慢性HIV感染者外周血T细胞CD28、CD160表达水平的研究*

肖江峰,陈永宏,黄 倩,邹燕琼,邓建宁

(1.重庆三峡中心医院御安分院感染科,重庆，404000；2.重庆三峡医药高等专科学校附属医院康复科，重庆，404000；3.广西省南宁市第四人民医院艾滋病外科，广西南宁 530023)

人类免疫缺陷病毒(HIV)，即艾滋病(获得性免疫缺陷综合征)病毒，是造成人类免疫系统缺陷的一种病毒[1-2]。自1981年发现以来，关于HIV的研究不断增加，已知免疫缺陷是HIV入侵人体后造成的最大的威胁，HIV感染患者存在不同程度的免疫紊乱。研究发现HIV感染的T细胞上抑制性共刺激分子表达有所升高，而T细胞功能存在不同程度的降低[3-4]，这可能与HIV引起的免疫缺陷有关[5]。CD160是常见的抑制性共刺激分子，主要表达于T细胞、天然杀伤性T细胞和天然杀伤细胞。CD160是HVEM的配体，并考虑与抗PD-1抗体一起提供具有抗HIV的免疫检查点抑制剂。CD160也被认为是人类HIV病毒作用的重要调控靶点。与CD160不同，T细胞上CD28的表达主要在体内发挥免疫作用[6]。CD28分子不仅可以促进T淋巴细胞增殖，还可诱导多种免疫应答相关细胞因子分泌。研究发现，CD28及CD160作为共刺激分子中的重要成员，在互相制约及调节T细胞功能中具有重要的作用[6]。因此，笔者对100例受试者进行研究，现报道如下。

1 资料与方法

1.1一般资料 选取2014年12月至2016年12月收治的50例HIV患者，作为观察组，并征集50例本院体检的健康志愿者，作为对照组。以上观察组患者均确诊为慢性HIV感染者，并且各组性别、年龄等差异无统计学意义(P>0.05)，具有可比性，见表1。本研究经伦理委员会批准，患者以及家属知情并同意本研究。

1.2纳入以及排除标准

1.2.1纳入标准 患者年龄在20～60岁之间；均未经抗病毒治疗，均无机会性感染或肿瘤，排除丙肝、乙肝等嗜肝病毒感染，无失代偿期肝病，无自身免疫性、遗传代谢性肝病；符合第八版内科学中HIV感染的诊断标准[7]。

1.2.2排除标准 本身有严重呼吸或者循环系统疾病(如先天性心力衰竭及肺功能障碍)；药品滥用或依赖者；对本研究所用药物过敏者；各种原因引起的急性呼吸道感染者。

1.3方法 所有患者入院后抽取抗凝全血10 mL，离心分离血浆放置于-80 ℃低温冰箱待测。采用FACS流式细胞仪(购自美国BD公司)，进行外周血白细胞计数和T淋巴细胞亚群分类，包括CD4+、CD8+及CD28等，并计算百分比。采用RT-PCR荧光探针法进行外周血HIV病毒载量测定(试剂盒购自上海岚派生物技术有限公司)。取新鲜外周血，分离单个核细胞，分别加入CD160-APC抗体，室温避光孵育20 min，加1 mL的PBS(转速1 500 r/min、离心半径12.5 cm)离心5 min，弃上清，然后加入10 g/L多聚甲醛固定后上流式细胞仪检测，Flowjo软件分析检测结果。观察并记录所有研究参与者一般资料(包括性别、年龄、外周血CD4+T计数、CD4+/CD8+等)、CD4+、CD8+T细胞上CD160及CD28的表达及初始T细胞(TN)、中央记忆T细胞(TCM)、效应记忆T细胞(TEM)、终末效应记忆T细胞(TEMRA)亚群上CD160表达的百分比及平均荧光强度(MFI)、2种细胞里病毒载量，并分析CD28及CD160的表达水平与患者CD4+和CD8+T细胞计数和病毒载量的相关性。

2 结 果

2.1两组患者基本资料比较 两组患者性别、年龄等一般资料无明显差异(P>0.05)，观察组患者外周血CD4+、CD4+/CD8+明显低于对照组(P<0.05)，具有统计学意义。详见表1。

2.2CD160的表达情况比较 随着CD4+T细胞上CD160的表达增加，CD4+T细胞呈下降趋势，两者呈负相关(r=-0.561，P<0.05)；随着CD8+T细胞上CD160的表达增加，CD8+T细胞数量呈上升趋势，两者呈正相关(r=0.619，P<0.05)；而HIV-RNA拷贝数量随着CD4+、CD8+T细胞上CD160表达的增加而增加，两者呈正相关(r=0.684，P<0.05、r=0.459，P<0.05)，差异有统计学意义。见图1。

表1 两组患者基本资料比较

图1 两组患者CD4+和CD8+T细胞上CD160的表达与CD4+和CD8+T细胞计数以及外周血HIV RNA载量的相关性比较

2.3CD28的表达情况比较 随着CD4+/CD8+T细胞上CD28的表达增加，CD4+/CD8+T细胞计数呈上升趋势，两者呈正相关(r=0.621，P<0.05、r=0.527，P<0.05)，而HIV-RNA拷贝数量随着CD4+、CD8+T细胞上CD28表达的增加而降低，两者呈负相关(r=-0.634，P<0.05、r=-0.582，P<0.05)，具有统计学意义。详见图2。

图2 两组患者CD28的表达与CD4+和CD8+T细胞计数以及HIV RNA载量的相关性比较

2.4两组患者各亚群CD8+T细胞CD160表达情况 两组患者CD8+T细胞CD160在TEMRA亚群表达阳性率及MFI差异无统计学意义(P>0.05)，观察组患者CD8+T细胞CD160在TN、TCM、TEM亚群表达阳性率及MFI均明显高于对照组(P<0.05)，差异有统计学意义。详见表2。

表2 各组患者各亚群CD8+T细胞CD160表达比较

3 讨 论

艾滋病是一种危害性极大的传染病，由感染HIV引起。HIV是一种能攻击人体免疫系统的病毒[8]。它把人体免疫系统中最重要的CD4+T淋巴细胞作为主要攻击目标，大量破坏该细胞，使人体丧失免疫功能。随着病程进展艾滋病患者可合并各种机会性感染及恶性肿瘤，病死率较高。艾滋病危害较大，不仅严重影响患者生活质量，而且具有较高的传染性。艾滋病目前尚未有理想的根治方案，并且HIV导致机体免疫缺陷的途径尚未研究清楚。为此，探究HIV引起免疫缺陷的作用方式显得尤为重要。研究发现，HIV感染者细胞免疫及体液免疫均受到明显影响，但以T细胞免疫受损为主[9]。CD4+、CD8+是T细胞中最主要的免疫细胞，正常情况下，CD4+细胞在整个T淋巴细胞中占65%，CD8+占35%，其比值为1.75～2.10之间。慢性HIV感染者由于免疫系统受到损伤，表现为CD4+数量减少，CD8+数量相对增多，出现比例失调。表明免疫力已经损伤到非常严重程度。研究发现，HIV感染者正负性共刺激分子表达受到影响，可能与CD4+、CD8+功能紊乱有关[10]。CD28及CD160分别作为共刺激分子中的正性和负性共刺激分子，在调节T细胞功能中具有重要的作用。HIV感染患者病毒难以清除的重要原因就是正负性共刺激分子的表达紊乱，而CD160的增殖可以抑制HIV患者CD4+T细胞的增殖以及细胞因子的分泌。郑海清等[11]和DUVERGER等[12]在对HIV患者T细胞进行基因检测后发现CD28在基因水平上就存在表达降低的现象。

本研究中，两组患者性别、年龄等一般资料差异无统计学意义(P>0.05)，观察组患者外周血CD4+/CD8+明显低于对照组(P<0.05)，差异有统计学意义。随着CD4+T细胞上CD160的表达增加，CD4+T细胞呈下降趋势，两者呈负相关(r=-0.561，P<0.05)，而HIV-RNA拷贝数量随着CD4+T细胞上CD160表达的增加而增加，两者呈正相关(r=0.684，P<0.05)；随着CD8+T细胞上CD160的表达增加，CD8+T细胞数量呈上升趋势，两者呈正相关(r=0.619，P<0.05)，HIV-RNA拷贝数量随着CD8+T细胞上CD160数量的增加而增加，两者呈正相关(r=0.459，P<0.05)。此结果表明，HIV对CD4+、CD8+T细胞上CD160表达的影响不同，随着HIV-RNA拷贝数量增加，CD160表达增加，而此时CD4+T细胞计数有所下降，导致CD4+/CD8+T比值失调。考虑抑制性共刺激分子CD160过度表达引起CD4+T细胞的功能紊乱。肖晗等[13]也在研究中发现，CD160的过度表达对HIV感染者免疫功能有一定的抑制作用。随着CD4+T细胞上CD28的表达增加，CD4+T细胞计数呈上升趋势，两者呈正相关(r=0.621，P<0.05)，而HIV RNA拷贝数量随着CD4+T细胞上CD28表达的增加而降低，两者呈负相关(r=-0.634，P<0.05)；随着CD8+T细胞上CD28的表达增加，CD8+T细胞数量呈上升趋势，两者呈正相关(r=0.527，P<0.05)，HIV-RNA拷贝数量随着CD8+T细胞上CD28数量的增加而增加,两者呈正相关(r=-0.582，P<0.05)。此结果表明，与CD160不同，CD28在HIV感染患者体内可以发挥一定的免疫作用，其与HIV-RNA拷贝数呈负相关，而与CD4+、CD8+T细胞计数呈正相关。王利伟等[14]也在研究中发现，CD28与HIV患者免疫功能有关，随着HIV的进一步感染，CD28逐渐受到破坏。两组患者CD8+T细胞CD160在TEMRA亚群表达阳性率及MFI差异无统计学意义(P>0.05)，观察组患者CD8+T细胞CD160在TN、TCM、TEM亚群表达阳性率及MFI均明显高于对照组，差异有统计学意义(P<0.05)。此结果表明，CD160升高对记性性T细胞和初始T细胞可能都有影响，但其主要通过影响记忆性T细胞表达发挥作用。王陆军等[15]也在研究中得出相似的结论。

4 结 论

慢性HIV感染患者中CD28表达有所减少，而CD160表达有所增加，可能与HIV患者CD4+、CD8+T细胞减少有关，其中CD160主要影响记忆性CD8+T细胞。