HPLC-ELSD法测定含三七中成药的皂苷成分的含量

王 芮，郭 华(.解放军307医院药学部，北京 0007；2.军事医学科学院门诊部，北京 00850)

三七皂苷是中药三七的主要成分，具有扩张血管、降低心肌耗氧量、抑制血小板凝集、延长凝血时间、降血脂、清除自由基、抗炎、抗氧化等药理作用[1]。按照《中国药典》(2010年版)含三七的中成药共61个，剂型包含胶囊剂、片剂、丸剂、颗粒剂、合剂、搽剂、散剂、贴膏剂、滴丸剂、锭剂、气雾剂、栓剂12种[2]。本文主要在文献方法[3-7]的基础上，进一步优化并建立含三七中成药中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的含量测定方法，以期对中成药中的三七成分进行更好地质量控制。

1 仪器与试药

1.1仪器 Aglient 1100高效液相色谱仪：配有自动脱气机，四元泵，自动进样器，DAD检测器，Chemstation 3D工作站，35900E数模转换连接盒；蒸发光检测器ELSD2000 (Alltech，America)。

1.2试药 乙腈为色谱纯，由Fisher公司提供，水为纯净水。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1均购自中国食品药品检定研究院。待测含三七的中成药样品为市售。

2 方法与结果

2.1色谱条件与系统适用性 色谱柱：Grace Previl C18(250 mm×4.6 mm， 5 μm)，以乙腈为流动相A，以水为流动相B，色谱条件为：0～15 min (A∶B 17∶83)→30～60 min (A∶B 30∶70)。ELSD检测器：漂移管温度107 ℃，喷雾管温度107 ℃，气流3.0 L·min-1，不分流。理论板数按人参皂苷R1计算应不低于5 000。

2.2供试品溶液的制备 取成药适量，研细，过60目筛，取粉末约1.0 g，精密称定，置于具塞锥形瓶中，精密加入甲醇10 mL，密塞，称定质量，超声提取0.5 h后，用甲醇补足缺失质量，摇匀滤过，弃去初滤液，取续滤液，作为供试品溶液。

2.3对照品溶液的制备 精密称取三七皂苷R1对照品、人参皂苷Rg1对照品和人参皂苷Rb1对照品适量，加甲醇制成每1 mL含三七皂苷R1 0.1 mg、人参皂苷Rg1 0.4 mg和人参皂苷Rb1 0.4 mg的混合对照品溶液，即得。

2.4专属性实验 结果表明，在此色谱条件下，其他成分不影响皂苷成分的测定。结果见图1。

图1 HPLC-ELSD图

2.5线性关系考察 精密称定对照品三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1对照品适量，用甲醇配制为每1 mL含三七皂苷R1 0.1 mg、人参皂苷Rg1 0.4 mg和人参皂苷Rb1 0.4 mg的混合对照品溶液。分别吸取2，4，6，8，10，15和20 μL注入液相色谱仪，测定色谱图，记录峰面积，分别对进样量和峰面积取常用对数，得到回归方程，见表1。

表1 三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的线性关系

2.6精密度 吸取三七皂苷R1 0.1 mg·mL-1、人参皂苷Rg1 0.4 mg·mL-1和人参皂苷Rb1 0.4 mg·mL-1的混合对照品溶液10 μL，重复进样5次，计算各色谱峰的峰面积RSD分别为三七皂苷R1 1.91%、人参皂苷Rg1 2.23%和人参皂苷Rb1 1.36%，基本符合含量测定的要求。

2.7重复性 精密称取成药粉末1 g各6份，置于具塞锥形瓶中，分别精密加入甲醇各10 mL，密塞，浸泡1 h，并时时振摇，滤过，取续滤液10 μL注入液相色谱仪，记录峰面积。三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1的RSD分别为2.33%，2.71%和2.86%。基本符合含量测定的要求。

2.8回收率 精密称取成药粉末1 g各6份，置于具塞锥形瓶中，分别加入0.96 mg·mL-1三七皂苷R1溶液1.0 mL、1.12 mg·mL-1的人参皂苷Rg1溶液2.5 mL和1.01 mg·mL-1人参皂苷Rb1溶液2.0 mL，补足甲醇至10 mL，称定质量，超声提取0.5 h后，用甲醇补足缺失质量，摇匀过滤，取续滤液5 μL，注入液相色谱仪，测定色谱图，记录3种皂苷的峰面积，计算回收率，结果见表2。

表2 回收率实验结果

2.9含量测定 取成药(6个批号)按照2.1项下条件测定含量，结果见表3。

表3 三七皂苷R1、人参皂苷Rg1和Rb1的含量测定结果

3 讨论

中国药典中使用HPLC-UV法测定三七药材中的3七皂苷R1、人参皂苷Rg1和人参皂苷Rb1含量，作者采用HPLC-ELSD法，在阴性对照中无杂质峰干扰3种皂苷类成分的测定，可显著消除其他成分对三七皂苷的含量测定的干扰，增强该方法的专属性。

在提取溶剂的考察中，前期实验考察了甲醇、75%甲醇和50%甲醇对3种皂苷成分的提取率，发现人参皂苷Rg1和Rb1在3种溶剂中的提取率差别不大，但三七皂苷R1在使用体积分数50%甲醇提取时，由于杂质峰的干扰、峰面积明显增加，体积分数75%甲醇和甲醇的提取率相差不大，因此本方法最终选用甲醇进行提取，测定的回收率结果较好。

参考文献：

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[3] 黄海欣， 高光伟. HPLC-ELSD测定复方丹参片中三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Rb1的含量[J]. 中国药师， 2008， 11(4): 404-406.

[4] 段瑞， 沙东旭， 杨文. 高效液相色谱-蒸发光散射法测定红药片中三七皂苷R1及人参皂苷Rg1、Re、Rb1的含量[J]. 沈阳药科大学学报， 2008， 25(5): 376-380.

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