联合检测Galectin-3、BRAF V600E、TPO和CD56在甲状腺良恶性结节中的应用价值

盘日海 陈文静 张江宇

甲状腺结节是甲状腺细胞局部异常生长导致的病变,该疾病较为常见,有甲状腺结节家族史以及放射暴露史患者更易患病,根据病情严重程度可将其分为良性结节和恶性结节。大约5%～7%的患者可经过触诊检出,大约20%～76%的患者经过超声检查检出［1］。目前超声引导下甲状腺细针穿刺细胞学检查是诊断此类疾病的有效手段,但受到取材、制片以及阅片人员能力等多方面的限制,导致诊断结果可能出现误差［2］。分子标志物检测能在一定程度上提高甲状腺良恶性结节的诊断准确度。Galectin-3 在低分化甲状腺癌的诊断中效果较好。甲状腺乳头状癌中BRAF V600E 基因突变较为常见,大约80%左右的基因突变为该基因突变且具有特异性。TPO 在甲状腺滤泡上皮细胞内大量存在,近10 年来,该分子标志物的表达水平检测能有效诊断甲状腺良恶性结节。神经细胞黏附分子(CD56)在神经外胚层肿瘤组织中大量存在,其表达水平与恶性肿瘤疾病病变以及预后有密切联系,目前被当作诊断甲状腺结节的新型免疫标志物［3］。本研究探究Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和CD56 联合检测的诊断效果,确定其诊断价值。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以简单随机抽样法选取2018 年1 月～2020 年12 月病理科488 例甲状腺术后患者的病理标本,其中186 例患者的病理标本为良性结节,设为良性组；262 例患者的病理标本为甲状腺乳头状癌,设为恶性组。良性组患者中男50 例,女136 例；年龄23～68 岁,平均年龄(50.12±9.05)岁；病程3～14 个月,平均病程(7.98±2.55)个月；其中甲状腺腺瘤32 例、亚急性甲状腺炎27 例、结节状甲状腺肿98 例、桥本甲状腺炎29 例。恶性组患者中男70 例,女192 例；年龄25～70 岁,平均年龄(50.30±8.44)岁；病程2～15 个月,平均病程(7.91±2.47)个月；肿瘤直径0.2～2.5 cm,平均肿瘤直径(1.48±0.54)cm。两组患者年龄、性别及病程等一般资料比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 方法 采用免疫组化法进行检测。用10%中福尔马林固定液固定两组标本,脱水处理、石蜡包埋、切片(厚度4 μm),以EnVision 两步法进行免疫组化染色。试剂选择自北京中杉金桥生物技术有限公司生产的Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和CD56 抗 体,严格按照说明书操作。

1.3 观察指标 ①对比两组Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 阳性表达率。光镜观察切片染色情况,无着色记为0 分、淡黄色着色记为1 分、棕黄色着色记为2 分、棕褐色着色为3 分；阳性细胞百分比<5%记为0 分,介于5%～25%之间记为1 分,介于25%～50%之间记为2 分,>50%记为3 分。两项分数乘积介于0～1 分则表示阴性(-),介于2～3 分则表示弱阳性(+),介于4～6 分表示中等阳性(++),>6 分则表示强阳性(+++)［4］。②对比Galectin-3、BRAF V600E、TPO和 CD56 4 种蛋白单一检测和联合检测效能。灵敏度=真阳性/(真阳性+假阴性)×100%；特异度=真阴性/(真阴性+假阳性)×100%。准确度=(真阳性+真阴性)/总例数×100%。

1.4 统计学方法 采用SPSS20.0 统计学软件处理数据。计量资料以均数±标准差()表示,采用t 检验；计数资料以率(%)表示,采用χ2检验。P<0.05 表示差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 阳性表达率对比 恶性组Galectin-3、BRAF V600E 阳性表达率明显高于良性组,TPO、CD56 阳性表达率明显低于良性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。见表1。

表1 两组Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 阳性表达率对比(n,%)

2.2 两组Galectin-3 和BRAF V600E 同时阳性、TPO和CD56 同时阳性对比 良性组、恶性组Galectin-3和BRAF V600E 同时阳性分别有2 例(1.08%)、198 例(75.57%),恶性组Galectin-3 和BRAF V600E 同时阳性率明显高于良性组,差异具有统计学意义(χ2=244.282,P=0.000<0.05)。

良性组、恶性组TPO 和CD56 同时阳性分别有170 例(91.40%)、17 例(6.49%),恶性组TPO 和CD56同时阳性率明显低于良性组,差异具有统计学意义(χ2=322.493,P=0.000<0.05)。

2.3 Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 单一诊断及联合诊断的诊断效能对比 Galectin-3 单一诊断灵敏度为93.51%(245/262)、特异度为91.40%(170/186)、准确度为92.63%(415/448)；BRAF V600E 单一诊断灵敏度为81.68%(214/262)、特异度为98.92%(184/186)、准确度为88.84%(398/448)；TPO 单一诊断灵敏度为14.89%(39/262)、特异度为0(0/186)、准确度为8.71%(39/448)；CD56 单一诊断灵敏度为7.63%(20/262)、特异度为1.08%(2/186)、准确度为4.91%(22/448)；Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 联合诊断灵敏度为95.80%(251/262)、特异度为99.46%(185/186)、准确度为97.32%(436/448)。Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和 CD56 联合诊断的灵敏度、特异度及准确度均高于各项指标单一诊断。

3 讨论

甲状腺结节可发生于各年龄阶段,男女发病率之比约为1∶3.83,大多数情况下,患者无明显症状且甲状腺功能正常,但随着病情进展,可能出现咽喉异物感、颈部疼痛等,若出现囊内自发性出血,则会加重疼痛感［5］。甲状腺乳头状癌分化较好,其与甲状腺乳头增生和正常甲状腺滤泡的容易混淆,难以区分,因为以上疾病在毛玻璃样核、乳头状结构改变方面相似。另外甲状腺结节在炎症的影响下会出现纤维化,误以为出现浸润,进而增加了确诊难度。

免疫组化是目前临床应用广泛的一种诊断技术,而甲状腺结节病理组织中有有效且可靠的免疫组化标记物能辅助诊断甲状腺良性结节和甲状腺乳头状癌［6］。Galectin-3 在正常细胞和癌性细胞中都存在,且主要存在于细胞质中,主要生物学功能包括调节细胞生长、分化、凋亡、炎症以及肿瘤转移、浸润,该物质在免疫细胞、甲状腺上皮细胞、成纤维母细胞以及巨细胞中均有表达［7］。BRAF V600E 是在甲状腺乳头状癌中高表达的一种抑癌基因,可激活P21 表达,且能有效修复损伤的基因,防止受损细胞进入下一周期［8］。BRAF V600E 基因表达位置改变时其抑癌作用会明显减弱,进而引起甲状腺癌变。本次研究中,恶性组Galectin-3、BRAF V600E 阳性表达率明显高于良性组,恶性组Galectin-3 和BRAF V600E 同时阳性率明显高于良性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。TPO 是一种免疫球蛋白,其主要作用是促进甲状腺激素合成。正常情况下在滤泡上皮细胞中表达,且为阳性表达,但在甲状腺乳头状癌中会出现异常表达,降低抗TPO 抗体亲和力,从而降低其表达［9］。CD56 在自然杀伤细胞、星形细胞、活化T 细胞、神经元以及施万细胞中正常表达。此蛋白在多种甲状腺疾病诊断中的研究较多,在甲状腺乳头状癌中主要表现为表达缺失,且多呈阴性表达,在甲状腺良性结节中持续性阳性表达。本研究显示,恶性组TPO、CD56 阳性表达率明显低于良性组,恶性组TPO和CD56同时阳性率明显低于良性组,差异具有统计学意义(P<0.05)。

本研究显示,Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和CD56 联合诊断的诊断效能高于单一诊断,灵敏度、特异度和准确度均超过95%。说明多项指标联合诊断效果更好。郭宏义等［10］研究中发现多项免疫组化标记物联合诊断能明显提高甲状腺乳头状癌诊断准确性,这一结果与本次研究相似。说明这一项研究内容具有可信度。

综上所述,Galectin-3、BRAF V600E、TPO 和CD56 是甲状腺良、恶性病变鉴别诊断的重要辅助指标,Galectin-3 和BRAF V600E 阳性表达、TPO 和CD56 阴性表达是诊断甲状腺乳头状癌的特异性标志物,形态学诊断联合检测4 种标志物有助于提高甲状腺乳头状癌的诊断准确性。