两种灭酶方法对苦杏仁及苦巴旦杏仁中苦杏仁苷含量的影响

赵江林 ，刘建红 ，侯拥 ，杨晓君

（1.新疆维吾尔自治区克拉玛依市中心医院，新疆 克拉玛依 834000； 2.新疆维吾尔自治区乌鲁木齐市中医医院，新疆 乌鲁木齐 830000； 3.新疆农业大学食品科学与药学学院，新疆 乌鲁木齐 830052）

苦杏仁为蔷薇科植物杏 Prunus armeniaca L.的成熟果实苦味种仁，我国主产于新疆、黑龙江、辽宁、吉林、内蒙古、宁夏、甘肃、河北、陕西、山西等省区，具有祛寒止咳、燥湿祛痰、除腐愈伤等功效，临床用于寒性咳嗽、湿性痰多、支气管炎及各种皮肤创伤[1]。巴旦杏为蔷薇科植物巴旦杏 Amygdales communist L.的成熟果实，根据植物种子苦或甜分为苦巴旦杏 Amygdalus communist L.val.amara 和甜巴旦杏 Amygdalus communist L.var.dulcis 两种，我国新疆、甘肃、陕西、内蒙古等地有栽培，国外北非、地中海沿岸地区和欧洲其他地区等亦有栽培[2]，具有润肺止咳、润肠软便、祛寒壮腰、热肤生辉、身寒壮阳、提高视力、填精固精等功效，临床主治干寒性或黑胆质性疾病，如干性肺虚咳嗽、身瘦体弱、记忆减退、大便不通、寒性腰膝酸软[1]228-229，近年来的研究有所增加[3]。苦杏仁苷（amygdalim）属芳香族氰苷，在植物界分布广泛，其中以蔷薇科植物（杏、桃、李）种子的含量最高[4]。其结构式为苯羟基乙氰-β-D葡萄糖-6-β-D葡萄糖苷，是由1分子苯甲醛、1分子氢氰酸和2分子葡萄糖组成，本身无毒，遇热易分解，生成的氢氰酸有剧毒。其主要生理功能有镇咳、平喘、抗炎、镇痛、抗肿瘤、降血糖和抗溃疡[5]。本试验中，对苦杏仁和苦巴旦杏仁进行不同灭酶方法处理，采用紫外分光光度法测定苦杏仁苷的含量，并进行含量比较分析[6]，旨在为建立适宜的苦杏仁苷加工方法提供基础依据。

1 仪器与试药

TU-1800SPC型紫外可见分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；AL204型电子分析天平（上海梅特勒-托利多仪器有限公司）；RE-52B型旋转蒸发仪(上海亚荣生化仪器厂)；HH-S型数显恒温水浴锅(江苏省金坛市医疗仪器厂)；SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵（郑州长城科工贸有限公司）。苦杏仁、苦巴旦杏仁购于新特药医药公司（批号为20100925001），经本院生药室鉴定为杏 Prunus armeniaca L.和巴旦杏 Amygdales communist L.的成熟干燥种仁；苦杏仁苷对照品(C20H27NO11＝457.44，中国药品生物制品检定所，批号为820-200002)；无水乙醇，石油醚，蒸馏水均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 苦杏仁苷对照品溶液配制

精密称取在105℃恒温干燥至恒重的苦杏仁苷对照品2.5 mg，置5 mL容量瓶中，用蒸馏水溶解，定容至刻度，制成质量浓度为0.5 g/L的苦杏仁苷对照品贮备溶液。

2.2 供试品溶液制备

2.2.1 药材处理

分别称取4份药材（苦杏仁3份、苦巴旦杏仁1份），均20 g，快速冲洗，去除灰尘，室温下晾干，备用。

2.2.2 灭酶

将4份供试品分别用不同方法进行灭酶处理，苦杏仁1号沸水煮5 min，苦杏仁 2号沸水煮 10 min，苦杏仁 3号蒸 30 min，苦巴旦杏沸水煮10 min。灭酶后，将供试药材自然晾干后，平铺烘箱中，于60℃下干燥1 h，取出，放冷至室温，粉碎机粉碎，过20目筛。

2.2.3 脱脂

将粉碎过的4份供试品中分别加入40 mL的石油醚[7]，在70～80℃下，水浴搅拌脱脂40 min，抽滤，滤饼再重复提取2次，每次用石油醚20 mL和15 mL，得4份脱脂醚。

2.2.4 溶液制备

将4份脱脂醚中分别加入40 mL的无水乙醇[8]，在80～90℃下水浴搅拌提取40 min，趁热过滤，滤饼再重复提取2次，每次用无水乙醇20 mL，合并3次滤液，用旋转蒸发仪蒸馏回收无水乙醇，至浓缩液约20 mL，倒入干燥至恒重的蒸发皿中，水浴锅上蒸干，用水溶解，移至100 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，得苦杏仁1号、苦杏仁2号、苦杏仁3号、苦巴旦杏仁供试品溶液。

2.3 紫外吸收光谱测定

精密称取苦杏仁苷对照品2.5 mg，制成质量浓度为0.5 g/L的苦杏仁苷对照品溶液，在220～300 nm波长范围内测定吸光度 A值，并以蒸馏水作空白，记录其紫外吸收光谱。结果见图 1。苦杏仁苷于258，264，275 nm 波长处有3个吸收峰，前2个吸收峰显示较大吸收强度，又以264 nm波长处峰值最大。

图1 苦杏仁苷的紫外光谱图

2.4 方法学考察

标准曲线制备：精密称取在105℃度恒温干燥至恒重的苦杏仁苷对照品50 mg，置50 mL容量瓶中，用蒸馏水溶解，定容至刻度，得1 g/L的苦杏仁苷对照品贮备溶液，置冰箱（4℃左右）保存，备用。分别取上述溶液 0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0 mL，用蒸馏水稀释，定容至5 mL[9]。以蒸馏水作空白，在264 nm波长处测定吸光度 A值。以质量浓度为横坐标、吸光度为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A＝0.644 6C-0.048 5，r＝0.999 2（n＝8）。结果表明，苦杏仁苷质量浓度在0.1～0.8 g/L范围内与吸光度线性关系良好。

精密度试验：取苦杏仁2号供试品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，离心，取上清液，在264 nm波长处测定吸光度。结果 6 次试验吸光度 A值为 0.315，0.313，0.314，0.316，0.312，0.313，平均 0.313，RSD ＝ 0.47% （n ＝6），表明仪器精密度良好。

稳定性试验：取苦杏仁2号供试品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，离心，取上清液在264 nm波长处间隔一定时间测定吸光度。结果 0.5，1.0，2.0，5.0，10.0，15.0，20.0，25.0，30.0，35.0，40.0，45.0 h 内 的 平 均 吸 光 度 值 为 0.311，RSD＝0.57%（n＝12），表明供试品溶液在45 h内吸光度基本稳定。

重复性试验：取苦杏仁样品约10 g，精密称定，依法操作，平行制备6份供试品溶液并测定吸光度。结果吸光度 A值分别 为 0.327，0.318，0.323，0.306，0.311，0.315， 平 均 0.317，RSD ＝2.44%（n＝6），表明方法重复性良好。

加样回收试验：取苦巴旦杏仁供试品溶液5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，离心，取等体积5 mL的5份上清液，分别加入0.5～2.5 mg的苦杏仁苷对照品，于264 nm波长处分别测定吸光度，计算回收率。结果见表1。

2.5 样品含量测定

分别从上述4种供试品溶液中各取5 mL，置50 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，离心，取上清液在264 nm波长处分别测定吸光度，并计算其中苦杏仁苷的含量。结果见表2。可见，苦杏仁中2号即沸水煮10 min灭酶效果最佳，苦杏仁苷含量最高位2.80%，苦杏仁中苦杏仁苷含量均高于苦巴旦杏仁。

表1 苦杏仁苷加样回收试验结果（n＝5）

表2 样品含量测定结果

3 讨论

苦杏仁中含有苦杏仁酶，在提取苦杏仁苷过程中，酶会将苦杏仁苷水解[10]，降低提取率。因此，选择合适的灭酶方法是决定提取率高低的影响因素之一。本试验中进行了同一品种杏仁采用不同灭酶方法、不同品种杏仁采用同一灭酶方法对苦杏仁苷提取率的影响试验，结果显示，不同的灭酶方法对杏仁中的苦杏仁苷含量有影响。

苦杏仁和苦巴旦杏中含有脂质成分，在样品处理过程中，若有脂质成分的存在，会把苦杏仁苷包裹在内，从而使得苦杏仁苷提取不完全。本试验中采用了石油醚进行脱脂。大多文献显示用乙醚[11]或苯来脱脂，但乙醚和苯具有强的挥发性，且苯还具有毒性，二者对环境有污染作用且脱脂不完全，相比较而言，石油醚的脱脂效果较二者好。

在采用紫外分光光度法进行含量测定时，有文献用甲醇作为溶剂。虽然苦杏仁苷在甲醇中溶解性较好，但在苦杏仁苷的最大吸收波长处甲醇也显示有吸收，会影响到苦杏仁苷的含量测定。为此，采用水作为溶剂。苦杏仁苷在水中的溶解度较好，不会影响苦杏仁苷的含量测定。

参考文献：

[1]中国医药百科全书编委会.中国医药百科全书（维吾尔医药）[M].上海：上海科学技术出版社，2005：230.

[2]刘勇民，沙吾提·伊克木.维吾尔药志（上）[M].乌鲁木齐：新疆科技卫生出版社，1999：77-82.

[3]杨晓君，韩海霞 .巴旦杏的近代研究[J].中国药业，2009，18（10）：85-86.

[4]邓 毅，张艳萍.甘肃镇原杏仁中苦杏仁苷的提取及含量测定[J].甘肃中医，2000，13(1)： 51-52.

[5]赵宇瑛，尚 冰，宋晓东.苦杏仁苷的研究进展[J].安徽农业科学，2005，33(6)：1 097-1 098.

[6]周 英，郜 文.苦杏仁的生理功能和保健饮料研制[J].食品工业科技，2000，21(5)：49-50.

[7]闾肖波，苏宝根，杨亦文，等.纯苦杏仁苷的制备[J].中国医药工业杂志，2006（3）：165-167.

[8]车凤斌.苦杏仁苷提取工艺研究[J].食品工业科技，1997(3)：11-13.

[9]田士林，李 莉.蔷薇科植物种仁中苦杏仁苷含量测定与比较[J].安徽农业科学，2006，34(16)：3 885-3 890.

[10]赤堀昭.桃仁、苦杏仁及桃仁方剂中苦杏仁苷的酶水解[J].国外医学：中医中药分册，1985(7)：31-35.

[11]马 辰，李春花.苦杏仁中苦杏仁苷的含量测定[J].中国实验方剂学杂志，2000，6（2）：17.