HPLC法测定金线草不同部位没食子酸的含量

樊宝娟，刘雪峰，曾爱国，常 春，傅 强*(.西安交通大学药学院，西安 7006；2.陕西省食品药品检验所，西安 70065)

金线草为民间草药，始载于《本草拾遗》。其为蓼科金线草属植物金线草Antenoronfiliforme(Thunb.)Roberty et Vautier，以根或全草入药，其味辛、苦，性凉[1]。又名毛蓼、山蓼、一串红、铁拳头、红花铁菱角、蓼子七、鸡心七、猪蓼七、海根[1-6]。该药性淡、平，具有凉血止血、清热利湿、散瘀止痛之功效，主治风湿骨痛、胃痛、咳血、吐血、便血、血崩、经期腹痛、产后血瘀腹痛、跌打损伤等症[7]。文献记载，同属短毛金线草根茎含有没食子酸(gallic acid)、左旋儿茶精(catechin)、左旋表儿茶精(epicatechin)、左旋表儿茶精-3-O-没食子酸酯(epicatechin-3-O-gallate)、原矢车菊素B2(procyanidin B2)、原矢车菊素B2-3-O-没食子酸酯(procyanidin B2-3-O-gallate)。赵友兴等[8]从金线草的乙醇提取物中共分离鉴定了11个化合物：没食子酸、腺苷、槲皮素等。其中没食子酸是可水解鞣质的单体，具有抗病毒作用。本文采用高效液相色谱法测定了金线草不用部位中没食子酸的含量，进一步为金线草的开发利用提供依据。

1 仪器与试药

1.1仪器 Waters1525高效液相色谱仪，Waters717检测器，Empower2487色谱工作站(美国沃特斯公司)；Sartorius BS224S电子天平(德国赛多利斯公司)。

1.2试药 金线草药材，自采于陕西秦岭和巴山地区，共8批，经鉴定；对照品及对照药材，均由中国食品药品检定研究院提供；没食子酸(批号：110831-200803)；甲醇为色谱纯(美国天地公司)；水为超纯水；其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1色谱条件 采用Kromasil C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相[9]：甲醇-1 mL·L-1磷酸溶液(4∶96)；流速：1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；检测波长272 nm。在上述条件下，供试品中没食子酸色谱峰与其他杂质峰可达到基线分离，分离度大于1.5。见图1。

2.2溶液的配制

2.2.1对照品溶液的制备 精密称取没食子酸对照品8.20 mg，加甲醇溶解并定容至100 mL，制成质量浓度为82.0 μg·mL-1对照品溶液。

图1 HPLC图

2.2.2供试品溶液的制备 取本品适量，粉碎，取样品约0.2 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入体积分数为50%甲醇溶液50 mL，密塞， 加热回流3 h，放冷，滤过，滤液蒸干，用体积分数50%甲醇溶液溶解并转移至5 mL量瓶中，用体积分数50%甲醇溶液稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3重复性实验 取样品(批号1主根)共6份，精密称定，分别按2.2.2项下的方法制备供试品溶液，按上述色谱条件进行测定，没食子酸含量的RSD为1.98%，结果表明样品重复性良好。

2.4线性关系考察 分别精密吸取质量浓度为8.20，16.4，41.0，82.0，164.0，205.0和410.0 μg·mL-1没食子酸对照品溶液10 μL，在上述2.1色谱条件下测定峰面积，以峰面积(Y)对对照品进样量(X，μg)作标准曲线，计算回归方程：Y=3 156.8X-5 364.1，r=1(n=7)，表明没食子酸对照品的进样量在0.082～4.1 μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。

2.5精密度实验 取对照品溶液，连续进样6次，考察其峰面积，结果6 次没食子酸峰面积的RSD为0.33%。

2.6稳定性实验 取样品1-B的供试品溶液分别在0，4，8，12，16，20和24 h测定，其RSD为0.58%。

2.7加样回收率实验 取已测得含量的样品(批号1主根)6份各0.1 g，分别精密加入质量浓度为8.20 μg·mL-1的对照品溶液2 mL，挥干溶剂，再照供试品溶液同法制备，按2.1色谱条件进行测定，结果6份的平均回收率为101.3%，RSD为1.7%。见表1。

表1 没食子酸加样回收实验结果

2.8样品含量测定 按上述色谱条件，测定8批样品，结果见表2。

表2 金线草药材中没食子酸含量测定结果

3 讨论

含量测定提取方法的考察：分别以体积分数50%乙醇、乙醇、甲醇、水作为提取溶剂，结果体积分数50%甲醇效果最佳。分别采用加热回流、索氏提取、超声提取方法，结果加热回流提取效果最佳。分别回流2，3和4 h，结果3和4 h测定结果相近，故提取时间定为回流3 h。

对金线草不同部位的没食子酸含量做了初步研究，从测定结果看，其各部位没食子酸含量：茎叶>主根>须根>果实，其中茎叶中没食子酸含量最高，达到0.311 mg·g-1，而果实中则最低，只有0.021 mg·g-1。且不同批次金线草之间的没食子酸含量也有差异，分析应该与其生长环境和采集时间等因素有关。由于金线草目前尚无栽培品，故对其不同部位的成分研究，有利于有效合理地利用其现有资源。

参考文献：

[1] 湖北省卫生局.湖北中草药志(二)[M].武汉:湖北人民出版社，1982: 633

[2] 全国中草药汇编组.全国中草药汇编：上册[M].北京：人民卫生出版社，1975: 534.

[3] 江苏新医学院.中药大辞典：上册[M].2版.上海：上海科学技术出版社，2006: 1957，1981.

[4] 崔同寅.全国重名易混中药鉴别手册[M].北京：中国医药科技出版社，1992: 39.

[5] 李世全.秦岭巴山天然药物志[M].西安：陕西科学技术出版社，1987: 86.

[6] 陕西中药普查办公室.陕西中药名录[M].西安：陕西科学技术出版社，1988: 107.

[7] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志：第25卷[M].北京：科学出版社，1988: 121.

[8] 赵友兴，李红芳，马青云，等.金线草化学成分研究[J].中药材，2011，34(5): 704-707.

[9] 侯鸿军，王莉.HPLC法测定余甘降脂片中没食子酸的含量[J].西北药学杂志，2014，29(1): 22-24.