护肝抗病毒方对小鼠2种实验性肝炎的保肝作用 *

章猛高 喻宏伟 黄鹏飞 刘国泰

（抚州市临川区第二人民医院中医科，江西 抚州 344000）

护肝抗病毒方系本课题组治疗肝炎的临床经验方，由叶下珠、柴胡、当归、丹参、白芍、白术、茯苓、五味子、猪苓、薏苡仁、土茯苓、矮地茶、板蓝根组成，该方经长期临床实践应用，对急、慢性病毒性肝炎均有较好疗效。本课题旨在通过实验研究验证评价该方的保肝作用。为其进一步开发应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验动物昆明种小鼠，体质量（20±2）g，雌雄兼用。由南昌大学实验动物中心提供。

1.2 受试药物护肝抗病毒方组成：叶下珠15 g，柴胡6 g，当归10 g，丹参10 g，白芍12 g，白术10 g，茯苓10 g，五味子10 g，猪苓10 g，薏苡仁10 g，土茯苓15 g，矮地茶15 g，板蓝根10 g。药物由抚州市临川区第二人民医院中药房提供，应用剂型为传统汤剂，用煎煮法制取汤液，浓缩成1 g/mL（按生药计）浓度的药液，放冰箱保存备用。使用时以生理盐水稀释后灌胃给药。对照药物：联苯双酯滴丸（万邦德制药集团有限公司，国药准字H33021305）。

1.3 试剂刀豆蛋白A（ConA）、D-氨基半乳糖，购自Sigma公司；丙氨酸氨基转移酶（ALT）试剂盒、天冬氨酸氨基转移酶（AST）试剂盒、超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒、丙二醛（MDA）试剂盒，均购自南京建成生物工程研究所。

1.4 实验方法

1.4.1 护肝抗病毒方对D-氨基半乳糖致小鼠肝损伤模型的作用取昆明种小鼠60 只，体质量（20±2）g，雌雄各半，随机分成正常对照组、模型组、护肝抗病毒方高、中、低剂量组、联苯双酯组，共6组。护肝抗病毒方高、中、低剂量组分别给予护肝抗病毒方煎剂12.0 g/kg、6.0 g/kg、3.0 g/kg（按生药计）灌胃，联苯双酯组给予联苯双酯滴丸4.5 mg/kg 灌胃，正常对照组和模型组等体积生理盐水灌胃，每天1 次，连续5 d。末次给药后2 h，腹腔注射给予8%的D-氨基半乳糖0.1 mL/10 g，注射后2 h 再给予食物，于注射40 h 后禁食12 h，全部小鼠眼眶取血，离心分离血清，测定ALT、AST。解剖小鼠，称取肝脏组织0.4 g，加9 倍冷生理盐水，匀浆，离心后取上清液，按试剂盒说明书测定SOD、MDA。

1.4.2 护肝抗病毒方对ConA 诱导的小鼠免疫性肝损伤的影响取昆明种小鼠60 只，体质量（20±2）g，雌雄兼用。分组同1.4.1。除正常对照组外，其余各组采用ConA 诱导免疫性肝损伤法，将小鼠四肢固定后，碘伏消毒小鼠尾部，于尾静脉注射ConA，剂量为18 mg/kg。从注射ConA 当天开始，护肝抗病毒方高、中、低剂量组分别给予护肝抗病毒方煎剂12.0 g/kg、6.0 g/kg、3.0 g/kg（按生药计）灌胃，联苯双酯组给予联苯双酯滴丸4.5 mg/kg 灌胃，空白对照组和模型组小鼠灌胃等体积生理盐水，每天1 次，连续21 d。于末次给药后的4 h 再次尾静脉注射ConA（剂量18 mg/kg），注射12 h 后全部小鼠眼眶取血，常规分离血清，测定ALT、AST。解剖小鼠，称取肝脏组织0.4 g，加9 倍冷生理盐水，匀浆，离心后取上清液，按试剂盒说明书测定SOD、MDA。

1.5 统计学方法实验数据用SPSS 23.0 统计软件分析，数据结果均以（±s）表示，行x2分析、t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 护肝抗病毒方对D-氨基半乳糖致肝损伤小鼠血清ALT、AST、SOD、MDA 含量的影响与正常对照组比较，模型组小鼠血清ALT、AST 均明显升高，表明D-氨基半乳糖造成了小鼠肝损伤。与模型组比较，护肝抗病毒方各剂量组小鼠ALT、AST 均有显著降低（P＜0.01），说明护肝抗病毒方对D-氨基半乳糖造成的小鼠肝损伤有保护作用。见表1。

表1 护肝抗病毒方对D-氨基半乳糖致肝损伤小鼠血清ALT、AST、含量的影响（±s，U/L）

表1 护肝抗病毒方对D-氨基半乳糖致肝损伤小鼠血清ALT、AST、含量的影响（±s，U/L）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01。

组别正常对照组模型组护肝抗病毒方组剂量/（g/kg）联苯双酯组AST 35.26±3.43 87.34±9.721）48.23±5.142）46.78±4.922）52.43±5.372）42.76±4.532）12.0 6.0 3.0 0.0045鼠数10 10 10 10 10 10 ALT 37.28±3.86 124.36±13.521）70.45±7.232）65.61±6.562）72.16±7.322）64.79±6.542）

与正常对照组比较，模型组小鼠肝组织MDA明显升高、SOD 明显下降。与模型组比较，护肝抗病毒方各剂量组小鼠肝组织MDA 水平均显著降低（P＜0.01），肝组织SOD水平均显著升高（P＜0.01）。见表2。

表2 护肝抗病毒方对D-氨基半乳糖致肝损伤小鼠肝组织MDA、SOD含量的影响（±s）

表2 护肝抗病毒方对D-氨基半乳糖致肝损伤小鼠肝组织MDA、SOD含量的影响（±s）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01。

组别正常对照组模型组护肝抗病毒方组SOD/（U/mg prot）162.39±15.81 95.28±10.241）139.45±15.422）148.23±15.722）138.54±14.332）137.28±15.522）剂量/（g/kg）联苯双酯组12.0 6.0 3.0 0.0045鼠数10 10 10 10 10 10 MDA/（nmol/mg prot）24.76±2.98 42.65±5.391）28.62±3.482）26.35±2.912）29.64±3.152）26.51±2.872）

2.2 护肝抗病毒方对ConA 致免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST、SOD、MDA 含量的影响与正常对照组比较，模型组小鼠血清ALT、AST 均明显升高，说明模型组小鼠有明显肝损伤。与模型组比较，护肝抗病毒方各剂量组小鼠ALT、AST 均有显著降低（P＜0.01），说明护肝抗病毒方对ConA 诱导的免疫性肝损伤小鼠有明显的保肝作用。见表3。

表3 护肝抗病毒方对ConA致免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量的影响（±s，U/L）

表3 护肝抗病毒方对ConA致免疫性肝损伤小鼠血清ALT、AST含量的影响（±s，U/L）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01。

组别正常对照组模型组护肝抗病毒方组剂量/（g/kg）联苯双酯组AST 30.59±3.16 82.37±8.121）47.24±5.532）43.76±4.122）49.28±4.342）42.35±4.272）12.0 6.0 3.0 0.0045鼠数10 10 10 10 10 10 ALT 31.72±3.49 112.36±12.541）69.43±7.232）63.48±6.592）70.56±7.812）62.14±6.322）

与正常对照组比较，免疫性肝损伤模型组小鼠肝组织MDA 明显升高、SOD 明显下降。与模型组比较，护肝抗病毒方各剂量组小鼠肝组织MDA 水平均显著降低（P＜0.01），肝组织SOD 水平均显著升高（P＜0.01）。见表4。

表4 护肝抗病毒方对ConA致免疫性肝损伤小鼠肝组织MDA、SOD含量的影响（±s）

表4 护肝抗病毒方对ConA致免疫性肝损伤小鼠肝组织MDA、SOD含量的影响（±s）

注：与正常对照组比较，1）P＜0.01；与模型组比较，2）P＜0.01。

组别正常对照组模型组护肝抗病毒方组剂量/（g/kg）联苯双酯组SOD/（U/mg prot）158.72±16.54 94.35±9.681）143.32±15.432）148.29±14.922）139.56±14.332）136.24±13.522）12.0 6.0 3.0 0.0045鼠数10 10 10 10 10 10 MDA/（nmol/mg prot）24.13±2.86 42.92±5.641）28.78±3.532）25.74±2.752）29.32±3.612）26.57±3.292）

3 讨论

护肝抗病毒方由叶下珠、柴胡、当归、丹参、白芍、白术、茯苓、五味子、猪苓、薏苡仁、土茯苓、矮地茶、板蓝根组成。方中柴胡疏肝解郁；当归、丹参、白芍养血活血、养阴柔肝；白术、茯苓、五味子健脾扶正；猪苓、薏苡仁渗利肝胆湿热；叶下珠、土茯苓、矮地茶、板蓝根清热利湿抗病毒。现代药理研究［1，2］表明，柴胡主要活性成分柴胡皂苷有抗炎、抗病毒、保护肝脏、抑制肝纤维化进展的作用；当归具有保肝和调节免疫作用［3］；丹参具有保肝和抗肝纤维化作用［4，5］；白芍及其主要成分白芍总苷有显著的保肝作用［6，7］；五味子具有良好的保肝降酶作用［8，9］；茯苓能抑制乙肝病毒并且有保护肝脏的作用［10，11］；矮地茶又名平地木，有抗炎、镇痛、保护肝脏、清利湿热等药理作用［12，13］；土茯苓中的类黄酮组分有保肝作用［14］；板蓝根有抗肝炎病毒作用［15，16］。方中诸药合用，对病毒性肝炎能够发挥中医药的综合性整体治疗作用优势。

以D-氨基半乳糖造成的肝损伤模型是常用的实验性肝炎模型，能较准确反映肝细胞的功能、代谢及形态学变化。用ConA 诱导的免疫性肝损伤模型与人类病毒性肝炎的病理生理过程类似［17，18］。本研究结果显示护肝抗病毒方对上述2 种实验性肝损伤模型小鼠均有显著的保肝作用，通过实验验证了护肝抗病毒方的保肝药效，说明此方具有较高的应用价值。