益肾活血法对慢性肾衰竭大鼠TGF-β1、CTGF的影响*

郑 杨 安 平 于水澜

黑龙江中医药大学（黑龙江哈尔滨150000）

益肾活血法是治疗慢性肾衰竭（CRF）的常用方法，前期研究表明该法能延缓CRF的发展［1］。为探讨益肾活血法延缓CRF的作用机制，本实验观察益肾活血法对CRF大鼠肾组织转化生长因子 β1（TGF-β1）、结缔组织生长因子（CTGF）蛋白表达的作用。

1 材料与方法

1.1 实验动物雄性wistar大鼠60只，体质量200～220g。黑龙江中医药大学实验动物中心提供。

1.2 实验药物益肾活血复方：由黑龙江省中医研究院提供，常规煎煮，将滤液浓缩为2g/mL；尿毒清颗粒：广州康臣药业有限公司，批号Z10970122。腺嘌呤，美国AMRESCO公司，批号0272B31。兔抗大鼠TGF-β1、CTGF多克隆抗体，武汉博士德生物工程公司提供；二步法免疫组化检测试剂，北京中山生物技术有限公司提供。

1.3 造模与给药60只大鼠随机分为5组，每组12只。即正常组、模型组、尿毒清组、益肾活血法低剂量治疗组（低剂量组）、益肾活血法高剂量治疗组 （高剂量组）。除正常组外，其余各组予2.5%腺嘌呤 250mg/（kg·d）灌胃，正常组给予等量蒸馏水，连续21d。造模结束后，低剂量组按3.77g/（kg·d）灌胃，高剂量组按11.3g/（kg·d）灌胃，尿毒清组按 1.81g/（kg·d）灌胃。 正常组、模型组给予等体积蒸馏水灌胃，治疗50d，治疗过程中大鼠死亡5只。

1.4 标本采集与检测大鼠禁食、水24h后脱颈处死，剖取双肾投入4%多聚甲醛固定。采用免疫组织化学法检测肾脏TGF-β1、CTGF蛋白表达；根据每张切片阳性反应颗粒的颜色和细胞总数的比例拟订标准。阴性（－）：偶见阳性颗粒，颜色浅黄。弱阳性（+）：阳性颗粒少于1/3，颜色呈淡棕黄。阳性（++）：阳性颗粒介于 1/3～2/3 之间，颜色介于+～+++间。 强阳性（+++）：阳性颗粒大于2/3，颜色棕褐。对结果进行定量统计，并赋分，（-）：1分；（+）：2 分；（++）：3 分；（+++）：4 分。 每张切片观察 3 个视野。

1.5 统计学处理等级资料用Ridit分析。P<0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 益肾活血法对大鼠肾组织TGF-β1的影响见表1。模型组TGF-β1表达阳性积分明显高于正常组和高剂量组，两组与模型组比较有极显著差异（P<0.01）。高剂量组阳性表达与尿毒清组比较有显著差异（P<0.05）。

2.2 益肾活血法对大鼠肾组织CTGF的影响见表2。模型组CTGF表达阳性积分明显高于正常组和益肾活血法高剂量组，两组与模型组比较有极显著差异（P<0.01）。高剂量组阳性表达与尿毒清组比较有显著差异（P<0.05）。

表1 各组大鼠肾组织TGF-β1表达比较 （n）

表2 各组大鼠肾组织CTGF表达比较 （n）

3 讨 论

肾间质纤维化的形成主要为肾小管上皮细胞损伤后的细胞因子网络失调导致的恶性循环，其中TGF-β1、CTGF是最重要的质纤维化的因子之一。TGF-β1主要分布在肾小管间质，具有促进细胞外基质增生，胶原分泌，对成纤维细胞有趋化作用，激活肾间质成纤维细胞并使其增殖。CTGF在TGF-β1的诱导下，参与间质成纤维细胞的增生、移动、黏附，肾小管上皮细胞的转化，促进细胞外基质的过量合成，导致肾间质纤维化。

HE染色结果证实［1］，模型组肾小管萎缩，间质炎症细胞浸润，间质增宽，说明肾间质纤维组织明显增生。益肾活血法高剂量组肾小管萎缩、间质炎症细胞浸润、间质增宽较模型组明显减轻。免疫组化证实，模型组肾间质中TGF-β1、CTGF蛋白表达明显增多，用益肾活血法高剂量治疗后肾间质纤维组织增生明显减少，TGF-β1、CTGF蛋白的表达减弱。说明益肾活血的作用机制可能通过降低TGF-β1表达，进而降低CTGF表达；或者通过抑制降低CTGFA表达，抑制a-SMA转化成 MyoFB，进而抑制肾小管间质细胞分裂增殖，胶原合成减少，延缓肾间质纤维化进程。

慢性肾衰竭以脾肾阳气虚衰为本，湿浊、瘀血为其标，益肾活血复方针对此病机，以补肾活血为主，兼以化浊解毒。方中黄芪补气，巴戟天等滋肾助阳；桃仁、红花、丹参等活血化瘀，当归养血活血，黄连、大黄解毒，苍术温化湿浊，诸药合用标本兼治。

［1］郑杨，张浩，李淑菊，等.益肾活血法延缓慢性肾衰竭的实验研究［J］.中医药信息，2005，22（6）：56-57.