HPLC法测定活血安痛酒中隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量

黄开颜，戴 冰，周新蓓

（湖南中医药大学第一附属医院，湖南长沙 410007）

活血安痛酒为我院医院制剂，已临床应用40余年，疗效确切，祛风除湿、活血镇痛，主要用于风寒湿痹所致的肢体麻木、腰腿疼痛以及陈旧伤痛；由安痛藤、丹参、赤芍、牛膝、熟地黄等十几味中药粉碎成粗粉，白酒浸泡过滤后矫味而成。目前其质量标准比较粗放，尚无内在成分含量测定，对其产品质量很难进行准确有效地控制；为此，笔者试图通过同时测定活血安痛酒中脂溶性成分隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量[1-8]，探讨更加准确有效地控制其产品质量的方法，更好地保证其质量稳定性。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100高效液相色谱仪（安捷伦科技有限公司）；分析天平DT-100（北京光学仪器厂）；不锈钢电热恒温水浴锅（北京市医疗设备厂）。

1.2 试药

隐丹参酮对照品（批号：110852-200715，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；丹参酮ⅡA对照品 （批号：110766-200608，供含量测定用，中国药品生物制品检定所）；甲醇（批号：20100508，色谱纯，天津市密欧化学试剂有限公司）；其余试剂均为分析纯，水为注射用水。活血安痛酒为我院制剂室生产。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱为 Kromasil C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相：甲醇-水（80∶20）；检测波长：270 nm，DAD 检测器；柱温：25℃；流速：1 ml/min。

2.2 对照品溶液的制备

精密称定隐丹参酮、丹参酮ⅡA对照品各0.4、0.6 mg，分别置于25 ml棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 供试品溶液的制备

精密量取活血安痛酒20 ml，置蒸发皿中水浴加热蒸干，分次加甲醇溶解、洗涤，置10 ml棕色量瓶中至刻度，备用。

2.4 阴性样品溶液的制备

取缺丹参的活血安痛酒20 ml，照“2.3”项下方法制备阴性样品溶液。

2.5 系统适用性试验

分别取对照品溶液、供试品溶液和阴性样品溶液适量，按上述色谱条件进行试验，考察系统适用性。HPLC色谱图见图1。

2.6 标准曲线的制备

精密吸取各对照品溶液 2、4、6、8、10、20 μl，注入高效液相色谱仪，以峰面积值Y为纵坐标，对照品进样量X（μg）为横坐标进行线性回归，回归方程为：隐丹参酮Y=2 045.20X+1.358 6 （r=0.999 6）； 丹参酮ⅡA Y=2 492.60X-2.865 2 （r=0.999 4），结果表明隐丹参酮、丹参酮ⅡA的进样量分别在0.032～0.32、0.048～0.48 μg 范围内与峰面积呈良好的线性关系。

2.7 精密度试验

精密吸取对照品溶液5 μl，重复进样6次。其隐丹参酮、丹参酮ⅡA峰面积的RSD分别为1.38%、1.44%。

2.8 稳定性试验

取当日配制的供试品溶液，于0、1、2、4、8、24 h分别进样5 ml，测定峰面积，隐丹参酮RSD=2.30%、丹参酮ⅡARSD=2.36%。结果表明，供试品溶液在24 h内稳定性良好。

2.9 重复性试验

取同一批供试品，按“2.3”项下方法制备样品溶液，进样5 ml，测定峰面积，计算含量，隐丹参酮、丹参酮ⅡA峰面积的RSD值分别为1.72%、1.85%。

2.1 0加样回收率试验

精密量取已知含量的活血安痛酒6份，各20 ml作为供试品（内含隐丹参酮 11.03 μg/ml、丹参酮ⅡA 16.31 μg/ml），分别置于蒸发皿中，再精密加入对照品适量，水浴加热蒸干，分次加甲醇溶解、洗涤，置10 ml棕色量瓶中至刻度。按“2.3”项下方法操作，结果隐丹参酮的平均加样回收率为101.22%，RSD为2.65%；丹参酮ⅡA的平均加样回收率为98.74%，RSD为2.87%。结果见表1、2。

表1 隐丹参酮回收率试验结果（n=6）Tab.1 Results of recovery test of cryptotanshinone(n=6)

表2 丹参酮ⅡA回收率试验结果（n=6）Tab.2 Results of recovery test of tanshinoneⅡA（n=6）

2.1 1样品含量测定

取5个不同批次的供试品，按“2.3”项下方法进行测定，结果见表3。

3 讨论

笔者曾考察用活血安痛酒作为供试品直接进样，不但基础吸收大，且对隐丹参酮色谱峰的出峰有干扰，可能是色素、多糖或其他水溶性成分所致，为此，先精密量取活血安痛酒20 ml置蒸发皿中，然后水浴蒸干，再分次加甲醇溶解、洗涤，定容至10 ml棕色量瓶中，作为供试品，能很好地测定隐丹参酮、丹参酮ⅡA的含量。不同批次的活血安痛酒测得的含量相差比较大，是原料差异还是制剂工艺稳定性不够，有待进一步研究，由此可知更应深化活血安痛酒质量标准，更好地保证其质量稳定性。

表3 不同供试品测定结果Tab.3 Results of different samples

本实验采用HPLC法，以隐丹参酮、丹参酮ⅡA为成分指标，对活血安痛酒进行含量测定。结果表明该法简捷、稳定、可靠，可作为有效控制活血安痛酒质量的参考指标。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典[S].一部.北京:化学工业出版社,2010:70.

[2]孙棣,刘文英,梁彩.HPLC法同时测定丹参片中4种有效成分的含量[J].中国药科大学学报,2007,38(1):51-54.

[3]安睿,王新宏,周思丽,等.HPLC测定不同产地丹参药材中脂溶性成分[J].中成药,2004,26(4):294-297.

[4]黄喜茹,曹冬,詹文红.高效液相色谱法测定冠心丹参滴丸中3种脂溶性成分的含量[J].中国医院药学杂志,2006,26(9):1054-1055.

[5]吴燕红,黄鸣清,李卓明,等.HPLC测定冠心七味片中丹参酮ⅡA、丹参酮Ⅰ、隐丹参酮和对甲氧基桂皮酸乙酯的含量[J].中成药,2006,28(4):492-495.

[6]郑晓珂,董三丽,冯卫生.HPLC法测定丹参中丹参素、丹参酮ⅡA、二氢丹参酮Ⅰ、隐丹参酮的含量[J].中国实验方剂学杂志,2003,9(6):12-15.

[7]杨允辉,张村.HPLC法测定活血通脉片中丹参酮ⅡA的含量[J].中国实验方剂学杂志,2003,9(6):15-17.

[8]杨广德,张继业,张莉,等.丹参中丹参酮ⅡA和隐丹参酮的提取方法研究[J].药物分析杂志,2006,26(12):1807-1810.