流式细胞术检测精子凋亡与男性不育症关系研究

孙红勇，林法喜*

（南京医科大学第一附属医院，江苏 南京 210029）

1 资料与方法

1.1 一般资料

回顾性选取2018年1月～2020年1月江苏省人民医院男性不育症患者50例，年龄27～49岁，平均（33.5±5.4）岁。在精子症类型方面，弱精子症14例（28.0%），少精子症36例（72.0%）。将这些患者作为不育症组，另回顾性选取同期我院正常生育男性50例作为正常生育组，年龄26～48岁，平均（32.3±5.2）岁。两组男性的一般资料比较差异均不显著，差异无统计学意义（P＞0.05）。

1.2 纳入与排除标准

纳入标准：（1）性生活均正常；（2）夫妇婚后均同居1年以上。排除标准：（1）女方不孕因素；（2）避孕。

1.3 方法

1.3.1 主要试剂与设备

购买北京航天瑞麒科技发展有限公司生产的敬业分析仪，美国BD公司生产的FITC-Annexin V/PI荧光染色试剂（货号：556547）。

1.3.2 精子凋亡检测

在离心管中放置标本，将PBS液加入其中，洗涤2次，进行10 min离心，将速率设定为3000 r/min，将上清液去除，在-80℃冰箱中冻存精子备用。在冰水中放置精子标本复温，用冷PBS液对精子悬液进行稀释，在试管中加入约5×106个精子，将PBS液加入，洗涤，进行10 min的离心，将速率设定为3000 r/min，将上清液弃去。用1ml Annexin V Binding Buffer重悬浮，在试管中加入100 μL。将5 μL FITCAnnexin、10 μL PI加入染色，室温下进行15 min避光静置后将400 μL孵育缓冲液加入，终浓度约为1×106精子/mL。1 h内采用流式细胞仪，应用精子动（静）态图像分析系统分析精子密度、活力，将凋亡率（PAS）计算出来，计算方法为凋亡精子数与精子总数的百分率。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0，计量资料用（±s）表示，用t检验；应用双变量直线相关分析，将Pearson相关系数计算出来。检验水准α=0.05。

2 结 果

2.1 两组男性的精液密度、A级、A+B级精子、凋亡率比较

不育症组……