上皮-间质转化调控蛋白在前列腺癌侵袭、转移中的作用及其临床预后诊断价值*

周 毅， 姚 远， 杨剑文， 卢启海， 陈 翔， 陈悦康

广西科技大学附属柳州市人民医院泌尿外科，柳州 545006

上皮-间质转化调控蛋白在前列腺癌侵袭、转移中的作用及其临床预后诊断价值*

周 毅， 姚 远， 杨剑文， 卢启海， 陈 翔， 陈悦康

广西科技大学附属柳州市人民医院泌尿外科，柳州 545006

目的 探讨上皮-间质转化(EMT)调控蛋白在前列腺癌(PCa)侵袭、转移中的作用及其对临床预后的诊断价值。方法 收集48例PCa组织样本(PCa组)和50例良性前列腺增生(BPH)组织样本(BPH组)，免疫组化SP法检测样本神经钙黏素(N-cadherin)、上皮钙黏素(E-cadherin)表达，分析N-cadherin、E-cadherin表达与PCa患者临床资料的关系。对PCa患者进行随访，记录患者总生存期(OS)；以OS作为评价指标，采用单变量和多变量Cox比例风险模型评价患者预后的影响因素。以转化生长因子β1(TGF-β1)诱导DU-145细胞发生EMT，细胞增殖实验检测细胞增殖能力，Transwell实验检测细胞迁移能力，Western blot检测细胞E-cadherin、N-cadherin蛋白表达。结果 PCa组N-cadherin表达水平显著高于BPH组，E-cadherin表达水平显著低于BPH组(均P<0.05)。肿瘤直径≥2.5 cm者N-cadherin高表达率显著高于肿瘤直径<2.5 cm者，Ⅳ期PCa患者N-cadherin高表达率显著高于Ⅱ期和Ⅲ期PCa患者，淋巴结转移者N-cadherin高表达率显著高于无淋巴结转移者，远处转移者N-cadherin高表达率显著高于无远处转移者(均P<0.05)。Gleason分级≥7分者E-cadherin高表达率显著低于Gleason分级≤6分者，有淋巴结转移者E-cadherin高表达率显著低于无淋巴结转移者，有远处转移者E-cadherin高表达率显著低于无远处转移者(均P<0.05)。N-cadherin高表达患者OS显著低于N-cadherin低表达患者(P=0.024)，E-cadherin高表达患者OS显著高于E-cadherin低表达患者(P=0.017)。单因素和多因素分析显示，T4期肿瘤、N-cadherin高表达、E-cadherin低表达是影响患者OS的独立危险因素(均P<0.05)。细胞增殖实验显示，第24～96 h，DU-145组吸光度值显著高于NC组(均P<0.05)；Transwell实验显示，DU-145组穿膜细胞数量显著多于NC组(P<0.05)；Western blot实验显示，DU-145组N-cadherin蛋白表达水平显著高于NC组，E-cadherin蛋白表达水平显著低于NC组(均P<0.05)。结论 EMT与PCa的增殖、侵袭和迁移有关，N-cadherin、E-cadherin有可能作为PCa临床预后的诊断指标之一。

上皮-间质转化； 神经钙黏素； 上皮钙黏素； 前列腺癌； 增殖； 侵袭； 预后

前列腺癌(prostate cancer，PCa)是男性最常见的恶性肿瘤之一，虽然我国PCa发病率低于美国、英国等西方国家[1]；但是随着人口老龄化及生活方式的改变，近10年来我国PCa发病率呈明显上升趋势[2-3]。绝大多数患者早期并无典型症状，一经确诊，多数已发展成晚期[4-5]。据统计[6]，PCa患者5年生存率低于30%，其中侵袭、转移是PCa远期预后主要的影响因素。上皮-间质转化[7](epithelial-mesenchymal transitions，EMT)是细胞形态形成的基本过程，参与调节组织的修复、重建等活动。但是在恶性肿瘤发生时，EMT处于失控状态，导致肿瘤细胞与原发灶分离并转移至远处器官，这亦是肿瘤浸润、侵袭的生物学基础[8]。EMT被激活后，会调节下游靶基因，从而发挥其生物学功能。EMT发生的典型标志事件为神经钙黏素(N-cadherin)表达增强，上皮钙黏素(E-cadherin)表达减弱或缺失[9]，从而介导肿瘤细胞的转移和侵袭。鉴于此，本研究首先检测PCa和良性前列腺增生(benign prostatic hyperplasia，BPH)患者标本，分析E-cadherin、N-cadherin对PCa预后评估的价值；并进一步采用转化生长因子β(transforming growth factor-β，TGF-β)诱导PCa细胞株DU-145发生EMT，观察E-cadherin、N-cadherin在DU-145细胞增殖、侵袭和转移中的作用，现总结如下。

1 材料与方法

1.1 样本采集

选择2009年4月至2011年4月柳州市人民医院行前列腺切除术+前列腺穿刺活检术的48例PCa组织样本(PCa组)，术后均经病理学证实为PCa。另选择50例同期在该医院行尿道前列腺气化电切术术后病理学证实为BPH的组织样本(BPH组)作为对照。所有组织样本采集后立即置于液氮中保存待用。两组患者组织样本采集前均未接受放疗、化疗等处理。本研究经医院伦理委员会批准，患者签署知情同意书。PCa组患者术后进行随访，术后第1年每3个月随访1次，此后6个月随访1次。

1.2 细胞来源

人PCa细胞系DU-145购自美国国家菌种保藏中心(American type culture collection，ATCC)，细胞接种于DMEM培养液(含10%胎牛血清、100 U/mL青霉素和100 mg/mL链霉素)，恒温培养箱中以37℃、5%CO2培养。

1.3 实验试剂

DMEM培养液购自美国Gibco公司，RIPA裂解液、胰蛋白酶、二甲基亚砜(DMSO)、胎牛血清、BCA蛋白浓度测定试剂盒购自广州碧云天生物技术研究所，TGF-β1冻干粉购自美国Peprotech公司，细胞计数试剂盒CCK-8(cell counting kit-8)购自日本Dojindo molecular technologies，Transwell小室、Matrigel人工基底膜购自美国BD公司，兔抗人N-cadherin多克隆抗体、兔抗人E-cadherin多克隆抗体、β-actin小鼠单克隆抗体、辣根过氧化酶标记的羊抗兔IgG二抗购自Santa Cruz公司，免疫组化SP试剂盒购自武汉博士德生物制品有限公司，聚烯酰胺、PVDF膜、十二烷基硫酸钠购自美国Sigma公司。

1.4 免疫组化SP法检测样本N-cadherin、E-cadherin表达

从液氮中取出组织样本，制成厚度约为4 μm的连续切片，梯度水化，滴加3%过氧化氢室温下孵育10 min，消除内源性过氧化氢酶。高压锅煮沸进行抗原修复；再加入1∶500稀释的一抗，37℃孵育20 min，PBS液冲洗3次，4℃孵育过夜。再用PBS冲洗3次，滴加1～2滴二抗，37℃孵育15 min，DAB显色液显色10 min，蒸馏水反复冲洗，苏木精复染、梯度脱水、透明、中性树胶封片。用PBS代替一抗作为阴性对照，显微镜下观察并拍照。采用二次计分法对结果进行评价。染色面积：阳性细胞计数<10%计为0分，阳性细胞计数10%～计为1分，阳性细胞计数20%～计为2分，阳性细胞计数50%～计为3分。染色强度：无染色计为0分，呈淡黄色计为1分，黄色或深黄色计为2分，褐色或深褐色计为3分。染色面积得分×染色强度得分代表蛋白的表达水平；<2分表示为“-”，2～分表示为“+”，3～分表示为“”，≥4分表示为“”；“-”和“+”为低表达(阴性)，“”和“”为高表达(阳性)。

1.5 TGF-β1处理DU-145细胞

取TGF-β1冻干粉，1 200 r/min离心10 min，加入10 nmol/L枸橼酸溶解，使之终浓度为0.1 mg/mL，再加入0.1%胎牛血清进一步稀释至1 μg/mL，于-20℃保存待用。将DU-145细胞分为2组：DU-145组和正常对照组(NC)，DU-145细胞在DMEM培养液培养，待生长融合度≥70%时，PBS冲洗，DU-145组在培养液中加入配置好的TGF-β1溶液，使之终浓度为10 ng/mL，NC选择不加药培养液，两组细胞均继续培养24 h后，倒置显微镜下观察细胞形态并拍照。

1.6 细胞增殖实验

取对数生长期细胞，接种于96孔板中，接种密度为2×103个/孔，向每孔中加入20 μL CCK-8，置于37℃下孵育2 h。分别于细胞培养24、48、72、96 h时检测450 nm处吸光度(A)值，每次实验重复3次，取3次平均值。

1.7 细胞迁移实验

取对数生长期细胞，用不含血清的培养液将浓度调整为1.0×109个/孔，Transwell上室每孔植入150 μL细胞，下室加入600 μL含有20%胎牛血清的RPMI 1640培养液作为趋化剂，细胞培养48 h后，轻轻拭去表面非侵袭性细胞，4%多聚甲醛固定，苏木精染色10 min，200倍荧光显微镜下统计穿透滤膜的细胞数。

1.8 Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白表达

取对数生长期细胞，弃去培养液，PBS冲洗，加入离心管中，再加入1 mL RIPA裂解液置于冰浴上裂解30 min，4℃条件下离心15 min，BCA蛋白浓度试剂盒检测蛋白纯度。采用Western blot检测E-cadherin、N-cadherin蛋白水平，将20 μg蛋白提取液置于10%SDS-PAGE电泳分离，常规湿法转膜，加入5%脱脂牛奶孵育封闭2 h。加入1∶500 E-cadherin抗体、1∶500 N-cadherin抗体和1∶100 β-actin抗体，4℃孵育24 h。再滴加二抗37℃孵育2 h。PBS冲洗3次，按照ECL化学发光显影试剂盒方法显影，以β-actin作为内参照，分析目的条带相对表达量。

1.9 统计学方法

2 结果

2.1 组织样本中N-cadherin、E-cadherin表达

N-cadherin分布于细胞膜和细胞核(图1)，PCa组N-cadherin表达水平显著高于BPH组(P<0.05)(表1)。E-cadherin主要分布于细胞膜(图2)，PCa组E-cadherin表达水平显著低于BPH组(P<0.05)(表1)。

A：PCa组；B：BPH组图1 PCa组和BPH组N-cadherin表达(苏木精-伊红染色，×200)Fig.1 N-cadherin expression in PCa group and BPH group(HE staining，×200)

A：PCa组；B：BPH组图2 PCa组和BPH组E-cadherin表达(苏木精-伊红染色，×200)Fig.2 E-cadherin expression in PCa group and BPH group(HE staining，×200)

组别例数N-cadherin高表达低表达E-cadherin高表达低表达PCa组4832(66.7)16(33.3)20(41.7)28(58.3)BPH组5018(36.0)32(64.0)41(82.0)9(18.0)χ2值9.21616.953P值0.0020.000

2.2 N-cadherin、E-cadherin表达与PCa患者临床资料的关系

N-cadherin表达与年龄、Gleason分级、肿瘤分期、多发病灶等一般资料无关(均P>0.05)，肿瘤直径≥2.5 cm者N-cadherin高表达率显著高于肿瘤直径<2.5 cm者，Ⅳ期PCa患者N-cadherin高表达率显著高于Ⅱ期和Ⅲ期PCa患者，淋巴结转移者N-cadherin高表达率显著高于无淋巴结转移者，远处转移者N-cadherin高表达率显著高于无远处转移者，各组间比较差异均具有统计学意义(均P<0.05)。E-cadherin表达与年龄、肿瘤直径、组织学分级、肿瘤分期、多发病灶等一般资料无关(均P>0.05)，Gleason分级≥7分者E-cadherin高表达率显著低于Gleason分级≤6分者，淋巴结转移者E-cadherin高表达率显著低于无淋巴结转移者，远处转移者E-cadherin高表达率显著低于无远处转移者，各组间比较差异均具有统计学意义(均P<0.05)，见表2。

表2 N-cadherin、E-cadherin表达与PCa患者临床资料的关系[n(%)]Table 2 Relationship between N-cadherin，E-cadherin expression and clinicopathological data in PCa patients[n(%)]

2.3 N-cadherin、E-cadherin表达与PCa患者生存预后的关系

生存分析显示，N-cadherin高表达患者总生存期(overall survival，OS)显著低于N-cadherin低表达患者(P=0.024)(图3A)；E-cadherin高表达患者OS显著高于E-cadherin低表达患者(P=0.017)(图3B)。单因素和多因素分析显示，T4期肿瘤、N-cadherin高表达、E-cadherin低表达是影响患者OS的独立危险因素(均P<0.05)，见表3、4。

A：N-cadherin表达与总生存期的关系；B：E-cadherin表达与总生存期的关系图3 N-cadherin、E-cadherin表达与PCa患者生存预后的关系Fig.3 Relationship between N-cadherin，E-cadherin expression and prognosis in PCa patients

临床病理因素RR95%CIP值年龄(≥65vs.<65)0.9260.484～1.2320.766肿瘤直径(≥2.5vs.<2.5)1.2600.938～2.4660.578Gleason分级(≥7vs.≤6)0.8270.539～1.3930.439组织学分级(Ⅳvs.Ⅲ、Ⅱ)0.9191.104～1.8560.618肿瘤分期(T4vs.T3、T2)1.9591.056～2.4640.027淋巴结转移(否vs.是)1.1050.775～1.6330.460远处转移(否vs.是)1.2070.634～1.8870.572多发病灶(否vs.是)1.0360.817～1.7390.778N-cadherin表达(高vs.低)1.8761.147～2.1890.016E-cadherin表达(高vs.低)2.1471.352～3.2420.023

2.4 TGF-β1处理后DU-145细胞形态学变化

与NC组比较，TGF-β1处理后DU-145细胞间隙增加，排列松散，细胞形态由椭圆形变成长梭形，提示DU-145组细胞发生了上皮向间质的转化，见图4。

表4 多因素分析影响PCa患者OS的临床病理因素Table 4 Multivariate analysis of clinicopathologic factors which influenced OS of PCa patients

2.5 细胞增殖、迁移能力

细胞增殖实验结果显示，第24～96 h，DU-145组吸光度值显著高于NC组(均P<0.05)(图5A)；Transwell实验结果显示，DU-145组穿膜细胞数量显著多于NC组(P<0.05)(图5B)；Western blot实验结果显示，DU-145组N-cadherin蛋白表达水平显著高于NC组，E-cadherin蛋白表达水平显著低于NC组(均P<0.05)(图5C，图5D)。

A：NC组，B：DU-145组图4 TGF-β1处理后DU-145细胞形态学变化(×200)Fig.4 Morphological changes of DU-145 cells after TGF-β1 treatment(×200)

3 讨论

PCa是常见的男性恶性肿瘤，临床调查显示，早期PCa患者5年生存率高达90%[10]。然而依然有15%～20%的患者可能会发生侵袭和转移，对于发生转移的PCa患者，其5年生存率低于30%。因此明确PCa侵袭、转移的作用机制，对提高疾病的诊疗效果、改善患者预后具有重要意义。对于上皮来源的恶性肿瘤，当发生上皮向间质转化时能够伴发获得间质表型和缺失上皮表型，导致肿瘤细胞获得较强的侵袭、转移能力。Zheng等[11]通过敲除CCAT2基因激活PCa细胞的EMT能力，结果发现细胞的增殖、侵袭和迁移能力显著增强，提示EMT与PCa的侵袭、转移密切相关。EMT是通过细胞内信号路径，将上皮细胞转化为间质细胞，多种生物分子参与了此过程。明确生物分子参与的过程及调节信号，对发现新的治疗方法和作用靶点有重要意义。

钙黏素(cadherins)属于Ca2+依赖性糖蛋白，在维持组织正常形态、协调细胞运动中发挥着关键作用[11]。N-cadherin、E-cadherin均属于cadherin家族成员，E-cadherin通过稳定细胞之间的连接作用，抑制细胞的侵袭和转移。既往研究表明，E-cadherin在上皮恶性肿瘤中广泛存在，且E-cadherin表达水平与肿瘤的分级有关，在乳腺癌、胃癌、肝癌等低分化型肿瘤细胞中E-cadherin表达明显下调或不表达[12-13]。N-cadherin是一种仅在神经外胚层或中胚层中表达的钙粘黏素[14]，如神经细胞和造血细胞等，而在正常上皮细胞表达较少。研究显示PCa细胞中N-cadherin呈高表达，且与高Gleason分级、高临床分期密切相关[15]。Nalla等[16]报道称PCa中存在“钙黏素转换”过程，即E-cadherin转换为N-cadherin，此过程也被证实为执行EMT的重要机制。Tanaka等[17]证实N-cadherin能够促进肿瘤细胞与间质、内皮的粘附作用，诱导细胞发生侵袭和转移。本研究显示，PCa组N-cadherin表达水平显著高于BPH组，E-cadherin表达水平显著低于BPH组，提示E-cadherin可能是肿瘤抑制因子，而N-cadherin可能是一种肿瘤促进因子。

A：TGF-β1处理后细胞增殖能力；B：TGF-β1处理后细胞迁移能力；C：TGF-β1处理后细胞N-cadherin蛋白表达；D：TGF-β1处理后细胞E-cadherin蛋白表达；与NC组比较，*P<0.05图5 TGF-β1处理后细胞增殖、迁移能力及N-cadherin、E-cadherin表达变化Fig.5 Proliferation and migration ability and expression of N-cadherin and E-cadherin in NC group and DU-145 group

进一步分析N-cadherin、E-cadherin与PCa临床资料的关系，结果显示N-cadherin表达与较大肿瘤直径、高组织学分级、淋巴结转移、远处转移有关，E-cadherin与低Gleason分级、无淋巴结转移、无远处转移有关，提示N-cadherin、E-cadherin可以作为潜在的PCa诊断、侵袭、转移的预测指标。Kim等[18]证实E-cadherin在高危PCa表达水平显著低于中、低危PCa，低水平E-cadherin与PCa发展有关。Jennbacken等[19]对雄激素剥夺治疗的PCa患者进行观察，结果发现存在激素抵抗的PCa患者，特别是伴远处转移的PCa患者N-cadherin明显升高。诸如透明质酸等肿瘤抑制药物，其作用机制亦与抑制N-cadherin表达有关[20]。在生存预后方面，N-cadherin高表达患者OS显著低于N-cadherin低表达患者，E-cadherin高表达患者OS显著高于E-cadherin低表达患者。多因素分析显示N-cadherin高表达、E-cadherin低表达是影响患者OS的独立危险因素，说明N-cadherin、E-cadherin亦可以作为PCa预后的预测指标。

TGF-β1是经典的EMT诱导因子[21]，本研究采用TGF-β1诱导PCa患者DU-145细胞，镜下观察发现DU-145细胞发生了EMT典型形态学变化，与既往报道结论一致[22]。细胞增殖实验和Transwell实验均显示DU-145细胞增殖能力和迁移能力显著增强，进一步证实EMT对PCa增殖、侵袭的诱导作用。目前对E-cadherin的调控机制研究较多，但是关于N-cadherin的调节机制仍存在一定争议。最新研究显示，N-cadherin能够激活PI3K/Akt信号通路，上调下游单核细胞趋化因子表达，诱导肿瘤血管生成因子形成，促进肿瘤的增殖和转移[23]。本研究显示DU-145组N-cadherin蛋白表达水平显著高于NC组，E-cadherin蛋白表达水平显著低于NC组，说明PCa的EMT过程与促进N-cadherin表达和抑制E-cadherin有关，N-cadherin、E-cadherin有望成为PCa治疗的潜在靶点之一。

综上所述，EMT与PCa的增殖、侵袭和迁移有关，N-cadherin、E-cadherin有可能作为PCa临床预后的预测指标之一。本研究的局限性：对患者临床结局的随访时间有限，特别是没有足够病例分析N-cadherin、E-cadherin与PCa复发的关系。另外限于研究的深度，本文尚未分析N-cadherin、E-cadherin的调控机制，这些都将在接下来的研究中深入探讨。

[1] 彭鹏，龚杨明，鲍萍萍，等.中国2008年前列腺癌发病、死亡和患病情况的估计及预测[J].中华流行病学杂志，2012，33(10)：1056-1059.

[2] 齐金蕾，王黎君，周脉耕，等.1990-2013年中国男性前列腺癌疾病负担分析[J].中华流行病学杂志，2016，37(6)：778-782.

[3] 韩苏军，张思维，陈万青，等.中国前列腺癌死亡现状及流行趋势分析[J].中华泌尿外科杂志，2012，33(11)：836-839.

[4] Vermassen T，Praet C V，Vanderschaeghe D，et al.Capillary electrophoresis of urinary prostate glycoproteins assists in the diagnosis of prostate cancer[J].Electrophoresis，2014，35(7)：1017-1024.

[5] Garibaldi F，Capuani S，Colilli S，et al.TOPEM：A PET-TOF endorectal probe，compatible with MRI for diagnosis and follow up of prostate cancer[J].Nucl Instrum Methods Phys Res A，2013，702(1)：13-15.

[6] Herbert C，Liu M，Tyldesley S，et al.Biochemical control with radiotherapy improves overall survival in intermediate and high-risk prostate cancer patients who have an estimated 10-year overall survival of >90%[J].Int J Radiat Oncol Biol Phys，2012，83(1)：22-27.

[7] Thevenot P T，Saravia J，Jin N，et al.Radical-containing ultrafine particulate matter initiates epithelial-to-mesenchymal transitions inairway epithelial cells[J].Am J Respir Cell Mol Biol.，2013，48(2)：188-197.

[8] Bitting R L，Boominathan R，Rao C，et al.Development of a method to isolate circulating tumor cells using mesenchymal-based capture[J].Methods，2013，64(2)：129-136.

[9] Davalos V，Moutinho C，Villanueva A，et al.Dynamic epigenetic regulation of the microRNA-200 family mediates epithelial and mesenchymal transitions in human tumorigenesis[J].Oncogene，2011，31(16)：2062-2074.

[10] Bul M，van Leeuwen P J，Zhu X，et al.Prostate cancer incidence and disease-specific survival of men with initial prostate-specific antigen less than 3.0 ng/mL who are participating in ERSPC Rotterdam[J].Eur Urol，2011，59(4)：498-505.

[11] Zheng J，Zhao S，He X，et al.The up-regulation of long non-coding RNA CCAT2 indicates a poor prognosis for prostate cancer and promotes metastasis by affecting epithelial-mesenchymal transition[J].Biochem Biophys Res Commun，2016，480(4)：508-514.

[12] Brasch J，Harrison O J，Honig B，et al.Thinking outside the cell：how cadherins drive adhesion[J].Trends Cell Biol，2012，22(6)：299-310.

[13] Pal M，Koul S，Koul H K.The transcription factor sterile alpha motif(SAM)pointed domain-containing ETS transcription factor(SPDEF)is required for E-cadherin expression in prostate cancer cells[J].J Biol Chem，2014，289(32)：12222-12231.

[14] Ando K，Uemura K，Kuzuya A，et al.N-cadherin regulates p38 MAPK signaling via association with JNK-associated leucine zipper protein：implications for neurodegeneration in Alzheimer disease[J].J Biol Chem，2011，286(9)：7619-7628.

[15] Tanaka H，Kono E，Tran C P，et al.Monoclonal antibody targeting of N-cadherin inhibits prostate cancer growth，metastasis and castration resistance[J].Nat Med，2010，16(12)：1414-1420.

[16] Nalla A K，Estes N，Patel J，et al.N-cadherin mediates angiogenesis by regulating monocyte chemoattractant protein-1 expression via PI3K/Akt signaling in prostate cancer cells[J].Exp Cell Res，2011，317(17)：2512-2521.

[17] Tanaka H，Kono E，Tran C P et al.Monoclonal antibody targeting of N-cadherin inhibits prostate cancer growth，metastasis and castration resistance[J].Nat Med，2010，16(12)：1414-1420.

[18] Kim H，He Y，Yang I，et al.δ-Catenin promotes E-cadherin processing and activates β-catenin-mediated signaling：implications on human prostate cancer progression[J].Biochim Biophys Acta，2012，1822(4)：509-521.

[19] Jennbacken K，Tesan T，Wang W，et al.N-cadherin increases after androgen deprivation and is associated with metastasis in prostate cancer[J].Endocr Relat Cancer，2010，17(2)：469-479.

[20] Itano N，Atsumi F，Sawai T，et al.Abnormal accumulation of hyaluronan matrix diminishes contact inhibition of cell growth and promotes cell migration[J].Proc Natl Acad Sci U S A，2002，99(6)：3609-3614

[21] 邹勇，曾玉兰.JNK对TGF-β1诱导的人肺上皮-间质转分化的调控作用[J].华中科技大学学报：医学版，2014，43(6)：658-662.

[22] Ko H，So Y，Jeon H，et al.TGF-β1-induced epithelial-mesenchymal transition and acetylation of Smad2 and Smad3 are negatively regulated by EGCG in human A549 lung cancer cells[J].Cancer Lett，2013，335(1)：205-213.

[23] Sarray S，Siret C，Lehmann M，et al.Lebectin increases N-cadherin-mediated adhesion through PI3K/AKT pathway[J].Cancer Lett，2009，285(2)：174-181.

(2016-12-26 收稿)

Effect of Epithelial-mesenchymal Transition Regulation Protein in PCa Invasion and Metastasis and Its Diagnostic Value for Clinical Prognosis

Zhou Yi，Yao Yuan，Yang Jianwenetal

Department of Urology Surgery，Liuzhou Municipal People’s HospitalAffiliated to Guangxi University of Science and Technology，Liuzhou 545006，China

Objective To explore the effect of epithelial-mesenchymal transition(EMT)regulation protein in prostate cancer(PCa)invasion and metastasis and its diagnostic value of clinical prognosis.Methods Totally，48 cases of PCa tissue samples(PCa group)and 50 cases of benign prostatic hyperplasia(BPH)tissue samples(BPH group)were collected.Expression levels of N-cadherin and E-cadherin were detected by immunohistochemical SP method in tissue samples，the relationship between N-cadherin，E-cadherin and clinical data in PCa patients was analysed.PCa patients were followed up，the overall survival(OS)was recorded，with OS serving as evaluation index.The prognostic factors were evaluated by univariate and multivariate Cox proportional hazards model.EMT was induced by TGF-β1in DU-145 cells line.The cell proliferation ability was detected by cell proliferation assay.Cell invasion and migration ability was detected by Transwell.E-cadherin and N-cadherin protein expression was detected by Western blotting.Results In PCa group，the expression of N-cadherin was significantly higher than that in the BPH group，and the expression of E-cadherin was significantly lower than that in the BPH group(bothP<0.05).The N-cadherin high expression rate was significantly higher in tumor with diameter≥2.5 cm than that in the tumor with diameter<2.5 cm；N-cadherin high expression rate in stage ⅣPCa patients was significantly higher than that in stage Ⅱ and Ⅲ PCa patients；the high expression rate of N-cadherin was significantly higher in patients with lymph node metastasis than in those without lymph node metastasis；the high expression rate of N-cadherin was significantly higher in patients with distant metastasis than in those without distant metastasis(allP<0.05).The E-cadherin high expression rate was significantly lower in patients with Gleason score≥7 than in those with Gleason score≤6；the high expression rate of E-cadherin was significantly lower in patients with lymph node metastasis than in those without lymph node metastasis；E-cadherin high expression rate was significantly lower in patients with distant metastasis than in those without distant metastasis(P<0.05).The overall survival was significantly lower in N-cadherin high expression patients than in N-cadherin low expression patients(P=0.024)；the overall survival was significantly higher in E-cadherin high expression patients than in E-cadherin low expression patients(P=0.017).Univariate and multivariate analysis showed that T4stage tumors，high expression of N-cadherin and low expression of E-cadherin were independent risk factors for overall survival(allP<0.05).Cell proliferation test showed that，absorbance value in DU-145 group in 24-96 h was significantly higher than that of normal control(NC)group(P<0.05).Transwell results showed that the number of transmembrane cells in DU-145 group was significantly higher than that in NC group(P<0.05).Western blotting showed that，N-cadherin proein expression was significantly higher in DU-145 group than in NC group，E-cadherin proein expression was significantly lower in DU-145 group than in NC group(bothP<0.05).Conclusion EMT is related to proliferation，invasion and migration of PCa，and N-cadherin and E-cadherin can be regarded as one of the predictors of clinical prognosis of PCa.

epithelial-mesenchymal transitions； N-cadherin； E-cadherin； prostate cancer； proliferation； invasion； prognosis

*广西壮族自治区卫生和计划生育委员会自筹经费科研课题(No.Z2014435)

R737.25

10.3870/j.issn.1672-0741.2017.04.006

周 毅，男，1979年生，副主任医师，E-mail：zyfifa@163.com