决明子提取物调控骨骼肌LKB1-AMPK-GLUT4信号通路对糖尿病大鼠胰岛素抵抗的影响

靳思思，张一平，靳绵绵

河南理工大学第一附属医院内分泌科二区1、EICU2，河南 焦作 454000

近年来，随着人们生活水平的不断提高，全球成年人糖尿病的患病人数已到达了2.85 亿人，且仍在不断增高。据报道，我国20岁以上人群糖尿病的患病率已达9.7%，总患病人数已超过了9 000 万，2 型糖尿病已成为威胁我国人民健康的最常见的代谢性内分泌疾病[1]。研究发现，外周组织中胰岛素抵抗(insulin resistance，IR)在2 型糖尿病的发生发展中发挥关键作用，主要表现为肌肉、肝脏、脂肪组织对葡萄糖的利用障碍，为了弥补降糖效应的缺陷，胰岛β细胞需要代偿性地增加胰岛素的分泌，但随着病情的进展，胰岛β细胞的功能逐渐丧失，最终诱发糖耐量异常，导致2型糖尿病的发生[2-3]。因此，如何缓解胰岛素抵抗状态成为治疗2型糖尿病的研究热点。研究显示，骨骼肌组织是导致外周IR 发生的重要靶点，2 型糖尿病患者存在骨骼肌IR，降低葡萄糖的转运和摄取，直接导致了血糖的升高[4]。肝脏激酶B1 (liver kinase B1，LKB1)-腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated protein kinase，AMPK)和葡萄糖转运蛋白-4 (glucose transporter 4，GLUT4)信号通路是促进骨骼肌葡萄糖的摄取、转运和利用的重要信号通路[5]。研究发现，在糖尿病患者骨骼肌LKB1-AMPK-GLUT4 信号通路可发生异常的表达，最终导致胰岛素敏感性降低，血糖升高[6]。因此，通过调节LKB1-AMPK-GLUT4 信号通路的活性可能成为减少胰岛素抵抗、治疗糖尿病患者的新的思路。决明子是一种常见的传统中草药，具有清肝明目、祛风散热及润肠通便的功效，现代药理研究表明，决明子具有显著的降脂、降压、抑制脂质的氧化过程等药理作用[7]。研究显示，决明子提取物可有效减轻糖尿病大鼠心肌缺血/再灌注损伤损伤，其机制可能与其降脂并激活蛋白激酶B(protein kinase B，PKB)及细胞外调节蛋白激酶1/2(extracellular regulated protein kinases 1/2，ERK1/2)信号活性有关[8]。但其对骨骼肌胰岛素抵抗是否具有改善作用尚未见报道。本研究旨在观察决明子提取物对2型糖尿病大鼠的降糖作用及对骨骼肌胰岛素抵抗的改善作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物 SPF 级SD 雄性大鼠50 只，6 周龄，体质量180～200 g，购于华中科技大学动物实验中心(合格证号：SCXK[鄂]2015-0018)。所有大鼠均在温度(22±5)℃，湿度(50±10)%，明暗交替的动物房中进行分笼饲养，大鼠自由饮食水，适应性喂养1周。

1.2 实验试剂 决明子中药饮片由吉林德济药业有限责任公司(许可证号：吉20160132)提供，链脲佐菌素(STZ) (CAS 号：18883-66-4)、兔 抗P-LKB1 抗 体(CAS 号：PA5-14072)、兔抗P-AMPKa12 抗体(CAS 号：SC-101630)、兔抗AMPKa2抗体(CAS号：ABS-117828)、兔抗P-AMPKa2 抗体(CAS 号：P54646)、兔抗GLUT4 抗体(CAS 号：70R-GR014)、兔抗GAPDH 抗体(CAS 号：C1846-50)和蛋白酶/磷酸酶抑制剂(CAS号：PM11595)均由美国Sigma 公司提供，ECL 发光试剂盒(CAS 号：CB95521147)由北京中山生物科技有限公司提供，Ta-KaRa RNA PCR试剂盒(CAS号：CB35816957)由大连宝生物工程有限公司提供，骨骼肌糖原测定试剂盒由南京建成生物工程研究所提供(CAS号：BH-02X9743)，胰岛素试剂盒(CAS 号：EIA-2935)由大连碧云天生物技术研究所提供。

1.3 方法

1.3.1 动物模型的建立及分组 随机抽取10 只健康大鼠作为正常组，给予普通饲料喂养，其余40 只大鼠参照文献[9]方法进行2型糖尿病大鼠模型的制备，大鼠均给予高脂高糖饲料(脂肪41%、蛋白17%、碳水化合物42%)喂养8周，8周后禁食12 h，给予35 mg/kg的链脲佐菌素(Streptozocin，STZ)一次性腹腔注射，并于注射72 h后进行尾静脉采血检测大鼠的空腹血糖[10]，若空腹血糖≥16.7 mmol/L 提示2 型糖尿病大鼠模型制备成功。将40只成功造模的大鼠随机分为模型组、高剂量决明子提取物组(高剂量组)、中剂量决明子提取物组(中剂量组)和低剂量决明子提取物组(低剂量组)，各10只。建模成功后，各组大鼠继续普通饲料喂养4周。

1.3.2 给药方法 给药前先制备决明子提取物，方法为取500 g 决明子中药饮片粉碎后添加10 倍量60%乙醇放置2 h 后，在60℃水浴回流2 h。过滤后残渣加入5倍量60%乙醇并水浴回流2 h，合并滤液后用旋转蒸发仪回收溶剂，获得提取物62 g用于本实验。高、中、低剂量组大鼠参考文献[11]分别给予450 mg/(kg·d)、150 mg/(kg·d)、50 mg/(kg·d)，灌胃1 次/d，正常组及模型组均给予等体积生理盐水灌胃，各组大鼠均连续给药12周。

1.3.3 体质量、空腹血糖和空腹胰岛素(fasting insulin，FINS)水平的检测 正常组及模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃和高、中、低剂量组大鼠给药相应剂量决明子提取物12周后，于末次给药结束后24 h，禁食水12 h后，去除实验过程中意外死亡的6只大鼠(其中正常组1只、模型组2只、决明子高、中、低剂量组各1 只)，称取体质量后采用2%戊巴比妥钠40 mg/kg 腹腔注射麻醉大鼠，进行尾静脉采血，检测空腹血糖水平。采用胰岛素试剂盒检测FINS的水平。

1.3.4 高胰岛素-正葡萄糖钳夹试验检测葡萄糖输注率(glucose infusion rate，GIR)的测定 正常组及模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃和高、中、低剂量组大鼠给药相应剂量决明子提取物4 周后，禁食不禁水12 h后，2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，固定大鼠，分别分离左侧颈动脉和右颈内静脉并在血管内插入PE-50 导管，同时连接胰岛素输液泵和葡萄糖输液泵。在开始实验时检测基础胰岛素和基础血糖(basic blood glucose，BBG)，之后持续输注胰岛素，速度控制在0.12 U/(kg·h)，每5 min 测1 次血糖，并输入10%葡萄糖，注意根据血糖变化调整葡萄糖输入速度，使血糖保持在(BBG±0.5)mmol/L。若连续4次检测血糖均维持在(BBG±0.5) mmol/L，则表示钳夹过程处于稳态，可继续维持到120 min，实验中共检测血糖24次。

1.3.5 空腹注射胰岛素耐量试验(fasting insulin tolerance test，FITT)的测定 正常组及模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃和高、中、低剂量组大鼠给药相应剂量决明子提取物12 周后，禁食不禁水12 h，给予各组大鼠普通胰岛素腹腔注射，分别于0、30 min、60 min、120 min 4个时间段检测。

1.3.6 骨骼肌组织中氧化应激水平的检测 正常组及模型组大鼠给予等体积生理盐水灌胃和高、中、低剂量组大鼠给药相应剂量决明子提取物12 周后，用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉，取血后，处死大鼠，快速取出大鼠腓肠肌，置于PE管中，进行匀浆后，按照试剂盒的说明书采取酶联接免疫吸附剂测定法(enzyme-linked immunosorbent assay，ELISA)检测超氧化 物 歧 化 酶(superoxide dismutase，SOD)、丙 二 醛(malonaldehyde，MDA)、活性氧(reactive oxygen species，ROS)活性及谷胱甘肽(glutathione，GSH)水平。

1.3.7 蛋白免疫印迹法检测LKB1-AMPK-GLUT4信号通路相关蛋白的表达 处死大鼠后，迅速留取腓肠肌组织100 mg，在液氮中进行速冻后进行粉碎，加入冰预冷的细胞裂解液200 μL，并加入相应的磷酸酶抑制剂，4℃、12 000 r/min 离心10 min，提取上清液，BCA 法测定蛋白的总浓度，取100 μL 蛋白+100 μL样品缓冲液(2×)，煮沸5 min 进行蛋白变性后，进行SDS-PAGE 电泳分离目的蛋白，经过转膜、封闭后，加入相应的一抗、TBST 洗膜3 次后，加入相应的二抗，TBST 洗膜3 次后，采用BCIP 酶显法进行显色，采用FlourChem V 2.0 凝胶成像分析软件(America)分析目的条带的灰度值。

1.3.8 实时荧光定量PCR检测GLUT4 mRNA的表达 取100 mg 腓肠肌组织，采用Trizol 法取腓肠肌中的总RNA，按照ReverTra Ace qPCR 逆转录试剂盒说明书进行cDNA 的合成，GLUT4 mRNA 引物由Primer Permier 5.0 软件进行设计，并由上海生工生物工程技术服务有限公司合成，引物序列如下：GLUT4：上游序列5′-TGTTGCGGATGCTATGGG-3′，下游序列5′-CTGCGAGGAAAGGAGGGA-3′；β-actin：上 游 序列：5′-TCATCACTCGGCAATG-3′，5′-ACAGCACTGT GTGTTGGCAT-3′。采 用含有SYBR GreenI 的Accu-Power®2X Green Starq PCR Master Mix反应体系进行PCR 反应的扩增。PCR 扩增条件：95℃预变性10 s，95℃变性15 s；55℃退火20 s，共40个循环。采用2-ΔΔCt法检测腓肠肌组织中相关基因的相对表达量。

1.4 统计学方法 采用SPSS21.0 统计软件包进行数据分析。计量资料以均数±标准差(±s)表示，两组间均数比较采用两独立样本t 检验，同组干预前后均数比较采用配对t 检验，多组间均数比较采用单因素方差分析。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠体质量、空腹血糖和FINS 水平比较 与正常组比较，模型组大鼠体质量明显降低，空腹血糖及FINS 水平明显增高，差异均具有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，决明子各给药组体质量明显增加，空腹血糖及FINS 水平明显降低，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，且各给药组间比较呈剂量依赖性，见表1。

表1 各组大鼠体质量、空腹血糖和FINS水平(±s)Table 1 Comparison of body weight, fasting blood glucose, and FINS levels among the five groups(±s)

表1 各组大鼠体质量、空腹血糖和FINS水平(±s)Table 1 Comparison of body weight, fasting blood glucose, and FINS levels among the five groups(±s)

注：与正常组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.05。Note: Compared with normal group,aP＜0.05; Compared with model group,bP＜0.05.

组别正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组F值P值空腹血糖(mmol/L)5.39±0.61 23.48±5.58a 5.37±1.00b 9.54±2.05b 13.87±1.96b 63.336 0.001只数9 8 9 9 9体质量(g)385.98±4.26 290.38±8.04a 375.94±4.02b 348.43±7.55b 332.57±10.57b 228.647 0.001 FINS(ng/mL)20.95±1.81 35.11±5.02a 23.03±6.54b 28.26±2.96b 30.90±8.31b 9.511 0.001

2.2 各组大鼠GIR水平比较 与正常组比较，模型组大鼠GIR 水平明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，决明子各给药组GIR水平明显增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且各给药组间比较呈剂量依赖性，见表2。

表2 各组大鼠GIR水平比较(±s)Table 2 Comparison of GIR levels among the five groups(±s)

表2 各组大鼠GIR水平比较(±s)Table 2 Comparison of GIR levels among the five groups(±s)

注：与正常组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.05。Note: Compared with normal group,aP＜0.05; Compared with model group,bP＜0.05.

组别正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组F值P值GIR 31.88±2.79 12.34±3.22a 28.35±0.78b 24.59±1.85b 21.85±1.64b 95.928 0.000只数9 8 9 9 9

2.3 各组大鼠胰岛素耐量水平比较 与正常组比较，模型组大鼠各时点的胰岛素耐量均明显增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，决明子各给药组大鼠各时点的胰岛素耐量均明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且各给药组间比较呈剂量依赖性，见表3。

表3 各组大鼠胰岛素耐量水平(±s)Table 3 Comparison of insulin tolerance levels among the five groups(±s)

表3 各组大鼠胰岛素耐量水平(±s)Table 3 Comparison of insulin tolerance levels among the five groups(±s)

注：与正常组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.05。Note: Compared with normal group,aP＜0.05; Compared with model group,bP＜0.05.

组别正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组F值P值120 min 3.29±0.41 9.28±1.97a 3.15±0.24b 3.64±0.73b 3.81±0.25b 64.331 0.001只数9 8 9 9 9 0 min 5.63±0.50 13.97±3.21a 5.38±0.98b 5.60±1.64b 5.27±1.25b 35.847 0.001 30 min 3.43±0.27 11.51±5.49a 3.62±0.49b 4.14±1.63b 5.03±0.58b 15.498 0.001 60 min 2.93±0.23 8.17±1.15a 3.47±0.97b 4.07±0.86b 4.19±0.51b 54.746 0.001

2.4 各组大鼠骨骼肌氧化应激相关指标比较 与正常组比较，模型组大鼠GSH及SOD水平明显降低，ROS及MDA水平明显增加，差异具有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，决明子各给药组大鼠GSH 及SOD水平明显升高，ROS及MDA水平明显降低，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且各给药组间比较呈剂量依赖性，见表4。

表4 各组大鼠骨骼肌氧化应激相关指标比较(±s)Table 4 Comparison of indicators related to oxidative stress in skeletal muscles of rats among the five groups(±s)

表4 各组大鼠骨骼肌氧化应激相关指标比较(±s)Table 4 Comparison of indicators related to oxidative stress in skeletal muscles of rats among the five groups(±s)

注：与正常组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.05。Note: Compared with normal group,aP＜0.05; Compared with model group,bP＜0.05.

组别正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组F值P值MDA(nmol/mL)1.72±0.47 7.13±2.04a 2.09±0.91b 3.86±0.65b 4.27±0.52b 35.454 0.001只数9 8 9 9 9 GSH(mg/L)32.27±4.38 6.06±0.71a 23.92±3.03b 13.84±3.61b 11.47±2.30b 98.853 0.001 SOD(U/L)46.58±4.65 7.97±1.11a 33.68±5.08b 23.55±4.10b 15.85±3.33b 119.317 0.001 ROS(U/mL)71.52±5.74 130.10±4.79a 94.80±11.85b 103.82±7.88b 118.07±6.63b 70.947 0.001

2.5 各组大鼠骨骼肌P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2 和GLUT4 的蛋白表达比较 与正常组比较，模型组大鼠P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2 和GLUT4的蛋白表达水平均明显降低，差异均有统计学意义(P＜0.05)；与模型组比较，决明子各给药组大鼠P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2和GLUT4的蛋白表达水平均明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且各给药组间比较呈剂量依赖性，见表5和图1。

图1 各组大鼠骨骼肌P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2 和GLUT4的蛋白表达Figure 1 Expression of P-LKB1, P-AMPKa12, P-AMPKa2, and GLUT4 in rats’keletal muscles of each group

表5 各 组 大 鼠 骨 骼 肌P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2 和GLUT4 的蛋白表达比较(±s)Table 5 Comparison of protein expression of P-LKB1,P-AMPKa12,P-AMPKa2, and GLUT4 in rats’skeletal muscle among the five groups(±s)

表5 各 组 大 鼠 骨 骼 肌P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2 和GLUT4 的蛋白表达比较(±s)Table 5 Comparison of protein expression of P-LKB1,P-AMPKa12,P-AMPKa2, and GLUT4 in rats’skeletal muscle among the five groups(±s)

注：与正常组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.05。Note: Compared with normal group,aP＜0.05; Compared with model group,bP＜0.05.

组别正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组F值P值GLUT4 41.07±5.52 27.33±3.51a 55.66±6.11b 46.42±5.42b 33.04±4.08b 41.676 0.001只数9 8 9 9 9 P-LKB1 33.22±6.11 20.08±4.93a 35.26±5.33b 28.55±10.27b 22.78±5.07b 8.196 0.001 P-AMPKa12 29.39±6.02 18.35±3.74a 28.76±4.82b 23.87±5.01b 19.95±2.44b 11.509 0.001 P-AMPKa2 23.84±5.59 15.50±5.47a 40.66±4.81b 32.06±8.03b 28.25±3.70b 22.972 0.001

2.6 各组大鼠骨骼肌P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2 和GLUT4 的mRNA 水平比较 与正常组比较，模型组大鼠P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2、GLUT4的mRNA的表达水平均明显降低，差异有统计学意义(P＜0.05)。与模型组比较，决明子各给药组大鼠P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2、GLUT4 mRNA的表达水平均明显升高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，且各给药组间比较呈剂量依赖性，见表6。

表6 各 组 大 鼠 骨 骼 肌P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2 和GLUT4的mRNA表达水平比较(±s)Table 6 Comparison of mRNA expression of P-LKB1, P-AMPKa12,P-AMPKa2, and GLUT4 in rats’skeletal muscles of each group(±s)

表6 各 组 大 鼠 骨 骼 肌P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2 和GLUT4的mRNA表达水平比较(±s)Table 6 Comparison of mRNA expression of P-LKB1, P-AMPKa12,P-AMPKa2, and GLUT4 in rats’skeletal muscles of each group(±s)

注：与正常组比较，aP＜0.05；与模型组比较，bP＜0.05。Note: Compared with normal group,aP＜0.05; Compared with model group,bP＜0.05.

组别正常组模型组高剂量组中剂量组低剂量组F值P值GLUT4 18.00±2.21 14.25±2.66a 37.98±2.51b 28.96±2.64b 23.96±3.88b 113.093 0.001只数9 8 9 9 9 P-LKB1 43.22±6.51 26.40±4.64a 40.34.±8.38b 38.02.±5.26b 28.35±2.32b 14.262 0.001 P-AMPKa12 31.04±4.00 18.66±3.79a 32.74±7.61b 29.87±4.10b 25.42±4.51b 12.565 0.001 P-AMPKa2 23.92±1.77 15.46±2.22a 41.87±2.19b 35.24±3.16b 28.85±3.85b 116.218 0.001

3 讨论

胰岛素抵抗是2型糖尿病发病过程中的重要病理生理基础。其中，胰岛素刺激葡萄糖摄取的发生场所主要是在骨骼肌。因此，骨骼肌是导致外周组织发生胰岛素抵抗的关键部位[12]。腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族的成员之一，在正常机体中，其上游的肿瘤抑制因子-1(LKB1)磷酸化被激活后，可磷酸化AMPKa 亚基上的Thr172位点而激活AMPK，促进葡萄糖转运蛋白-4(GLUT4)对葡萄糖的转运过程，促进骨骼肌葡萄糖的摄取、转运和利用等过程，改善患者的胰岛素抵抗水平，同时还可促进血液中甘油三酯、游离脂肪酸的代谢，调节骨骼肌对葡萄糖的摄取和利用[13]。有研究显示，2 型糖尿病患者体内骨骼肌LKB1-AMPK-GLUT4 信号级联通路发生表达的抑制，降低骨骼肌糖原的转输效率，造成胰岛素敏感性降低、血液中葡萄糖清除率减少和血糖升高[14]。因此，以LKB1-AMPK-GLUT4 信号通路为靶点进行相应的药物干预，可能改善机体糖尿病代谢途径及降低胰岛素抵抗。

现代药理学研究发现，决明子提取物主要化学成分包括蒽醌类、萘并吡喃酮类、脂肪酸类、糖类和氨基酸等，可降低血脂、血压及具有保肝、泻下、保肝、神经保护等功能[15]。本研究结果显示，与正常大鼠相比，经链脲佐菌素诱糖尿病大鼠体质量明显降低，空腹血糖及FINS 水平明显增高，GIR 水平明显降低，与王秋燕[16]研究相符，提示2 型糖尿病大鼠因链脲佐菌素诱导出现了胰岛素抵抗，而经过决明子提取物干预糖尿病大鼠后，其体质量及GIR 水平明显提升，而空腹血糖及FINS 明显降低，表明决明子提取物具有明显改善血糖和缓解胰岛素抵抗的效果，可能与决明子提取物能修正机体血脂紊乱及系统性胰岛素抵抗相关，但具体机制需要本研究进一步实验以探明。

本研究继续实验显示，与正常大鼠比较，模型组大鼠GSH及SOD水平明显降低，ROS及MDA水平明显增加，表明链脲佐菌素不仅可致糖尿病大鼠体内产生胰岛素抵抗，还可致其体内GSH、SOD、ROS 及MDA 水平表达异常，造成其体内可能产生脂质过氧化反应，阻碍其正常清除骨骼肌细胞过氧化代谢产物运转清除。而经过决明子提取物干预后，糖尿病大鼠骨骼肌GSH、SOD 水平均明显降低，ROS 及MDA 水平明显增加，说明决明子提取物能改善糖尿病大鼠骨骼肌氧化应激反应。文献显示，氧化应激损伤也伴随着2 型糖尿病的整个发展过程[17]，血糖和脂肪酸水平的升高可使机体产生大量的ROS 和MDA[18]，增加骨骼肌对胰岛素的抵抗性，造成β细胞功能的衰退，增加大鼠骨骼肌葡萄糖的耐受量。研究指出，GSH、SOD在机体细胞氧化反应中发挥重要的还原剂作用，能促进过氧化代谢产物的清除，减缓脂质过氧化反应的发生，造成骨骼肌胰岛素抵抗[19]。故决明子提取物改善糖尿病大鼠骨骼肌氧化应激反应，可能是其改善骨骼肌及机体其他组织胰岛素抵抗的机制之一。

本研究进一步试验显示，相比于正常大鼠，糖尿病大鼠P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2、GLUT4 的蛋白mRNA和表达水平也明显高于正常大鼠，提示在糖尿病的病理状态下LKB1-AMPK-GLUT4 信号级联通路受到明显的抑制，可能是糖尿病大鼠糖尿病的发生及骨骼肌胰岛素抵抗原因。经过决明子提取物干预后，糖尿病大鼠P-LKB1、P-AMPKa12、P-AMPKa2、GLUT4 mRNA和蛋白也相应呈现降低趋势，表明通过调控糖尿病大鼠骨骼肌LKB1-AMPK-GLUT4 信号通路表达，能明显改善其胰岛素抵抗水平，提示决明子提取物明显降低2型糖尿病大鼠的高血糖状态及胰岛素抵抗机制，还包括其能够修复糖尿病大鼠骨骼肌LKB1-AMPK-GLUT4 信号通路的损伤相关[20]。最后，本研究结果显示，糖尿病大鼠接受决明子提取物越高，其骨骼肌胰岛素抵抗改善效果越明显。说明决明子治疗糖尿病患者胰岛素抵抗可能受到用药剂量的影响，提示在未来临床应用中可对不同程度骨骼肌胰岛素抵抗患者进行相应决明子提取物剂量干预，以获取最佳的治疗效果。

综上所述，决明子提取物能明显修复骨骼肌LKB1-AMPK-GLUT4 信号通路的损伤，减轻机体血液氧化应激损伤状态，改善糖尿病大鼠胰岛素抵抗。然而本研究未对LKB1-AMPK-GLUT4 信号通路与糖尿大鼠器官如晶状体、海马体和心肌等氧化应激损伤是否存在相关性进行分析，应在下一步进行更深入的研究，以完善结论。