长链非编码RNA CTC-459F4.3异常表达对肝癌上皮-间质转化的影响*

王 波 金 雯 杨 梅 王跃华

(1铜陵职业技术学院医学护理系；2铜陵市人民医院肿瘤科 安徽铜陵 244061)

上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition，EMT)是上皮细胞向间质细胞转化的生物学行为，在此过程中，恶性肿瘤细胞可突破基底膜、入侵血液及淋巴循环从而完成侵袭、转移的目的，而远处转移是影响肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)预后的关键因素之一。长链非编码RNA(long chain non-coding RNA，Lnc RNA)并不具备编码蛋白质的能力，一度被认为“毫无价值”。但越来越多的研究表明[1-3]，Lnc RNA在HCC的发生、发展中具有重要的作用，如参与细胞周期调节、调控上下游信号转导、影响肿瘤耐药、促进肿瘤微血管生成等。Lnc RNA家族庞大，CTC-459F4.3是新近发现的成员，相关报道较为鲜见。因此基于微环境针对CTC-459F4.3开展HCC早期事件的研究有助于丰富人类对Lnc RNA的进一步认知。该研究旨在观察CTC-459F4.3表达下调对HCC侵袭、迁移的影响，探讨CTC-459F4.3在HCC中对上皮-间质转化的作用，以期为HCC早期诊治的临床决策提供新思路。

1材料与方法

1.1材料来源

SMMC-7721细胞培养于ATCC细胞库。

1.2主要试剂与仪器

CTC-459F4.3 shRNA慢病毒质粒(上海吉凯)；DMEM(Gibco，C11995500CP)；RPMI 1640(Gibco，C11875500BT)；胎牛血清(Bio IND，04-002-1A)；Antibiotic-Antimycotic(Lifetechnologies，15240-112)；PBS，pH7.4(Gibco，10010-023)；Trypsin-EDTA(0.05%)(Lifetechnologies，25300-054)；牛血清白蛋白(Lifetechnologies，15561012)； 细胞培养皿：Coning，430167；细胞培养板：Costar，3524；75cm2细胞培养瓶：Corning，43063；Transwell小室 ：Corning，3422 (8μm孔径)；酶标仪：BioTek，EPOCH等。

1.3方法

1.3.1细胞培养与转染 10%胎牛血清的培养基培养于37℃CO2培养箱中，5%CO2，相对湿度90%。用0.125%胰蛋白酶37℃条件下作用3～5 min。培养基轻洗1次，去除死亡细胞的碎片及残余胰酶。加入DMEM / RPMI 1640完全培养基5mL，反复吹打，制成细胞悬液，接种于25mL培养瓶中，1:2分瓶培养。于对数期接种于6孔板中，一定滴度的慢病毒滴入每孔转染细胞，48h后收集细胞。分别设CTC-459F4.3敲低组、对照组、空质粒组，采用RT-PCR方法检测转染效率。……