板蓝根颗粒对甲型流感病毒小鼠的作用

孙惠惠，邓 巍，占玲俊，许黎黎，李枫棣，吕 琦，朱 华，刘 颖，马春梅，鲍琳琳

(中国医学科学院 北京协和医学院实验动物研究所，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021)

研究报告

板蓝根颗粒对甲型流感病毒小鼠的作用

孙惠惠，邓 巍，占玲俊，许黎黎，李枫棣，吕 琦，朱 华，刘 颖，马春梅，鲍琳琳

(中国医学科学院 北京协和医学院实验动物研究所，国家中医药管理局人类疾病动物模型三级实验室，北京 100021)

目的测定板蓝根颗粒抗流感病毒的药效作用。方法A/California/7/2009(CA7)病毒滴鼻感染BALB/c小鼠观察14 d，观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠的保护作用，计算小鼠存活率、存活天数以及延长生命率。感染的小鼠第5天每组小鼠处死一半，取肺组织，观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠肺组织的保护作用。结果板蓝根可明显延长甲型H1N1流感病毒感染小鼠的存活天数并提高存活率，病理结果显示板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠的肺组织有一定程度的保护作用，与模型组比较差异显著(P＜0.05)。结论板蓝根颗粒对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠有较好的保护作用。

小鼠;板蓝根颗粒;甲型流感病毒;保护作用

流行性感冒(简称流感)是由流感病毒引起的一种传染性极强的呼吸道病毒感染性疾病，在呼吸系统中发病率占首位，我国是流感高发地区［1］。流感临床上有头痛、高热、乏力、疲劳、全身肌肉酸痛、咳嗽、咽喉肿痛、鼻塞流涕、腹泻等一系列症状，流感的两个重要特征是流行性暴发和高的病死率［2］，到目前为止前为止还没有有效防治流感的方法［3］，因此流感的防治刻不容缓。

目前，抗甲型H1N1流感病毒的有效药物为达菲，达菲价格高，国内储备量少，发达国家出现了达菲耐药现象，中国多次发生流感，传统中医药方法取得了良好的治疗效果。板蓝根含有多种氨基酸、谷甾醇、靛青、靛玉红等多种药用成分，具有清热解毒、凉血化斑之功效，对多种细菌性、病毒性疾病如流感、流脑、腮腺炎、钧端螺旋体病、肺炎、肝炎等有良好的预防和治疗效果。根据板蓝根的这些功效，我们以甲型H1N1流感病毒感染小鼠作为药物评价模型，通过感染小鼠存活率、存活天数、肺病理变化来评价板蓝根对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用。

1 材料和方法

1.1 材料

板蓝根颗粒，3 g/袋，批号:8111525，由北京同仁堂科技发展股份有限公司制药厂生产。阳性对照品为达菲，批号:090121，规格:75 mg，由上海罗氏制药有限公司提供。RVC－Ⅱ型独立送风隔离笼具TENCNIPLAST公司。A(H1N1)2009病毒株为A/ California/7/2009(CA7)。经 无 特 殊 病 原 体(specific－pathogen free，SPF)鸡胚增殖后收集病毒尿囊液，测定TCID50为107。－80℃ 储存备用，实验均在生物安全Ⅲ级实验室中进行。SPF级雌性 BALB/c小鼠，4～6周龄(体重18～20 g)，由北京维通利华实验动物技术有限公司提供［SCXK(京)2006－0009］。

1.2 方法

1.2.1 实验分组:实验在本所的BSL－3实验室中进行，将80只4～6周龄雌性BALB/c小鼠随机分为对照组、模型组、达菲组、板蓝根组4组，每组20只，每组10只用于观察受试药物对甲型 H1N1流感病毒感染小鼠死亡的保护作用，另10只用于观察受试药物对甲型H1N1流感病毒攻毒后小鼠肺组织炎症改善作用。

1.2.2 鼠的感染性:将小鼠乙醚吸入麻醉后，106TCID50病毒液通过滴鼻途径感染小鼠，每只小鼠的接种剂量为50 μL，建立甲型流感病毒小鼠模型，对照组小鼠经鼻腔滴入等量的生理盐水。通过小鼠肺组织的 PCR、肺组织病理结果可证实甲型H1N1病毒小鼠模型的成功建立［4］。

1.2.2 给药:板蓝根组的给药量为4.67 g/(kg·d) (参照临床剂量)，达菲组的给药量为0.03 g/(kg· d)。板蓝根组攻毒2 h后灌胃给药200 μL、达菲组攻毒2 h后灌胃给药200 μL，正常对照组及模型组灌胃给予生理盐水200 μL，每日1次，连续用药5 d。

1.2.3 观察指标:用于观察板蓝根对感染小鼠肺组织的保护作用的小鼠共观察14 d，记录小鼠的死亡数及生存天数，并计算存活率及延长生命率。用于观察板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染小鼠死亡的保护作用的小鼠在第5天安乐，取肺组织留做病理检查［5］。

1.2.4 病理学检查:无菌取小鼠的肺，福尔马林溶液中固定24 h，脱水，石蜡包埋、切片，常规HE染色，显微镜下(Nikon显微镜，日本)下观察其病理变化。1.2.5 统计方法:数据处理运用SPSS13.0软件完成，组间比较采用单因素方差分析。

2 结果

2.1 板蓝根颗粒对甲型H1N1流感病毒感染小鼠存活率的影响

实验结果提示，板蓝根可明显降低甲型H1N1流感病毒感染小鼠的死亡率，与模型组比较差异显著(P＜0.05)，提示板蓝根对甲型H1N1流感病毒感染的小鼠有保护作用(表1)。

2.2 板蓝根颗粒对甲型H1N1流感病毒感染小鼠平均生存天数及延长生命率的影响

实验结果提示，板蓝根可明显可延长小鼠的存活天数，与模型组比较差异显著，提示板蓝根甲型H1N1流感病毒感染的小鼠有保护作用(表2)。

表1 对甲型H1N1流感病毒感染小鼠死亡存活率的影响(n=10)Tab.1 Effect of survival rate of mice challenged with CA7 virus(n=10)

表2 对甲型流感病毒感染小鼠平均生存天数及延长生命率的影响(±s，n=10)Tab.2 Effect of survival days of mice challenged with CA7 virus(±s，n=10)

表2 对甲型流感病毒感染小鼠平均生存天数及延长生命率的影响(±s，n=10)Tab.2 Effect of survival days of mice challenged with CA7 virus(±s，n=10)

注:与模型组比较:*P＜0.05，**P＜0.01;▽:本次实验小鼠观察周期为14 d。Note:*P＜0.05，**P＜0.01 vs model group.▽:The observation period lasts for 14 days.

组别Group 剂量Dose g/(kg·d) 平均生存天数Survival days延长生命率(%) Increase in life span(%)空白对照(Control) 等量生理盐水(NS) 4.67 14±0▽模型对照(Model) 等量生理盐水(NS) 6.0±1.5 －达菲(Oseltamivir) 0.03 9.8±3.7**64.41**板蓝根(Banlangen) 4.67 8.0±3.4*25.0*

2.3 病理学检查

空白对照组动物(10例/10例)肺脏均未见明显病理改变。阳性对照(模型)组动物感染甲型H1N1病毒第5天后(10例/10例)肺脏呈弥漫性肺炎改变，主要表现为肺血管扩张充血，血管周围水肿、炎细胞渗出，肺泡间隔弥漫性炎细胞浸润，以淋巴细胞为主，部分肺泡腔内可见渗出的炎细胞和漏出的水肿液。与临床报道的甲型H1N1流感的尸检病人的肺脏病理改变相似［6］。阳性药(达菲)组部分动物(4例/10例)肺脏病变范围较模型组小，病变程度与模型组基本一致，其余动物(6例/10例)与模型组病变范围与程度基本一致。板蓝根颗粒组部分动物(2例/10例)肺脏病变范围较模型组小，病变程度与模型组基本一致(图1，见彩插6)，但其数量较阳性药(达菲)组少，其余动物(8例/10例)与模型组病变范围与程度基本一致。具体病变范围结果见表3。

表3 甲型H1N1流感病毒感染各组小鼠后肺脏炎症面积的比较Tab.3 Comparison of lung inflammation proportion of mice challenged with CA7 virus

3 讨论

通过长期的研究和探索，中医药治疗病毒性疾病已取得了很大进展［7－10］。历史上几次流感的大流行中，中药显示出良好的防治作用。在以往的流感中，板蓝根都有较好的预防和治疗作用，但在甲型H1N1流感的治疗方面的作用并不明确，我们建立甲型H1N1流感小鼠模型［4］来评价板蓝根对甲型流感病毒感染小鼠的保护作用，为临床提供一定的数据支持。本次实验模型组的小鼠肺脏呈弥漫性肺炎改变，主要表现为肺血管扩张充血，血管周围水肿、炎细胞渗出，肺泡间隔弥漫性炎细胞浸润，以淋巴细胞为主，部分肺泡腔内可见渗出的炎细胞和漏出的水肿液，临床所见的甲流患者肺脏可见肺泡壁毛细血管扩张、淤血，间隔增宽，肺泡腔内可见透明膜形成，肺泡强含气量减少。

本次实验病理结果显示，感染了甲型 H1N1流感的小鼠第5天后肺脏病理改变与临床报道的甲型H1N1流感的尸检病人的肺脏病理改变相似［6］，而板蓝根组肺脏病变范围较模型组小。板蓝根组可明显延长甲型H1N1病毒感染小鼠的存活天数，提高存活率，与模型组比较差异显著(P＜0.05)，提示板蓝根颗粒对甲型H1N1病毒感染所致肺部病变具有减轻作用。

中药抗病毒机制主要有两个方面:一是直接杀伤病毒作用:二是通过调节机体免疫作用间接发挥抗病毒作用。由于板蓝根具有抗病毒清热解毒药，毒副作用很小，流感时服用板蓝根，可以一定程度上加强自身的免疫力和抗病毒能力。而当人体免疫力各方面处于良好的状态的时候，其对预防和治疗病毒也会比一般身体虚弱的人强。板蓝根是一种复方制剂，其成分多样，抗甲流病毒的机制我们正在进一步的实验中。

［1］ 黎敬波，刘叶.3种解表方法抗流感病毒甲型作用的实验研究［J］.新中医，2004，36(1):78.

［2］ Turkulov V，Madle－Samardzija N. Influenza－always present among us［J］.Med Prel，2000，53(3－4):154.

［3］ Luscher－Mattli M.Influenza chemotherapy:a review of the p resent tate of art and of new rugs in development［J］.Arch Virol，2000，45:2233.

［4］ 鲍琳琳，孙惠惠，占玲俊，等.A/California/7/2009与 A/ California/4/2009病毒感染力比较［J］.中国比较医学杂志，2010，20(1):6－9.

［5］ 中华人民共和国卫生部药政司.新药(西药)临床前研究指导原则汇编(药学 药理学 毒理学)［G］.1993.

［6］ 李冠华，张力，李月川，等.重症甲型 H1N1流感病毒肺炎的临床和病理特征［J］.天津医药，2010，38(1):32－35.

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［10］ Nakayama M.SuzukiK，TodaM，etal. Inhibition ofthe infectivity of influenza virus by tea polyphenols［J］.Antiviral Res，1993，21(4):289－299.

Effect of Banlangen Granule on Mice Challenged with A/California/7/2009

SUN Hui－hui，DENG Wei，ZHAN Ling－jun，XU Li－li，LI Feng－di，LV Qi，ZHU Hua，LIU Ying，MA Chun－mei，BAO Lin－lin
(Institute of Laboratory Animal Science，Chinese Academy of Medical Sciences and Peking Union Medical College，Key Laboratory of Human Diseases Animal Model，State Administration of Traditional Chinese Medicine，Beijing 100021，China)

ObjectiveTo investigate the protective effect of Banlangen granule against influenza A virus. Methods The mice were inoculated intranasally with 50 μL of 106TCID50influenza A/California/7/2009 Virus，and Banlangen granule was administrated intragastricly 2 hours postinoculation for 5 days.The survival rate and days of mice were calculated at 14 days post infection.Meanwhile the pathological changes were observed。ResultsBanlangen granule could prolong the survival days and reduce the mortality significantly compared with the model group.Banlangen granule could also lessen the pathological change in the lung tissues of challenged mice。ConclusionBanlangen granule has protective effect on A(H1N1)Influenza virus.

Mice;Banlangen granule;A(H1N1)influenza virus;Protection effect

R373.1

A

1671－7856(2010)07－0053－04

2010－04－09

科技重大专项－艾滋病和病毒性肝炎等重大传染病防治:2009ZX10004－402;卫生公益性行业科研专项项目:200802036;中央级公益性科研院所基本科研业务费:DWS200810;Z09000700090904。

孙惠惠(1983－)，女，硕士生，从事实验动物病毒分子生物学研究工作。

鲍琳琳(1979－)，女，助研，研究方向:病毒学。E－mail:bllmsl@yahoo.com.cn