高糖状态下心肌成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原表达变化的观察

戴 斌，崔 猛，张 宏

（1.天津医科大学总医院内分泌科，天津300052；2.天津医院创伤骨科，天津300211；3.天津医科大学代谢病医院肥胖代谢科，天津300070）

糖尿病心肌病（diabetic cardiomyopathy，DC）是一种独立的、特异的糖尿病并发症，与继发于高血压、冠心病或瓣膜性心脏病的病理、生理改变不完全相同。DC是由糖代谢紊乱引起的心肌细胞原发性损伤及心肌功能障碍，其临床特征主要以左心室肥厚及心肌舒缩功能缺损为主，随着病程的进展会出现充血性心力衰竭，是糖尿病患者致残和致死的重要原因之一。临床研究发现，糖尿病患者多表现为向心性心室肥厚，可伴有左心室功能受损，心脏顺应性下降。除心肌细胞肥大外，心肌纤维化及间质重构亦是DC时心室舒缩功能障碍、心力衰竭的主要机制之一［1］。

1 材料与方法

1.1 材料 出生1～3d的SD幼鼠15只，平均体质量8.5g，购自天津医科大学动物实验中心。DMEM培养基购于美国Sigma公司。胎牛血清购于英国Gibco公司，胰蛋白酶购于美国Sigma公司，Vimentin波形蛋白单克隆抗体购于武汉博士德生物工程有限公司。Ⅰ型前胶原羧基端肽（PⅠCP）与Ⅲ型前胶原氨基端肽（PⅢNP）ELISA试剂盒购于美国BPB公司。Trizol试剂购于美国Invitrogen公司，定量PCR相关试剂购于日本TaKaRa公司，引物由上海生工生物工程有限公司合成。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养 将幼鼠处死后剪取心尖组织。DMEM洗，剪碎，Ⅱ型前胶元酶消化后收集上清液。加入10%胎牛血清，离心重悬细胞，于5%CO2、37℃孵箱中培养2h，吸去上清液，重新加入培养液，原代培养细胞生长成细胞单层。用0.25%胰蛋白酶消化以后，以1∶2比例传代培养。……