高效液相色谱法测定奥沙利铂相关杂质左旋异构体含量

李金花，刘 恒

（哈药集团药物研究院，黑龙江 哈尔滨 150020）

笔者在本试验中建立了正相高效液相色谱法测定奥沙利铂相关杂质左旋异构体含量的方法。

1 仪器与试药

Waters e2695型高效液相色谱仪。注射用奥沙利铂(哈药集团生物工程有限公司，批号为 20110901，20110902，20110903)；奥沙利铂对照品(中国食品药品检定研究院，批号为100584-200902)；奥沙利铂左旋异构体对照品（European Pharmacopoeia Reference Standard，批号为 2.1）；甲醇、乙醇为色谱纯，水为重蒸纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：手性色谱柱（Chiralcel-OC-H，日本Daicel化学工业公司，填料为甲氨酸酯纤维素衍生化合物吸附硅胶(250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：甲醇 - 乙醇（70 ∶30）；检测波长：254 nm；柱温：40 ℃ ；流速：0.3 mL /min。

2.2 专属性试验

精密量取奥沙利铂对照品、奥沙利铂左旋异构体适量，加甲醇溶解并制成一定质量浓度的混合对照品溶液，另取乳糖适量，加甲醇制成一定质量浓度的辅料溶液即空白对照溶液。分别取混合对照品溶液和空白对照溶液各20 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。结果在拟订色谱条件下，辅料对杂质D检测无干扰，检测方法专属性强，分离度好。色谱图见图1。

图1 高效液相色谱图

2.3 方法学考察

线性关系考察：配制含奥沙利铂左旋异构体限度浓度（0.1%）的40%，60%，80%，100%，120%的溶液5份。按拟订色谱条件，取上述各溶液20 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，以质量浓度（C,μg/mL）为横坐标、峰高（A，μv）为纵坐标进行线性回归，得回归方程 A＝540 C-3.4(r＝0.999 2)。结果表明，本品质量浓度在0.24～0.72 μg/mL范围内与峰面积线性关系良好。

回收率试验：配制相对于左旋异构体（杂质D）限度浓度（0.1%)的 80%，100%，120%3个低、中、高不同浓度的奥沙利铂对照品溶液各3份，各精密量取20 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱图，计算平均回收率，结果见表1。

精密度试验：取加入一定量左旋异构体的供试品溶液，分别由2个分析人员使用不同仪器进行测试。结果平均含量分别为0.118%(RSD 为 2.0%)及 0.113%(RSD 为 2.1%)。

稳定性试验：取本品5瓶加甲醇溶解并迅速转移至100 mL容量瓶中，并用甲醇稀释至刻度，放置10 min后，精密量取上清液6 mL置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度,摇匀，避光存放，于0，2，4，6，8 h时进样，以杂质 D的峰高来考查溶液的稳定性。结果表明，注射用奥沙利铂供试品溶液非常稳定，在8 h内无杂质D生成。

最低检出限：在拟订色谱条件下，当质量浓度为0.15 μg/mL，进样量为 20 μL时，S/N＞3，即奥沙利铂左旋异构体的最低检出限为 3.75 ng。

表1 杂质D回收率试验结果(n＝9)

2.4 样品中左旋异构体的含量测定

取本品适量，加甲醇溶解并制成每1 mL含0.6 mg的溶液，作为供试品溶液；另取奥沙利铂对照品及左旋异构体对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1 mL含奥沙利铂0.6 mg、每1 mL含左旋异构体0.3 μg的溶液，摇匀，作为对照品溶液。精密量取供试品溶液和对照品溶液各20 μL分别进样。结果均未检出杂质左旋异构体。

3 讨论

奥沙利铂是继顺铂、卡铂之后的第3代新型铂类抗癌药物，用于进展期结肠癌、直肠癌一线治疗。其注射剂——注射用奥沙利铂，由于疗效确切、不良反应较小而被广泛应用[1]。为了保证产品质量及临床用药安全，特对其质量标准中的相关杂质左旋异构体进行了检测方法研究，并进行了严格控制。由于左旋异构体结构与奥沙利铂结构相近，采用反相高效液相色谱法很难分离，故确定采用正相系统建立检测方法。经全波长扫描，本杂质在254 nm波长处有最大吸收，故选用254 nm作为测定波长。确定的检测方法准确、简便、快速，无辅料干扰，适用于注射用奥沙利铂制剂中杂质D的检测。

参考文献：

[1]王燕莉，邱日想，蔡晔芬，等.奥沙利铂的药理作用与临床应用研究[J].北方药学，2012，9(12)：19-20.