高效液相色谱法同时测定复方草珊瑚含片中3种酚酸的含量

李诒光 ，吕毅斌 ，罗跃华 ，卢建中 ，罗文华

（1.北京中医药大学研究生，北京 100029；2.江中药业股份有限公司技术中心，南昌 330096；3.江西省食品药品检验所，南昌 330029）

高效液相色谱法同时测定复方草珊瑚含片中3种酚酸的含量

李诒光1，2，吕毅斌2，罗跃华3，卢建中2，罗文华2

（1.北京中医药大学研究生，北京 100029；2.江中药业股份有限公司技术中心，南昌 330096；3.江西省食品药品检验所，南昌 330029）

[目的]建立有效的控制复方草珊瑚含片质量的方法。[方法]通过高效液相色谱法，SunFire ODS色谱柱（4.6mm×150mm，5μm）；乙腈-0.1%磷酸溶液梯度洗脱；流速为每分钟0.8mL；柱温为38℃；检测波长294 nm。[结果]原儿茶酸、迷迭香酸、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸线性范围分别为2.508～50.16 ng、41.04～820.8ng、18.40～368.0 ng。[结论]该法快速、简便、精密度、重复性、稳定性好。

肿节风；原儿茶酸；3-羟基-4-甲氧基苯甲酸；迷迭香酸

复方草珊瑚含片由肿节风浸膏、薄荷脑、薄荷油组成，具有疏风清热，消肿止痛，清利咽喉作用。研究发现肿节风的主要成分有原儿茶酸、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸、迷迭香酸等酚酸成分。从文献可知迷迭香酸具有抗菌、抗炎、抗病毒等生物活性[1-3]，与肿节风的药理作用和临床适用症完全吻合。目前针对肿节风药材的含量测定指标有异嗪皮啶、反丁烯二酸和总黄酮。为更有效地控制复方草珊瑚含片的质量，首次建立了在同一种色谱条件下，同时测定原儿茶酸、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸和迷迭香酸含量的方法。

1 仪器、试剂与试药

1.1 仪器设备 Waters600型高效液相色谱仪，Waters 2996型二极管阵列紫外检测器；Sartorius MB6148电子天平；BRANSON B3200S-T型超声波震荡器。

1.2 试剂与试药 原儿茶酸对照品，中国药品生物制品检定所提供，批号200503；迷迭香酸对照品，中药固体制剂国家工程研究中心提供，批号050419；3-羟基-4-甲氧基苯甲酸对照品，江中药业股份有限公司自制，含量99.5%。乙腈、甲醇为色谱纯；磷酸等均为分析纯。复方草珊瑚含片，江中药业股份有限公司提供。

2 方法与结果

2.1 色谱条件 色谱柱：Waters-SunFireODS（4.6mm×150mm，5μm），流动相：A相为乙腈，B相为0.1%磷酸水溶液（含2.5%乙腈），线性梯度洗脱：0～12min，0～95%A；12～50 min，5%～20%A；50～60 min，20%～70%A；流速：0.8mL/min，柱温：38℃，检测波长：294nm。

2.2 对照品溶液的制备 分别取原儿茶酸、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸、迷迭香酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成1mL约含原儿茶酸1.5μg、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸18μg、迷迭香酸41μg的混合溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备 取本品10片，除去薄膜衣，精密称定，研细，取细粉约1 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，称定质量，超声处理（功率 300W，频率 25 kHz）30min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系的考察 精密称取原儿茶酸、迷迭香酸、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸对照品适量，用甲醇制成1mL含原儿茶酸2.508μg、迷迭香酸41.04μg、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸18.40μg的混合溶液。精密吸取上述对照品溶液 1.0、2.0、5.0、10.0 和 20.0 μL，分别注入液相色谱仪中，记录色谱图。以进样量为横坐标（X），峰面积（Y）为纵坐标，绘制标准曲线，结果表明，原儿茶酸、迷迭香酸、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸线性范围分别为 2.508～50.16 ng（Y=2 383.7X-1 376.5，r=0.999 7）、41.04～820.8 ng（Y=2 669.1X+6 623.6，r=0.999 9）18.40～368.0 ng（Y=2 469.6X+1 403.3，r=0.999 9）。

2.5 精密度实验 精密吸取原儿茶酸、迷迭香酸和3-羟基-4-甲氧基苯甲酸混合对照品溶液10μL，依法进样测定5次，峰面积的相对平均标准差（RSD）值分别为原儿茶酸0.52%、迷迭香酸0.48%、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸0.36%。结果表明,本实验仪器的精密度好。

2.6 稳定性实验 取本品（批号0705010）供试品溶液分别于 0、2、4、6、8、10、12、24 h 进样依法测定样品含量，RSD分别为原儿茶酸0.68%、迷迭香酸1.11%、3-羟基-4-甲氧基苯甲酸0.99%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定。

2.7 重复性实验 取本品（批号0705010）5份，按供试品制备方法制备，依法测定，计算平均含量，原儿茶酸为10.54μg/片，RSD=0.96%；迷迭香酸为580.72 μg/片，RSD=0.83%；3-羟基-4-甲氧基苯甲酸为175.66μg/片，RSD=1.26%。结果表明，本方法的重复性良好。

2.8 加样回收率实验 取已知含量的本品 (批号0705010)，取约相当于80%、100%、120%的细粉适量共9份，精密称定，分别置具塞锥形瓶中，精密加入对照品溶液适量，按供试品制备方法处理，依法测定。按外标法计算得加样回收率分别为：原儿茶酸101.64%，RSD为3.0%；迷迭香酸98.21%，RSD为4.2%；3-羟基-4-甲氧基苯甲酸99.06%,RSD为0.88%。结果表明，本方法回收率良好。

2.9 样品含量测定 分别测定5批样品各组分的含量，结果见表1。

3 讨论

3.1 检测波长的确定 分别取3种对照品溶液和供试品溶液，按色谱条件测定，通过二极管阵列检测器采集紫外吸收光谱图。结果表明，当检测波长为294 nm时,供试品溶液的色谱图干扰色谱峰较少，且3种组分的色谱峰峰形及响应值均较为理想。

3.2 超声处理时间的确定 取同批号样品5份，各精密加入甲醇 25mL，分别超声处理 10、20、30、40、60min，同法测定。结果超声30、40和60min测得的含量基本一致。

[1]S.Huang,R.Zheng.Rosmarinic acid inhibits angiogenesis and its mechanism ofaction in vitro[J].Cancer Letters,2006,239(2):271-280.

[2]李伟光,梁敬钰.迷迭香酸的研究进展[J].海峡药学,2004,16(1):1-4.

[3]乃海燕.迷迭香酸的研究进展[J].美国中华医学临床杂志,2005,7(1):83-86.

Simultaneousdeterm ination of three phenolic acids in Fufang Caoshanhu buccalby HPLCmethod

LIYi-guang1,2,LV Yi-bin2,LUOYue-hua3,etal
（1.Beijing University ofChineseMedicine， Beijing 100029， China； 2.Jiangzhong PharmaceuticalCo.LTD.，Nanchang 330096， China；3.JianXiProvicial Institate for Drog and Food Contral,Nanchang330029,China ）

[Objective]To establish themethod for simultaneous determination of three phenolic acids in Fufang Caoshanhu buccal tabletsby high performance liquid chromatograph.[Methods]The HPLCanalysiswas performed on SunFire ODScolumn by using gradientelution.Themobile phasewas consisted ofacetonitrile-0.1%phosphoric acid solution；the detection wavelength was 294 nm；the column temperature wasmaintained at 38 ℃；the flow rate was 0.8m l/min.[Results]Procatechuic acid,Rosmarinic acid,3-Hydroxy-4-methoxy benzoic acid showed good linearity in the correspondentconcentration 2.508～50.16 ng,41.04～820.8 ng,18.40～368.0 ng respectively.[Conclusion]Themethod wasaccurate，repeatable and simple foranalysisof Fufang Caoshanhu buccal tablets.

Sarcandraglabra(Thunb.)Nakai;Procatechuic acid;3-Hydroxy-4-methoxy benzoic acid;Rosmarinic acid

R284.1

A

1672-1519(2010)02-0158-02

李诒光（1974-），男，硕士，副主任医师，2007级在读博士研究生，主要从事中药质量与开发工作。

吕毅斌。

2009-09-30）