HMGB1改善耐吉西他滨胰腺癌PANC1细胞化疗敏感性的作用及其机制研究

陆德文 李先鹏 张波 姜玉华 许丰 郭世伟

胰腺癌化疗敏感性低，容易产生耐药性，因此探索其耐药机制并寻求新的化疗药物对胰腺癌的治疗具有重要的临床意义[1-2]。高迁移率族蛋白1(high mobility group box 1, HMGB1)是细胞内高丰度的染色体结合蛋白，在应激状态下的细胞DNA损伤修复中具有重要作用。研究发现某些肿瘤通过高表达HMGB1及其晚期糖基化终末产物受体(receptor for advanced glycation end products, RAGE)适应不利的微环境，包括能量和供氧压力、机体免疫系统的攻击等[3-4]。本研究通过抑制胰腺癌耐吉西他滨细胞株HMGB1的表达，观察其对吉西他滨敏感性的影响，并探讨其可能机制。

材料与方法

一、耐吉西他滨胰腺癌PANC1细胞株的建立

人胰腺癌PANC1细胞株为鄞州人民医院实验室冻存，常规复苏、培养、传代。通过浓度梯度递增诱导培养的方法建立耐吉西他滨胰腺癌PANC1细胞株(PANC1-GR)，即取对数生长期细胞接种于培养瓶中，以5 μmol/L吉西他滨诱导培养3 d，去除死亡细胞后更换培养液继续培养3 d，传代后梯度增加吉西他滨浓度(10、20、30、50、75、100、150 μmol/L)继续诱导培养。确定细胞能够存活并稳定传代的最高吉西他滨浓度，以获得PANC1-GR细胞株。

二、靶向HMGB1的siRNA转染PANC1细胞

分别取对数生长期PANC1和PANC1-GR细胞，以5×104/孔的密度接种于24孔培养板，采用脂质体法将靶向HMGB1的siRNA转染细胞，按试剂盒说明书操作。转染后的细胞分别为siRNA-HMGB1-PANC1细胞及siRNA-HMGB1-PANC1-GR细胞。

三、吉西他滨对PANC1细胞的半数抑制浓度(IC50)和耐药指数(resistance index, RI)检测

取对数生长期的PANC1、PANC1-GR、siRNA-HMGB1-PANC1、siRNA-HMGB1-PANC1-GR细胞，以5×103/孔的密度接种于96孔培养板，以含0.5、1.0、2.0、5.0、10.0 μmol/L吉西他滨的培养液处理PANC1细胞，以含50、100、150、200、300 μmol/L吉西他滨的培养液处理PANC1-GR细胞。……