同种接合型酵母菌株Y2HGold的原生质体融合研究

常登龙，洪 玉，杨永军，张贺翠，薛丽琰，杨 昆，朱利泉，王小佳(西南大学农学与生物科技学院，重庆400715)

同种接合型酵母菌株Y2HGold的原生质体融合研究

常登龙，洪 玉，杨永军，张贺翠，薛丽琰，杨 昆，朱利泉*，王小佳
(西南大学农学与生物科技学院，重庆400715)

为避开有性融合的局限性，挖掘同种接合型酵母菌株无性融合的潜在应用价值，利用质粒构建了酵母双杂交工程菌株Y2HGold的亮氨酸缺陷型和色氨酸缺陷型菌株;接着采用酶解法进行四因素三水平正交实验获得原生质体制备方案:酶解温度30℃、处理时间80min、预处理剂含0.1%(w/v)巯基乙醇和0.1%(w/v)EDTA－2Na，酶解液为1.5%(w/v)蜗牛酶和1.5%(w/v)纤维素酶混合，使得原生质体的制备及再生率分别达82%和37%;最后采用PEG诱导融合的方法，经过同样正交实验得到Y2HGold无性融合条件为:PEG浓度35%、温度25℃、时间40min、pH5.8。筛选得到的无性融合子在遗传上稳定。

酵母，原生质体，无性融合，无性融合菌株

酵母为单细胞型真菌，在通常情况下，繁殖体为二倍体，但是在特定条件的诱导下，可以使其产生单倍体孢子并萌发为单倍体繁殖体。根据酵母第三号染色体上特殊等位基因MATa和MATɑ的差异，把单倍体酵母划分为a和α两种交配型。两种交配型细胞经细胞壁上特定的性凝集素诱导而交配，恢复为二倍体;如酿酒酵母的a和α两种类型的性凝集素为细胞的交配提供有利条件(图1)。a性凝集素包括AGA1p和AGA2p两个亚基，分别由两个不相连的AGA1和AGA2基因编码。a性凝集素靠AGA1p亚基来锚定。其中两种交配型细胞都编码这种亚基，AGA2p亚基只在a型细胞中表达，与a凝集互补的α－凝集素则是被单基因SAG1编码的。……