选取与物质、能量代谢密切相关的肝脏组织中的ATP酶与三羧酸循环相关的CS、ICD和钙调蛋白为研究对象［5-6］，比较研究枳实生品与麸炒品对脾虚大鼠肝组织物质能量代谢相关酶及CaM、p-CaMK、CaMK Ⅱ蛋白表达差异，进而从能量代谢角度研究枳实麸炒的炮制机理。

1  仪器与材料

1.1  仪器  Multiskan MK3酶标仪（赛默飞世尔仪器有限公司）；UV-1800型紫外可见分光光度计（北京瑞利分析仪器公司）；TDK-2水平脱色摇床（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；TGL-16M 台式高速冷冻离心机（上海卢湘仪离心机仪器有限公司）；DG-300C电泳仪（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；DYCZ-24DN型迷你双垂直电泳槽（北京六一仪器厂）；DYCZ-40D型迷你转印电泳槽（北京六一仪器厂）。

1.2  材料  钙镁ATP酶试剂盒（Ca2+-Mg2+-ATPase，批号：20160625，南京建成生物工程研究所）；钠钾ATP酶试剂盒（Na+-K+-ATPase，批号：20160617，南京建成生物工程研究所）；柠檬酸合成酶试剂盒（CS，批号： 20160719， 南京建成生物工程研究所）；异柠檬酸脱氢酶试剂盒（ICD，批号： 20160721， 南京建成生物工程研究所）；利血平注射液（批号：1003011，天津金耀氨基酸有限公司）；四君子汤（京都念慈菴总厂有限公司，批号HKNT-12633）；苯甲基磺酰氟（PMSF）（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司），二硫苏糖醇（DTT）、Anti-CaM antibody、Anti-CaMK Ⅱ antibody、p-CaMK Ⅱ antibody，购自美国sigma公司；乙二醇二乙醚二胺四乙酸（EGTA）购自wako公司；DMEM培养基，标准胎牛血清（FBS）和青链霉素溶液购自Gibco公司；辣根过氧化物酶标记山羊抗兔IgG购自河北博海生物工程有限公司；蛋白提取试剂盒，蛋白分子量Marker，加强型ECL检测试剂盒，购自南京凯基生物科技发展有限公司；BCA蛋白定量试剂盒（北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司）；4×Tris·/SDS配置：300 mL水中溶解91 gTris碱，用1 mol/L盐酸调节至pH为8.8，加水至500 mL，用0.45 μm滤膜滤过。加入2 gSDS，30%丙烯酰胺/双丙烯酰胺溶液：100 mL体积中丙烯酰胺30 g，双丙烯酰胺0.8 g；凝胶缓冲液：用300 mL水溶解90.8 gTris碱，用6 mol/L盐酸调节至pH8.6，加水至500 mL。枳实购自江西新干，经本校中药鉴定教研室翟延君教授鉴定为芸香科植物酸橙Citrus aurantium L.的干燥幼果。

1.3  实验动物  SD大鼠，雌雄兼用，体质量180～220 g，由辽宁长生生物技术有限公司提供，许可证号：SCXK（辽）2015-0001，适应性饲养7 d。

2  方法

2.1  枳实、麸炒枳实提取液制备  称取枳实、麸炒枳实各100 g，粉碎至粗粉，置烧杯中加入大约6倍体积蒸馏水，煎煮3次，每次30min，提取液合并过滤，浓缩水提液（相当于生药1 g/mL），给药时分高、低剂量组，分别为1 g/mL，0.25 g/mL。

2.2  枳实生品及麸炒品提取液对利血平致脾虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性影响  70只小鼠随机分为7组：枳实生品高、低剂量组（1 g/mL，0.25 g/mL），麸炒枳实高、低剂量组（1 g/mL，0.25 g/mL），空白对照组，四君子汤阳性药组（0.5 mg/kg）和利血平模型组（0.5 mg/kg），每组10只，除利血平模型组外均按0.7 mL/100 g体重剂量灌胃给药，空白对照组给予等体积的生理盐水。除空白对照组外各给药组在给药同时皮下注射利血平，注射用量为0.50 mg/kg，每天给药1次，连续10 d，末次给药前禁食不禁水24 h。大鼠处死，低温条件下快速取肝组织，以冰冷的生理盐水冲洗，滤纸吸干，准确称重后置于匀浆器中用9倍生理盐水匀浆（匀浆器的末端置于放冰块的冷水中），制成1%的肝组织匀浆液，离心机 3500 r/min 离心 10min，取上清液，考马斯亮蓝法蛋白定量，其余上清液置4℃冰箱保存备用，Ca2+-Mg2+-ATPase和 Na+-K+-ATPase活性测定按照试剂盒操作步骤进行［7］。

ATPase活力计算公式如下［8］：

ATPase活力=测定OD值-對照OD值标准OD值

×标准品浓度（1 μmoL/mL）×反应体系中样本稀释倍数×6

÷待测样本蛋白浓度（mg prot/mL）

2.3  枳实生品及麸炒品提取液不同剂量组对利血平致脾虚大鼠肝组织三羧酸相关代谢酶影响  按2.2项下方法，取肝脏迅速放入液氮中速冻，制成10%的肝组织匀浆液，酶联免疫法测定试剂盒。

2.4  枳实生品及麸炒品提取液不同剂量组对利血平致脾虚大鼠肝组织CaM、CaMK Ⅱ、p-CaMK Ⅱ蛋白表达影响  大鼠处死后，迅速取出肝组织，放入预冷裂解液中裂解组织蛋白，选用BCA蛋白定量试剂盒进行蛋白浓度测定。取等量蛋白样品（30 μg/样品），加入上样缓冲液，97℃加热6min变性，待冷却至室温后，离心上样，进行SDS-PAGE电泳，采用电转仪进行转模，5%脱脂奶粉封闭30min后，加入一抗（用封闭液稀释），室温孵育1 h，1×TBST漂洗3次，时间依次为15min、5min、5min。加入适当比例稀释的二抗，室温孵育1 h，1×TBST漂洗3次，时间依次为15min、5min、5min。化学发光底物进行化学发光，暗室显影后，使用Quantity one软件对其进行光密度分析［9］。

2.5  统计学分析  实验采用SPSS 13.0统计软件处理，结果以均数加减标准差（x±s）表示，采用单因素方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

3  结果

3.1  枳实生品及麸炒品提取液对利血平致脾虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性影响  Na+-K+-ATPase活性的比较结果显示，与空白组比较，模型组Na+-K+-ATPase活性降低明显，组间有显著性差异（P＜0.05），说明造模成功。枳实生品高、低剂量组及枳实麸炒品低剂量组Na+-K+-ATPase活性均升高，与空白组比较有显著性差异（P＜0.05），枳实麸炒品高剂量组Na+-K+-ATPase活性稍有降低，与空白组比较无显著性差异；与模型组比较，枳实麸炒品高剂量组与之存在显著性差异（P＜0.05）。結果见表1。

Ca2+-Mg2+-ATPase活性的比较结果显示，与空白组比较，模型组、枳实生品高、低剂量组、枳实麸炒品低剂量组Ca2+-Mg2+-ATPase活性均降低，并且组间有显著性差异（P＜0.05）；与模型组比较，枳实麸炒品高、低剂量组Ca2+-Mg2+-ATPase活性均有提高，且组间有显著性差异（P＜0.01，P＜0.05）。结果见表1。

3.2  枳实生品及麸炒品提取液对利血平致脾虚大鼠肝组织三羧酸循环相关代谢酶活性影响  CS活性的比较结果显示，与空白组比较，模型组CS活性明显降低，组间有显著性差异（P＜0.05），说明造模成功。枳实麸炒品高剂量组CS升高最为明显，与空白组比较无显著性差异；与模型组比较，枳实麸炒品高剂量组与之存在显著性差异（P＜0.05）。结果见表2。

ICD活性的比较结果显示，与空白组比较，模型组、枳实生品及麸炒品低、高剂量组ICD活性均降低，并且均有显著性差异（P＜0.05）；与模型组比较，枳实麸炒品高剂量组ICD活性有所提高，有显著性差（P＜0.05）。结果见表2。

3.3  枳实生品及麸炒品提取液不同剂量组对利血平致脾虚大鼠肝组织CaM、CaMK Ⅱ、p-CaMK Ⅱ蛋白表达影响  CaM蛋白表达量结果显示，与空白组比较，模型组、枳实生品高剂量组、枳实麸炒品高、低剂量组CaM蛋白表达量均降低，组间比较有显著性差异（P＜0.05）；与模型组比较，枳实生品低剂量组及阳性药组与之有显著性差异（P＜0.05）。CaMK Ⅱ蛋白表达量结果显示，与空白组比较，利血平造模组、枳实生品高、低剂量组、枳实麸炒品低剂量组CaMK Ⅱ蛋白表达量均较低，并且组间有显著性差异（P＜0.05）；与模型组比较，枳实麸炒品高剂量组、阳性药组有显著性差异（P＜0.05）。p-CaMK Ⅱ蛋白表达量结果显示，与空白组比较，模型组，枳实生品高、低剂量组、枳实麸炒品低剂量组p-CaMK Ⅱ蛋白表达量较低，组间比较有显著性差异（P＜0.05）；与模型组比较，枳实生品高、低剂量组，麸炒品高、低剂量组，阳性药组均有显著性差异（P＜0.05）、（P＜0.01）。结果见表3，如图1。

4  讨论

在中医临床实践和不断发展过程中，诸多医家均认识到脾（胃）生理功能的重要性以及脾虚证的临床证候特点［10］。“脾主运化”与消化系统生理功能关系密切，如若建立脾虚证动物模型首先应考虑与脾运化功能失职相关的指标［11-13］。利血平属于外周交感神经阻滞药，其造成动物脾虚模型一定程度上反映类似的病理改变，和中医脾虚证有高度相符性，是较经典的方法之一，具有条件易控制、模型较稳定的特点［14-18］。因此实验中选择动物注射利血平造成脾虚模型，以便能准确真实地反应枳实和麸炒枳实对脾虚大鼠病症的影响。

Na+-K+-ATPase是细胞膜主动转运中的重要离子泵，而Ca2+-Mg2+-ATPase参与糖的转运等多种能量代谢过程，是衡量线粒体功能和能量代谢水平的一个重要的指标［19-21］。实验选取Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase为考察指标，比较研究枳实生品及麸炒品提取液不同剂量组对利血平致脾虚大鼠Na+-K+-ATPase和Ca2+-Mg2+-ATPase表达的影响。结果显示，与空白组比较，模型组可以明显抑制Na+-K+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase活性，而枳实生品与麸炒品提取液，不论低剂量还是高剂量组均可以不同程度提高上述两种酶的活性，与枳实生品比较麸炒枳实提高更加明显。实验结果反应出枳实饮片在一定程度可以通过提高肝组织细胞中维持细胞基本结构和功能稳态的Na+-K+-ATPase及Ca2+-Mg2+-ATPase活性来改善大鼠脾虚症状，并且麸炒品改善效果优于生品。这一结果也说明枳实经麸炒后，健脾和胃作用增强。

三羧酸循环既是糖类、脂类和蛋白质分解代谢的共同途径，又是它们代谢联系的枢纽［22］。CS是线粒体中三羧酸循环重要反应步骤的关键酶，通常认为全身有氧能力的变化与CS活性的变化之间存在关系［23］。ICD是三羧酸循环过程中重要的调节酶之一，在能量代谢和生物合成代谢过程中发挥着重要作用［24］。实验结果可以看出生品与麸炒品枳实均可不同程度升高病理状态下CS，麸炒枳实较生品提高更为明显。枳实麸炒品较生品可以升高脾虚证大鼠ICD的表达，可见麸炒枳实较生品能够更好地促进三羧酸循环进程，进而改善脾虚症状。

CaM牵连许多细胞内生理过程，包括调节细胞各种酶的活性，调节平滑肌收缩和舒张，调节神经系统功能等［25-27］。实验研究结果显示，模型组CaMK Ⅱ信号通路关键分子CaM、CaMK Ⅱ及p-CaMK Ⅱ蛋白为低表达，而枳实生品和麸炒品可在一定程度提高上述三个蛋白表达。在CaM蛋白表达方面，枳实生品低剂量显示高表达，而在CaMK Ⅱ和p-CaMK Ⅱ蛋白表达方面均是麸炒品高于生品，并且随着剂量升高而升高，麸炒品高剂量升高最为明显。可见麸炒品不论在三磷酸腺苷酶方面或是CaMK Ⅱ信号通路关键分子蛋白表达方面较生品提高更多，说明麸炒品能更好地改善脾虚大鼠症状。

综上所述，利用脾虚模型大鼠比较研究枳实生品及麸炒品对肝组织三磷酸腺苷酶活性及CaMK Ⅱ通路CaM、CaMK Ⅱ蛋白表达的异同，对研究枳实麸炒的炮制机理具有现实意义。通过实验研究可以发现枳实生品及麸炒品均可以通过调节与物质、能量代谢密切相关的肝脏组织中的物质能量代谢酶及钙调蛋白而更好地改善脾气虚症状，并且麸炒品作用明显强于生品。上述研究结果为解释枳实经麸炒后生峻熟缓，增强健脾和胃作用的药理药效变化机制提供实验依据。同时，随着CaM第二信使重要性的确定，PLCγ1/IP3Ｒ信号分子对其的调控也将成为下一步实验的研究重点，以便为进一步研究枳实去燥性和胃的炮制作用提供理论基础。

参考文献

［1］

李东鑫， 凌江红， 王煜姣， 等. 枳实含药血清对大鼠胃窦平滑肌细胞收缩效应及细胞内钙离子浓度、钙调蛋白表达的影响［J］. 世界华人消化杂志， 2015， 23 （8）： 1224-1230.

［2］胡源祥， 陈海芳， 宋玉鹏， 等. 枳实及其主要活性成分促进脾虚模型大鼠胃肠运动的机制研究［J］.中国药房， 2017， 28 （13）： 1747-1750.

［3］刘海涛， 施家希， 黄张杰， 等. 补中益气汤不同配伍对脾虚大鼠免疫器官及小肠黏膜转运体蛋白表达的影响［J］. 中药材， 2017， 40 （2）： 466-469.

［4］成映霞， 段永强， 梁玉杰， 等. 脾氣虚大鼠肝组织三磷酸腺苷酶活性和CaMK II通路CaM、CaMK II蛋白表达的变化［J］. 中国实验动物学报， 2015， 23 （1）： 40-45.

［5］刘欣， 胡燕， 崔一然， 等. 辛热药药性表达与钙调蛋白之间关系的实验研究［J］. 中国中药杂志， 2014， 39 （5）： 873-878.

［6］袁丽， 刘奇， 范喆， 等. 百合知母汤对抑郁症大鼠海马组织钙调蛋白信号通路中关键分子水平的影响及其抗抑郁机制［J］. 吉林大学学报， 2016， 42 （4）： 704-710.

［7］张萍， 王海云， 苏博. 延胡索提取物对AMI大鼠模型心肌梗死面积及Na+-K+-ATPase、Ca2+-ATPase活性的影响［J］. 中西医结合心脑血管病杂志， 2017， 15 （4）： 410-415.

［8］史琴， 王慧， 武静， 等. PCPA失眠后大鼠不同时间大脑皮质钠-钾ATP酶和钙-镁ATP酶活性变化及酸枣仁汤的干预作用［J］. 时珍国医国药， 2016， 27 （5） 1050-1052.

［9］段永强， 成映霞， 梁玉杰， 等. 益气健脾中药对脾虚大鼠骨骼肌组织中Ca2+/CaMKⅡ通路关键分子的干预作用［J］. 中药材， 2015， 38 （3）： 562-566.

［10］段永强. Ca2+/CaM信号通路在大鼠脾虚证躯体泛化效应中的响应及益气健脾中药干预研究 ［D］.兰州： 兰州大学， 2014.

［11］梁雪丹， 林传全， 曾信平， 等. 基于体征半定量指标评价的利血平致脾气虚大鼠模型的研究［J］. 中药新药与临床药理， 2019， 30 （1）： 26-32.

［12］郭健， 赵淑英， 席时芳， 等. 运脾止泻方治疗脾虚腹泻的机制研究［J］. 中国实验方剂学杂志， 2012， 18 （13）： 189-192.

［13］郝艳艳， 何盼， 聂春霞， 等. 基于1H-NMR代谢组学技术研究党参不同炮制品对脾虚大鼠的作用机制［J］. 中国中药杂志， 2019， 44 （19）： 4241-4248.

［14］张帆， 伍春， 明海霞， 等. 参苓白术散对利血平所致脾虚小鼠血清蛋白质组影响［J］. 中成药， 2013， 35 （12）： 2586-2591.

［15］陈玉龙， 张海艇， 李茹柳， 等. 四君子汤对脾虚大鼠腮腺唾液淀粉酶分泌障碍及VIP-cAMP信号通路的影响［J］. 中药材， 2012， 35 （1）： 83-87.

［16］台雪姣， 郭兴荣， 阮绪芝. 脾虚功能失调动物模型研究进展［J］. 中医药导报， 2017， 23 （21）：123-125.

［17］黄丽萍， 余日跃， 李森， 等. 利血平所致大鼠虚寒证模型的研究及热药吴茱萸的干预作用［J］. 中华中医药杂志， 2014， 29 （11）： 3416-3419.

［18］杨俊， 王亚东， 何剑平， 等. 利血平致蒙古沙土鼠脾虚模型感染幽门螺杆菌的实验研究［J］. 中医杂志， 2003， 44 （7）：539-541.

［19］胡齐， 孙莹， 宋雅芳， 等. 四君子汤对脾虚大鼠线粒体氧化损伤及能量代谢的影响［J］. 中华中医药学刊， 2017， 35 （8）： 1972-1976.

［20］杨俊杰， 赵大庆，张婉迎， 等. 人参多糖对一次性力竭游泳大鼠红细胞功能恢复的影响［J］. 中草药， 2019， 50 （23）： 5778-5784.

［21］黄娟， 施家希， 刘海涛， 等. 补中益气汤不同配伍对脾虚大鼠血清淀粉酶、H+，K+- ATPase及糖代谢酶活性的影响［J］. 中药材， 2017， 40 （9）： 2191-2194.

［22］卢芳，冯镇凯，杨晓旭，等.基于大鼠物质能量代谢的淫羊藿炮制前后对四气研究［J］.中药材，2017，40（10）：2320-2324.

［23］娄旭佳.白藜芦醇对运动性疲劳大鼠线粒体能量代谢的影响［D］.扬州：扬州大学，2022.

［24］李佳，杨芳，郑洪新，等.补肾健脾中药对骨质疏松症小鼠骨骼、骨骼肌异柠檬酸脱氢酶影响的研究［J］.中国中医基础医学杂志，2014，20（10）：1341-1343.

［25］CORCORAN E E， MEANS A R. Defining Ca2+/calmodulin-dependentprotein kinase cascades in transcriptional regulation［J］. BiolChem， 2001， 276 （4）： 2975-2978．

［26］SODERLING T R， CHANG B， BRICKEY D. Cellular signaling through multifunctional Ca2+/calmodulin-dependent protein kinase［J］. Biol Chem， 2001， 276 （5）： 3719-3722．

［27］李庆伟， 张撼， 逄越. 钙调蛋白结构、性质及其细胞生物学功能的研究进展［J］. 辽宁师范大学学报， 2017， 40 （1）： 74-82.

（收稿日期：2023-04-05  编辑：刘  斌）