红芪复方对心肌缺血犬心肌梗死与血液酶学作用研究

王 强， 施洪飞， 赵光辉， 闻剑飞

(1.合肥师范学院体育科学系，安徽合肥230601;2.扬州大学体育学院，江苏 扬州225009;3.陕西职业技术学院，陕西西安710100)

现代中医理论研究认为［1］，缺血性心脏病是本虚标实、虚实夹杂之患，以气虚为主，同时以血瘀为著，气虚血瘀是其主要病机，因此益气活血成为其主要的治疗方法。据此本实验选用益气药-黄芪总皂苷和活血药-红花黄色素组方配伍，采用结扎冠状动脉前降支，制备犬急性心肌缺血模型［2］。从整体水平观察红芪复方对心肌缺血犬心肌梗死的影响，探讨两者配伍对心肌缺血的保护作用及其机制。

1 材料与方法

1.1 试验药物 黄芪总皂苷，从豆科植物膜荚黄芪Astragalosides membranaceus Burge.的干燥根中提取，为淡黄色粉末，纯度超过65%，提取方法:膜荚黄芪原药，以95%乙醇加热回流提取3次，每次10倍量，提取1.5 h/次，上大孔树脂柱，依次用蒸馏水、40%、70%、98%乙醇洗脱、蒸干，再热回流提取3次，蒸干［3］。红花黄色素从菊科植物红花 Carthamus tinctorius L.的干燥花中提取，为橙黄色粉末，纯度为96.4%，提取方法:红花原药浸泡30 min，70℃水溶液10倍、12倍量2次提取，提取20 min/次，蒸干［4］。盐酸利多卡因注射液，山东华鲁制药有限公司，批号B0710241;合心爽(盐酸地尔硫卓片)30 mg/片，天津田边制药有限公司，批号0010107;戊巴比妥钠，德国进口分装，批号060919;硝基蓝四唑(N-BT)，上海化学试剂厂，批号20070102;血管紧张素(ET)、6酮前列环素(6-keto-PGF1α)、血栓素B2(TXB2)测定试剂盒由解放军总医院东亚放免技术研究所提供。

1.2 动物 健康成年杂种犬，雌雄兼用，30只，平均体质量(14.5±2)kg，由北京市通利实验动物养殖厂提供［京动许字(2000)第010号］。

1.3 仪器 电动呼吸机(SD-5)，上海医疗器械股份有限公司;DGD-300-2A医用高频电刀，北京贝村电子科技有限公司;MP-150型多道生理记录仪，美国BIOPAC公司;低温离心机，上海安亭科学仪器厂;FT-630G型自动γ计数仪，北京;HPIAS-1000型医学图像分析系统，北京科海公司。

1.4 方法 将30只犬随机分为5组，每组6只，分别为模型组、对照组(Diltiazem，5 mg/kg)、红花组(红花黄色素60 mg/kg)、黄芪组(黄芪总皂苷180 mg/kg)、红芪复方组(红花黄色素60 mg+黄芪总皂苷180 mg);采用左冠状动脉前降支(LDA)，于犬的左冠状动脉前降支的第二、三分支之间结扎，复制急性心肌梗死模型，冠状动脉结扎稳定15 min，经十二指肠插管给药(地尔硫卓片、红花组、黄芪组及红芪均用氯化钠注射液或CMC钠溶解)，给药体积为1 mL/kg，模型组给予相同体积的0.09%氯化钠注射液。分别于结扎前、结扎 15 min 后、药后30、60、90、120、180 min 股静脉取血离心，血样冻存待测。

1.4.1 心肌梗死面积测定 药后180 min处死动物迅速取出心脏，用生理盐水洗净称质量，将左心室均匀横切成5片，置于0.5%的 N-BT(用 pH7.4 ～7.7 的0.2%Tris液配置)溶液中染色37℃水浴10 min，洗去多余的染料，梗死区不着色，非梗死区呈蓝紫色，用扫描仪对心脏切片进行扫描，后各片称质量。

1.4.2 ET、TXB2和 6-keto-PGF1α测定 按试剂盒说明要求用放免法测定血浆ET、TXB2和6-keto-PGF1α。

1.4.3 CK测定 采用速率法测定血清CK。

1.5 统计学方法 实 验数据以实测值和给药前后差值变化百分率两种形式的均数±标准差(±s)表示，以不同时间的实测值进行给药前后自身比较，其变化百分率进行组间比较，t检验判断其显著性。

2 结果

2.1 对犬心肌梗死面积的影响 与模型组相比，各组均能明显降低心肌梗死面积，差异显著(P＜0.05或P＜0.01)。与黄芪组、红花组比，红芪组能明显降低心肌梗死面积，差异显著(P＜0.05)，具有统计学意义。结果见表1。

表1 各给药组对心肌缺血犬心肌梗死面积的影响(n=6)

2.2 对犬血清CK影响 与模型组相比，除黄芪组药后60 min，各组在药后30～180 min均能明显降低血清CK增幅(P＜0.05或P＜0.01)。红芪组较黄芪组、红花组更能降低血清CK增幅，但差异不明显。对照组、红花组、黄芪组和红芪组组间无显著性差异。结果见图1。

图1 各给药组对心肌缺血犬血清肌酸激酶(CK)的影响

2.3 对犬血浆ET的影响 与模型组相比，红花组各时段无显著差异性;黄芪组各时段无显著性差异;红芪组在药后120 min能明显降低血浆ET增幅(P＜0.05)。红芪组较黄芪组、红花组更能降低血浆ET增幅，但差异不明显。各药物组间无显著性差异。结果见图2。

图2 各给药组对心肌缺血犬血浆内皮素(ET)的影响

2.4 对犬血浆TXB2的影响 与模型组相比，红芪组在药后180 min能明显降低血浆TXB2增幅，差异显著(P＜0.05);红花组和黄芪组对血浆TXB2增幅无显著性影响。红芪组较黄芪组、红花组更能降低血浆TXB2增幅，但差异不明显。各药物组间无显著性差异。结果见图3。

图3 各给药组对心肌缺血犬血浆血栓素B2(TXB2)的影响

2.5 对犬血浆6-keto-PGF1α的影响 与模型组相比，红芪组较黄芪组、红花组更能升高血浆6-keto-PGF1α，但差异不明显。各药物组间无显著性差异。结果见图4。

图4 各给药组对心肌缺血犬血浆6-酮前列环素(6-keto-PGF1а)的影响

2.6 对犬血浆6-keto-PGF1α/TXB2的影响 与模型组相比，红花组在药后90、120、180 min均能明显增加 K/T(P＜0.05或 P ＜0.01);黄芪组在药后 90、120、180 min 均能明显增加K/T(P ＜0.05 或 P ＜ 0.01);红芪组在药后 30、60、90、120、180 min均能明显增加K/T(P＜0.05或P＜0.01)。与黄芪组相比，红芪组在药后60 min能明显增加K/T(P＜0.05)，其余各给药组间无显著性差异。结果见图5。

图5 各给药组对心肌缺血犬血浆6-酮前列环素/血栓素 B2(6-keto-PGF1а/TXB2)的影响

3 讨论

心肌缺血、缺氧进而发生心肌变性坏死是心肌梗死导致心功能衰竭的根本原因，而心肌梗死面积则是影响心功能的关键因素，也是衡量心肌梗死严重程度的重要指标［5］。一般来说，左心室MIS越大，左心室舒缩功能下降越明显，恢复越差，后果越严重。现在已经把缩小心肌梗死面积作为抗心肌缺血药物的主要疗效指标。本实验研究结果表明，红花组、黄芪组、红芪组均能明显缩小心肌梗死面积，而且复方组较单味药有更为明显的效果，这为其用于临床提供了有力依据。

CK广泛存在于全身组织中，心肌缺血时，ATP合成障碍，心肌能量不足，自由基生成增加，损伤细胞膜结构导致通透性增加，CK从胞浆中漏出，血清中CK活性明显升高，通过测定血清中CK活性可一定程度上反映心肌损伤程度［6］。本课题研究表明，红芪组、红花组和黄芪组均能明显降低血清中CK的活性，其减轻心肌损伤程度与其缩小心肌梗死面积的结论相一致。

内皮素是从内皮细胞分离并纯化的一种迄今为止所知最强的缩血管物质［7］。急性心肌缺血发病时，血浆和心肌ET含量明显升高，而且与病情和预后呈明显的正相关，是急性心肌缺血的一个早期敏感的判断疗效指标［8］。

血栓素A2(TXA2)是体内很强的血小板诱聚剂和血管收缩剂，而前列环素(PGI2)则是血小板聚集抑制剂和血管扩张剂。在正常生理状态下，TXA2与PGI2在体内处于动态平衡，参与心脏血流动力学和硬化机制的调节［9］。由于两者在体内不稳定，半衰期较短，所以国内外均以测定TXB2和6-keto-PGI1α作为评判其浓度的标准［10］。本实验研究证实急性心肌缺血时，血浆中ET、TXB2升高和6-keto-PGI1α含量下降，三者具有相关性，三者共同加剧了心肌缺血时心肌损伤。而红芪复方降低了血浆中ET-1和TXB2的增加幅度，红芪、黄芪和红花均能增加血浆6-keto-PGF1α和升高6-keto-PGF1α/TXB2的作用，但复方组效果优于单味药，证明红芪复方具有维持心肌缺血时血浆中K/T平衡，降低心肌缺血时内皮素的释放，改善内皮细胞功能的作用。因此，可以认为红芪复方是通过降低心肌缺血时ET的过量释放和调控K/T严重失衡所导致的微血管强烈收缩和微血管内血栓的形成与堵塞，遏制无复流现象，从而减轻心肌缺血时心肌损伤程度。

综上所述，红芪复方能明显缩小心肌梗死面积、减少心肌酶的释放。红芪复方能明显减轻心肌缺血犬血浆中ET的增加幅度，增加血浆中PGF1α，使K/T比值升高，促进血浆中K/T恢复平衡，改善血管内皮细胞的内分泌功能。黄芪总皂苷与红花黄色素配伍具有明显的协同保护缺血心肌作用。

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