高效液相色谱法测定偏瘫复原胶囊中阿魏酸含量

张 杰 ，赵文法 ，王 振

（1.山东省聊城市药品检验所，山东 聊城 252000； 2.山东中医药大学，山东 济南 250355）

偏瘫复原胶囊处方来源于聊城市中医院名老中医的临床经验方，由川芎、当归等6味药组方，有补气活血、祛风化痰的功效，用于气虚血瘀、风痰阻络引起的中风瘫痪、半身不遂、口眼歪斜、痰盛气亏、言语不清、足膝浮肿、行步艰难、筋骨疼痛、手足拘挛。此方已在临床使用多年，实践证明其组方合理，疗效确切。2010年版《中国药典(一部)》收载的川芎、当归都采用了高效液相色谱（HPLC）法控制其中阿魏酸的含量[1]。相关文献报道多采用反相高效液相色谱法测定含有当归和川芎的复方制剂中的阿魏酸的含量[2－6]，亦有少数采用分光光度法、波层扫描法等来检测阿魏酸的含量[7－10]。本试验在参考大量文献的基础上，采用HPLC法对偏瘫复原胶囊中主要成分阿魏酸进行了含量测定，报道如下。

1 仪器与试药

Agilent1200型高效液相色谱系统（美国安捷伦公司）；BT125D型电子分析天平（北京赛多利斯天平有限公司）；KQ100型超声波药品处理机（昆山市超声仪器有限公司）。阿魏酸对照品（中国药品生物制品检定所，批号为110773－200611）；偏瘫复原胶囊（聊城市中医医院，批号分别为 201202001，201202002，201202003）；甲醇（色谱纯，天津赛孚瑞科技有限公司），其他化学试剂均为市售分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Diamonsil C18柱（250 mm ×4.6mm，5 μm）；流动相：70% 甲醇 －0.1% 磷酸水溶液（30 ∶70）；波长：320 nm；流速：1.0 m L ／min；柱温：30 ℃；进样量：10 μL。

2.2 溶液制备

避光操作，精密称取经五氧化二磷减压干燥12 h的阿魏酸对照品适量，精密称定，加70%甲醇稀释成10μg／mL的溶液，即得对照品溶液。避光操作，取本品内容物约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入70%甲醇50 mL，密塞，称定质量，水浴加热回流30 min，放冷至室温，再称定质量，用70%甲醇补足减失的质量，摇匀，取续滤液，即得供试品溶液。取按处方不加川芎和当归的样品适量，依照供试品溶液制备方法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

干扰试验：分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液和阴性对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪，按2.1项下条件测定。结果表明，阴性对照品溶液中在与阿魏酸对照品溶液保留时间相应的位置无色谱峰，说明处方中其他组分对测定无干扰。色谱见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察：取阿魏酸对照品，精密称定，制成 0.1，1，5，10，20，50，100 μg／m L 的溶液，在 2.1 项色谱条件下，分别注入液相色谱仪测定，以质量浓度为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线，计算回归方程为 Y＝57.682X＋5.370 6，相关系数 r＝1.000。结果表明，阿魏酸质量浓度在 0.1～100μg／mL 范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验：取同一对照品溶液，按2.1项下色谱条件测定，进样10μL，连续进样6次，以峰面积计算。结果阿魏酸的 RSD为0.90%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验：依法制备供试品溶液，分别在 0，2，6，12，20，24 h时进样 10μL，以峰面积计算，结果阿魏酸的 RSD为1.44%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

重现性试验：取同一批号的样品，依法制备供试品溶液，平行制备5份，按2.1项色谱条件测定，以峰面积计算含量。结果阿魏酸的 RSD为2.20%，表明方法重现性符合要求。

加样回收试验：精密称取已知含量的供试品（批号为201202001，含量为 0.10 mg ／粒，标示装量为 0.4 g）精密加入一定量的阿魏酸对照品，按2.2项下操作，同时制备6份，按2.1项下色谱条件测定，结果见表1。

表1 阿魏酸加样回收试验结果（n＝5）

2.4 样品含量测定

对3批样品进行测定，分别按2.2项下方法制备样品，按2.1项下色谱条件测定，以峰面积计算含量。结果批号为201202001，201202002，2012003的样品含量分别为 0.104，0.105，0.107mg ／粒。

3 讨论

预试验时比较了加热回流30min、超声30min和超声60min等不同的方法，结果加热回流30 min有利于供试品溶液的制备，测定的阿魏酸含量较高。

阿魏酸溶液在碱环境中易分解，选用酸性的0.1%磷酸水溶液作为流动相，而且阿魏酸对光不稳定，试验过程中应避光操作。试验表明供试品溶液在24 h内稳定性较好。

本研究参考国内外大量有关阿魏酸含量测定方法的文献资料并多次试验，结果显示，本方法简便、准确，结果稳定，可用于控制偏瘫复原胶囊的质量及本品中阿魏酸含量的质量评价。

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