复方硒口服液的研制与质量控制

毛耀南，王和林，魏润新，钱南萍(江苏省泰州市人民医院，泰州 225300)

硒是谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)和碘甲状腺脱碘酶(ID)的重要成分，参与体内多种酶的催化反应。硒通过调节GSH-Px的活性，阻断体内脂质过氧化过程，达到对膜的保护，从而使细胞膜及细胞器膜的结构和功能不受氧化物和过氧自由基的损害，防治多种生化紊乱所致的病变，维持生物体的正常生理功能[1-2]。人体内缺硒， 谷胱甘肽 ( GS Hpx)活性下降， 清除过氧化物和自由基的能力降低， 因而脂质过氧化物和自由基增多。由于血小板和血管内皮细胞易受自由基的攻击， 而造成血管损伤， 促进脑血管病的发生。

1973年WHO专家委员会宣布，硒是人体生理必需的微量元素之一，在生理代谢中发挥着重要的作用[3-4]。有明确的实验数据显示，缺硒会导致心脑血管病、糖尿病、帕金森病、肝病、癌症等10余种疾病的高发 。由于硒具备预防、治疗多种疾病的功效，近年来，含硒药物已经成为国内外学者研究、开发的热点。目前市场上有许多含硒药品、富硒保健品、富硒食品、富硒农副产品等，一系列含硒的产品由于技术水平差异，也没有统一的质量标准，一般是因企业宣传力度及销售策略的不同而吸引大众购买，因而消费者对这些富硒产品的了解、使用程度也不同，对患者来说，在选择上比较盲目。鉴于硒元素对癌症、心脑血管病等慢性病防治方面的作用，我们结合临床的需求，从医院制剂的角度研制了复方硒口服液，已经试用于临床，现报道如下。

1 仪器与试药

1.1仪器 AF-640原子荧光光谱仪，硒空心阴极灯，电子天平，PHS-3C型精密pH计，电热板，玻璃仪器等。

1.2试药 硒酸酯多糖(含硒量为2%，天赐福生物工程公司)；硝酸、高氯酸、盐酸(均为优级纯)；氢氧化钠、硼氢化钠、铁氰化钾(均为分析纯)；硒对照品(光谱纯)；复方硒口服液(本院制剂室自制)。

2 方法与结果

2.1复方硒口服液的制备方法

2.1.1处方组成 硒酸酯多糖0.02 g，维生素B10.1 g，维生素B60.03 g，泛酸钙0.01 g，乙醇 50 mL，苯甲酸钠3 g，纯化水加至1 000 mL。

2.1.2制备方法 精密称取维生素B1、维生素B6、泛酸钙与硒酸酯多糖，加入适量的纯化水溶解后，再将事先溶解好的苯甲酸钠水溶液加入，最后添加纯化水至全量，混匀，即得。

2.2鉴别

2.2.1性状 本口服液为无色澄清液体，溶液无沉淀、浑浊、霉败、异臭、变色。

2.2.2维生素B1取样品2 mL，加氢氧化钠试液3 mL，加铁氰化钾试液0.5 mL与正丁醇5 mL，强力振摇2 min，放置分层，上层为醇层，显强烈蓝色荧光。加酸使其成酸性，荧光即消失，再加碱使其成碱性，荧光复现。

2.2.3维生素B6取样品2 mL，加磷钼酸饱和液2～3 滴，加氨试液使成碱性，加氯亚氨基2，6-二氯醌乙醇溶液(1∶200)1～2滴，溶液即显绿色。

2.2.4钙盐 取样品2 mL，加草酸铵试液2～3滴，即发生白色沉淀；分离，沉淀不溶于醋酸，溶于盐酸。

2.2.5pH值 应为4.0～5.0。

2.2.6其他 均符合《中国药典》2010年版口服溶液剂项下的规定[5]。

2.3含量测定

2.3.1试剂的配制 硝酸与高氯酸混合液(1∶1)：取硝酸(1.42 g·mL-1)与高氯酸(1.68 g·mL-1)各适量，等体积混合即得。

盐酸溶液(1.19 g·mL-1)。

盐酸溶液(5∶95)：取25 mL盐酸，用纯水稀释至500 mL。

盐酸(1∶1)：取25 mL盐酸，用纯水稀释至50 mL。

氢氧化钠溶液(2 g·L-1)：称取1 g氢氧化钠，溶于纯水中，稀释至500 mL。

硼氢化钠溶液(NaBH4)(20 g·L-1)：称取硼氢化钠10.0 g，溶于配好的氢氧化钠溶液500 mL，混匀。

铁氰化钾溶液(100 g·L-1)：称取10.0 g铁氰化钾，溶于100 mL蒸馏水中，混匀。

硒标准储备溶液(100.0 μg·mL-1)：精密称取100.0 mg硒(光谱纯)，溶于少量硝酸中，加2 mL高氯酸(优级纯)，置于沸水浴中加热3～4 h，冷却后再加8.4 mL盐酸，再置于沸水浴中煮2 min，用纯水定容至1 000 mL。

硒标准中间溶液(1.0 μg·mL-1)：取5.0 mL硒标准储备液，置于500 mL量瓶中，用纯水定容至刻度。

硒标准使用液(0.10 μg·mL-1)：取10.0 mL硒标准中间溶液，置于100 mL量瓶中，用纯水定容至刻度。

2.3.2测定条件 PMT电压：270 V；HCL主阴极电流：40 mA；载气流量：800 mL·min-1；原子化器温度：200 ℃；采样泵速：100 r·min-1；注入泵速：100 r·min-1。读数时间：20 s；延时时间：2 s；进样体积：0.5 mL；读数方式：峰面积。测定谱图见图1。

图1 硒的标准谱图

2.3.3样品的处理 取25 mL样品加入2.5 mL硝酸-高氯酸混合液，在电热板上加热消解。当溶液冒有白烟时，取下冷却，再加入2.5 mL盐酸溶液(1∶1)，继续加热至溶液冒有白烟时，已完全将六价硒还原成四价硒[6]。取下冷却，用纯水转移至比色管中，用纯水定容至10 mL。同时做空白实验。

2.3.4标准曲线绘制 吸取硒标准使用液0，1.00，2.00，4.00，8.00和12.00 mL，分别置于量瓶中，分别加入5 mL盐酸(1.19 g·mL-1)、5 mL铁氰化钾(100 g·L-1)，用纯水定容至50 mL，混匀，使硒的质量浓度分别为0，10.0，20.0，40.0，60.0，80.0，100.0和120.0 μg·L-1。用AF-640原子荧光光谱仪测定，绘制标准曲线，计算回归方程：Y=69 925X+151.25，相关系数r=0.999 7。结果表明，硒的质量浓度在10.0～120.0 μg·L-1范围内，与峰面积线性关系良好。

2.3.5精密度实验 精密称取处理后的样品2.00 mL，按上述方法，重复进行5次，测定硒的含量，结果RSD为1.25%(n=5)，符合定量分析的要求。

2.3.6重复性实验 取同一样品5份，照样品含量测定方法测定含量，平均测定5次，结果平均含量为0.374 mg·L-1，RSD为2.0%(n=5)。

2.3.7回收率实验 取空白样品5份，加入10.0～120.0 μg·L-1的硒标准溶液，照样品含量测定方法测定，平均回收率为100.5%，RSD为1.42%(n=5)，结果见表1。

表1 回收率实验结果

2.3.8样品含量测定 取处理后的样品2.00 mL，置于量瓶中，加入5 mL盐酸(1.19 g·mL-1)、5 mL铁氰化钾(100 g·L-1)，用纯水定容至50 mL，混匀。用AF-640原子荧光光谱仪测定样品的荧光强度，根据标准曲线由回归方程计算样品消化液中硒元素的质量浓度(n=5)，含量以百分标示量表示。测定3批样品，平均含量为94.17%，RSD均<2.0%。

3 讨论

硒(Se)在人体内具有重要的生理作用，微量元素硒参与甲状腺激素生物合成过程[7]，人体内缺硒，谷胱甘肽 ( GS Hpx)活性下降，清除过氧化物和自由基的能力降低，因而脂质过氧化物和自由基增多。由于血小板和血管内皮细胞易受自由基的攻击，造成血管的损伤，促进脑血管病的发生，临床资料表明，脑血栓患者头发硒含量下降。维生素B1是糖代谢所需辅酶的重要组成成分，维生素B6为多种酶的辅基，参与氨基酸及脂肪的代谢，泛酸钙为辅酶A的组分，参与糖、脂肪、蛋白质的代谢。硒酸酯多糖、维生素B1、维生素B6均为水溶性，适宜制成液体制剂，复方硒口服液服用方便，口感好。

测定硒含量的方法很多，如荧光法、 原子吸收光谱法、 原子荧光法、 等离子体发射光谱法、分光光度法、气相色谱法、高效液相色谱法等，原子荧光光谱法为我国制定的测定硒的标准方法。原子荧光光谱法测定硒含量的原理[8]：在盐酸介质中，以硼氢化钠(NaBH4)作为还原剂，将硒还原成硒化氢(SeH4)，由载气(氩气)带入原子化器中进行原子化，在硒特制空心阴极灯照射下，基态硒原子被激发至高能态，在去活化回到基态时，发射出特征波长的荧光，在一定质量浓度范围内，其荧光强度与硒含量成正比。该检测方法测得的结果准确，方法特异性强，抗离子的干扰性强，取样少，操作简便，精密度高。

硒在水中主要是以无机的六价硒、四价硒、负二价硒及某些有机硒的形式存在，也可能有微量的硒附着在固体颗粒物上并悬浮在水中，因此，在反应前应先对样品进行处理[9]。在实验过程中，样品的处理多采用混合酸的湿消解法，以使低于或高于四价无机硒转化为四价硒，实验中用硝酸-高氯酸混合液进行消解，盐酸为介质，且盐酸浓度越高，干扰越小，以完全将六价硒还原成四价硒[10]。

样品在消解过程中，硒荧光强度会随四价硒的不断形成而逐渐增强，到达终点时为最大值。终点之后，若继续加热，硒会随着溶液温度的升高而开始挥发。因此，要准确地判别消解终点，减少实验误差。我们所建立的原子荧光光谱法测定口服液中硒含量的方法灵敏、精确、简便、快速， 值得推广应用。

参考文献：

[1] 王以明，汪模辉，张勇，等.硒和硒化物的药理及药效学研究[J]．药学进展，2003，27(2): 96-99.

[2] 肖颖歆，刘秀芳，徐汉生．有机硒药物的研究进展及开发应用前景[J]．中国现代应用药学，1997，14(5): 1-5.

[3] 王广珠，牛作霞.微量元素硒的毒性研究进展[J].西北药学杂志，2010，25(3): 237-238.

[4] 徐天娇，袁秉祥，刘勇．胰岛素与硒联合应用治疗糖尿病大鼠的可行性分析[J]．西北药学杂志，2012，27(3): 231-233.

[5] 国家药典委员会.中国药典2010年版[S].二部.北京：中国医药科技出版社，2010: 附录15.

[6] 中国国家标准化管理委员会. GB/ T5009.93-2003，食品中硒的测定[S].北京:中国标准出版社，2003.

[7] 郑亿，王玉华，杨姣．硒联合比索洛尔治疗自身免疫性甲状腺疾病合并阵发性房颤的临床观察[J].中国药房，2013，24(24): 2250-2252.

[8] 中华人民共和国卫生部卫生法制与监督司.生活饮用水卫生规范[S].2006.

[9] 朱杰民，冯梅.荧光法测硒前处理的几点问题[J].广东卫生防疫，1996，22(3): 9-10.

[10]邹晓春，李红华，林春晓，等.氢化物发生-原子吸收光谱法测定水中硒的研究[J].中国卫生检验杂志，1999，9(1): 21-23.