结直肠腺瘤癌变序列组织中ciRS-7 和miR-7 的表达水平及关系探讨

李伊倩，谭嘉圣，张宝庭，陈毅斌

（东莞市松山湖中心医院消化内科 广东 东莞 523000）

结直肠癌是消化道常见的恶性肿瘤，具有较高的发病率和病死率，2012 年各恶性肿瘤发病率中，病死率位居第5 位[1]。近年来，随着人口老龄化趋势加剧，以及人们生活、工作等方式改变，结直肠癌的发病率逐年上升，并呈现出一定的年轻化趋势，极大地威胁到了人们的健康乃至生命安全[2]。数据报道[3]显示，进展期结直肠癌的5 年生存率为7%，而早期结直肠癌则高达92%。由此不难看出，若能够早期诊断及治疗，结直肠癌的预后会得到显著的改善，然而从以往的研究来看，超过半数的结直肠癌患者确诊时癌细胞已经发生转移。至今，结直肠癌的发病机制仍不明确，早期诊断也无特效方法，结合当前医学界对恶性肿瘤分子学机制的研究，探索结直肠癌发病的分子学机制，寻找无创的早期检测结直肠癌发病的分子生物学对结直肠癌的早期诊断十分重要。为此，本研究纳入20 例同时具有结直肠腺瘤及结直肠腺癌患者，针对环状RNA 分子-7（ciRS-7）和微小RNAs-7（miR-7）的表达及其相关性进行分析，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

纳入东莞市松山湖中心医院2019 年7 月—2021 年6 月收集的20 例同时具有结直肠腺瘤及结直肠癌病例进行研究，均行电子结肠镜检查及活检。男12 例（60.00%），女8 例（40.00%）；年龄35 ～75 岁，平均年龄（56.32±2.47）岁。所有患者的病例诊断均由2 名以上资深病理专家确诊。以上标本均通过患者家属的知情同意。纳入标准：①同时具有结直肠腺瘤及结直肠癌患者；②诊断明确，且未经过放疗、化疗等抗肿瘤治疗；③有完整的临床病理资料。排除标准：①来源于其他部分的肿瘤发生结直肠转移者；②术前已接受放化疗或者生物治疗者。

1.2 方法

采集癌旁正常肠黏膜、结直肠腺瘤、结直肠癌新鲜组织标本，取材过程中，每份组织标本均分为3 部分，其中2 部分离体后30 min 内保存于EP 管中，并迅速转存于-80 ℃冰箱，用于提取总RNA；另1 部分送病理科进行病理诊断。

采用荧光定量PCR（qRT-PCR）检测组织标本中ciRS-7 和miR-7 的表达水平。（1）活检新鲜冰冻标本总RNA 中提取：将标本从-80 ℃冰箱中取出，立即取组织块约100 mg，转入研磨器中，加入液氮后继续研磨至粉状，再加入1 mL TRIzol 充分混匀粉末，参照常规TRIzol RNA 方法取，提取后置于-80 ℃冰箱中保存。（2）PCR 反应：核酸蛋白检测仪检测RNA 浓度和纯度并反转录成cDNA，合成的cDNA 置于-20 ℃冰箱中保存，适当稀释后用于PCR 反应。参照PubMed 中基因序列，利用ABI 公司的Primer Express 软件进行引物设计，由上海生物工程技术公司合成。ciRS-7 和miR-7 引物序列，见表1。

表1 ciRS-7 和miR-7 引物序列

1.3 统计学方法

2.结果

2.1 各组织标本中ciRS-7、miR-7 表达水平比较

ciRS-7 表达：结直肠癌和结直肠腺瘤表达水平高于癌旁正常肠黏膜，结直肠癌表达水平高于结直肠腺瘤，差异均有统计学意义（P＜0.05）；miR-7 表达：结直肠癌和结直肠腺瘤表达水平低于癌旁正常肠黏膜，结直肠癌表达水平低于结直肠腺瘤，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 各组织标本中ciRS-7、miR-7 表达水平比较（± s）

表2 各组织标本中ciRS-7、miR-7 表达水平比较（± s）

注：*与癌旁正常肠黏膜P ＜0.05，△与结直肠腺瘤P ＜0.05。

组织例数ciRS-7miR-7癌旁正常肠黏膜200.95±0.120.39±0.07结直肠腺瘤201.48±0.20*0.61±0.10*结直肠癌202.07±0.31*△1.02±0.18*△

2.2 各组织标本中ciRS-7、miR-7 表达的相关性

在各组织标本中，ciRS-7 和miR-7 的表达呈显著负相关（P＜0.05），见表3。

表3 各组织标本中ciRS-7、miR-7 表达相关性

3.讨论

结直肠癌的发病过程是渐进性的过程，其恶变途径主要表现为“腺瘤→腺癌”，报道指出，超过2/3 的腺癌是由腺瘤进展而来[4]。但是，尽管临床对结直肠癌的发病机制进行了深入探究，然而其癌变途径和分子机制尚不明确。

CircRNA 广泛存在与真核细胞中，是一种内源性非编码新型RNA 分子，其不存在5’和3’末端，被RNA 外切酶破坏的可能性较低，与传统线性RNA 相比，其稳定性更加突出，而上述特征的存在，也使其相较于miRNAs和非编码长链RNA 作为生物学标志物应用在恶性肿瘤的早期诊治中更为适合[5]。CiRS-7 是RAN 分子之一，形状为环状，其功能主要为miRNA 海绵、转录和转录后调节和与RNA 结合蛋白相互作用。但是国内有关CiRS-7 与结直肠癌相关内容的研究并不多见[6]。miRNAs 是非编码RNA，有长19 ～23 个的核苷酸，参与了细胞的增殖、侵袭、转移和凋亡[7]。RNA-7 是一种新型的肿瘤标志物，其在多种肿瘤中的表达均表现出下调，有研究指出其是恶性肿瘤预后不良的重要危险因素[8]。然而国内尚无miR-7在正常肠黏膜-结直肠腺瘤-肠癌序列癌变组织中表达方面的研究。本文结果显示，结直肠癌、结直肠腺瘤、正常肠黏膜各组织标本中，CiRS-7 的表达水平逐渐下降，而miR-7 的表达水平则逐渐上升，差异有统计学意义（P＜0.05），说明了在结直肠腺瘤癌变序列组织中，的确存在CiRS-7、miR-7 异常表达的现象，其中CiRS-7表达上调，miR-7 下调。因此可以说明，CiRS-7、miR-7在结直肠癌的发生发展过程中发挥了一定的作用。进一步分析发现，CiRS-7、miR-7 的表达呈显著负相关，差异有统计学意义（P＜0.05），提示二者相互负性调控关系。由此可以推测，在结直肠癌细胞中，CiRS-7 可抑制miR-7 的表达，其可能发挥出了miR-7 抑制剂的作用。由于国内相关报道并不多见，本研究尽管获得上述研究结果，但仍有待深入探究并证实。

综上所述，结直肠腺瘤癌变序列组织中，ciRS-7 表达上升，miR-7 表达下降，且二者之间呈显著的负相关，提示ciRS-7 和miR-7 有望成为结直肠腺瘤及腺癌早发现、早诊断、早治疗的分子生物学指标。