PCR-Sanger测序法在幽门螺杆菌感染个体化治疗中的应用研究

周晴接 孟飞 朱丽明 蒋晓芬 朱方超 潘杰

幽门螺杆菌（Helicobacter pylori,Hp）是消化性溃疡、慢性胃炎、胃癌及胃黏膜相关淋巴组织样淋巴瘤的主要致病因子，根除Hp对治疗和预防上述疾病具有重要意义[1]。然而，随着抗生素的广泛使用，Hp对常用抗生素的耐药率越来越高，传统Hp根除治疗方案的根除率越来越低。目前Hp根除治疗失败的原因包括抗生素的选择、患者依从性、地区因素、宿主因素、质子泵抑制剂（PPI）代谢等，其中细菌耐药是最主要的原因。因此，如何正确选择抗生素并制定个体化治疗方案是根治Hp的关键。研究发现Hp的耐药性与其相应的基因耐药位点相关，如23S rRNA基因（克拉霉素耐药位点）、gyrA基因（喹诺酮耐药位点）等，通过对Hp进行耐药基因测序，即可得到该耐药位点的信息，从而推断出耐药情况[2-3]。本研究通过双脱氧链终止法（PCR-Sanger）测序检测Hp并获得耐药基因23S rRNA与gyrA的突变情况，推断出Hp对克拉霉素与左氧氟沙星的耐药情况，从而选择敏感抗生素进行个体化治疗，以期提高Hp的根除率。

1 对象和方法

1.1 对象 选取2018年1至6月因各种消化道症状于温州市中心医院就诊且13C尿素呼气试验阳性提示存在Hp感染的患者200例，依据“第五次全国幽门螺杆菌感染处理共识报告”推荐[4]，所有患者均符合Hp根除治疗指征。纳入标准：（1）年龄18～70岁，男女不限，均为初治患者；（2）因腹痛、腹胀、反酸、嗳气、恶心、呕吐、烧心、胸痛、呕血、黑便等各种不适症状就诊；（3）4周内未使用抗生素、铋剂、H2受体拮抗剂或PPI制剂；（4）同意行胃镜检查取胃黏膜活检组织标本进行Hp PCRSanger测序、细菌培养及药敏试验；……