紫外分光光度法测定氮氧供体型非甾体抗炎药ZLR-8原料药的含量

杨 静，罗 俊，刘文英，张奕华，黄海燕(.南京医科大学药学院，南京 66；.中国药科大学药物分析教研室，南京 0009；.中国药科大学新药研究中心，南京 0009；.南京长澳医药科技有限公司，南京 00)

ZLR-8，化学名为2-(2，6-二氯苯基氨基)苯乙酸-4-(4-苯基-1，2，5-噁二唑-2-氧化物-3-)甲氧基苯甲酯，是一种新型的一氧化氮供体型双氯芬酸的衍生物[1-2](结构式见图1)。有关ZLR-8的药理、毒理、药代、制剂、原料含量测定及有关杂质等研究工作已有文献报道[1-9]。在ZLR-8原料药含量测定方面，杨静等从ZLR-8的化学结构和理化性质出发，采用非水毛细管电泳法、HPLC法等建立了ZLR-8原料药的含量测定方法[3-4]。HPLC法是目前药物分析领域中应用广泛的分析方法之一，适用于原料药中有关物质检查及制剂中有效成分的含量测定。非水毛细管电泳法是毛细管电泳分析方法的拓宽，可用于分析水中溶解度小的药物，但是，其所需仪器设备普及性不强，限制了其在常规分析工作中的应用。本文根据ZLR-8结构中含有苯环等大共轭体系，首次建立了一种快速简便的紫外可见分光光度法来测定ZLR-8原料药的含量，该方法准确性高、重复性好，所测定结果与所报道的其他含量测定方法相一致。

图1 ZLR-8的化学结构式

1 仪器与试药

1.1仪器 756-MC紫外分光光度计(上海光学仪器厂)。

1.2试药 ZLR-8对照品(质量分数99.7%，HPLC面积归一化法)及3批原料药，均由南京长澳医药科技有限公司提供；甲醇为色谱纯；水为纯化水。

2 方法与结果

2.1测定波长的选择 用ZLR-8对照品配制质量浓度为10 μg·mL-1的甲醇溶液，以甲醇为空白，在200～400 nm波长处进行紫外扫描，记录紫外吸收光谱。结果表明，本品在203，223和271 nm处有最大吸收。考虑到203 nm处的吸收为末端吸收，223 nm处的吸收靠近末端吸收，对测定有一定的干扰，故实验中选择271 nm为检测波长。

2.2线性实验 取60 ℃干燥至恒质量的ZLR-8对照品约10 mg，精密称定，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇约50 mL，超声20 min使其溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取该溶液1，2.5，5，7.5和10 mL，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀。以紫外分光光度法在271 nm波长处测定吸光度。以质量浓度C(μg·mL-1)为横坐标、吸光度A为纵坐标，进行线性回归，得线性方程：A=3.31×10-2C-4.50×10-3，r=0.999 8，样品质量浓度在2.056～20.56 μg·mL-1范围内，与吸光度呈良好的线性关系。

2.3稳定性实验 取含量测定项下的溶液，分别在室温放置0，2，4，6，8，10和12 h后，以紫外分光光度法于271 nm处测定吸光度A，以12 h内吸光度(A)的变化观察样品稳定性。其RSD为0.53%，表明样品在配制后12 h内稳定性良好。

2.4重复性实验 取同一批样品(批号20020807)，按含量测定方法分别测定含量6次。6次实验的RSD为0.31%，表明本法重复性良好。

2.5含量测定 取60 ℃干燥到恒质量的本品约10 mg，精密称定，置于100 mL棕色量瓶中，加甲醇约70 mL，超声20 min使其溶解，加甲醇稀释至刻度，摇匀。精密量取5 mL，置于50 mL棕色量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制得供试品溶液；另取ZLR-8对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释成10 μg·mL-1的对照品溶液。以紫外分光光度法于271 nm波长处测定吸光度，按外标法计算ZLR-8的含量。每批样品重复测定3次，含量测定结果见表2。

3 讨论

ZLR-8原料药含量测定方法比较 ZLR-8是由呋咱氮氧化物3-羟甲基-4-苯基呋咱氮氧化物及其异构体作为NO供体，以酯键与双氯芬酸偶联后得到的新型非甾体抗炎化合物。ZLR-8属于全新化学结构药物，需要结合其化学结构和理化性质来设计合理的含量测定方法。目前，所报道的ZLR-8的含量测定方法包括非水毛细管电泳法[3]、高效液相色谱法[4]和凯氏定氮法[4]。针对ZLR-8分子结构中大的共轭体系，本文建立了紫外可见分光光度法简单快速地测定ZLR-8含量。我们从方法的专属性、重复性、适用范围等方面分析了4种ZLR-8含量测定方法的特点，见表1，这4种方法含量测定结果见表2。

表1 4种分析方法的比较

表2 4种含量测定结果比较

比较所建立的这4种分析方法，凯氏定氮法是经典的容量分析法，它具有准确性好、专属性差的特点，实验过程中样品用量大，消解样品所需时间长，实验步骤繁琐，引入误差的可能性较大，样品含量测定过程中重复性不高；非水毛细管电泳法是适于分析水中难溶的药物，流动相消耗量小，但由于有机溶剂黏度较大，运行时间较长，其检测灵敏度低，样品用量较大，仅适用于ZLR-8的含量测定[3]。HPLC法是目前药物分析领域中应用广泛、技术成熟的分析方法之一，同时文献[3]所建立的HPLC法专属性好、灵敏度高、精密度高，能检出2个有关物质，非常适合于ZLR-8有关物质检查，也可用于ZLR-8原料药的含量测定[4]。UV法所需仪器设备简单，操作方便快捷，样品取样量少，本文所建立的紫外分光光度法准确度高，精密度高，重复性好，含量测定结果与文献报道结果相一致，适用于快速测定ZLR-8原料药含量。

参考文献：

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