盐酸奥昔非君片高效液相测定方法优化

韩 君

(内蒙古自治区药品检验研究院，内蒙古自治区 呼和浩特 010000)

盐酸奥昔非君，又名安心酮，在甲醇中溶解，在乙醇中略溶，在水中微溶，在氯仿中极微溶，在乙醚中几乎不溶。为去甲麻黄碱衍生物，有选择性激动β受体及直接扩张冠状动脉血管作用，能降低冠脉阻力，增加冠脉流量，减少心室容积，降低心室壁张力，改善心肌氧平衡以及增强心肌收缩力。盐酸奥昔非君片用于冠心病、心绞痛、心肌梗死。

1 试剂试药

盐酸奥昔非君对照：盐酸奥昔非君原料(赤峰蒙欣药业提供)；

磷酸二氢钠：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

磷酸：分析纯，国药集团化学试剂有限公司；

甲醇：色谱纯，SIGMA-ALDRICH；

纯净水：自制。

2 色谱条件与系统适用性

2.1 仪器：戴安U3000高效液相色谱仪

Waters e2695高效液相色谱仪

天平：Sarturious CP124S

MSE6·6S

BT 125D

色谱柱：CAPCELL PAK MG C18 5μm 4.6×250mm

Waters XTERRAS MS C18 5μm 4.6×250mm

Agilent ZORBAX SB C18 5μm 4.6×250mm

流动相：甲醇-0.05mol/L磷酸二氢钠-三乙胺(55∶45∶0.3)(用磷酸调节pH值至3.0±0.05)

检测波长：252nm 流速：1.0mL/min

进 样 量：20μL 柱温：25℃

2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸奥昔非君对照品8mg，置于200mL量瓶中，加0.1mol/L的HCl溶液超声处理使溶解并稀释至刻度，摇匀，制成每1mL约含40μg盐酸奥西非君的溶液。

2.3 供试品溶液的制备

取供试品20片，精密称定，研细，精密称取适量(约相当于盐酸奥昔非君4mg)，置于100mL量瓶中，65℃超声处理20分钟，加0.1mol/L的HCl溶液稀释至刻度，摇匀，作为供试品溶液。

2.4 测定法

精密量取供试品溶液与对照品溶液各20μL，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法以峰面积计，即得。

3 色谱条件的选择

3.1 波长的选择

精密称取盐酸奥昔非君原料8mg，置于200mL量瓶中，加0.1mol/L HCl溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，在200nm～400nm的波长处进行扫描，在252nm的波长处有最大吸收，故选择252nm作为测定波长。

3.2 提取方法的选择

3.2.1提取溶剂的选择

分别精密称取盐酸奥昔非君原料8mg，置于200mL量瓶中，分别用甲醇和0.1mol/L HCl溶液溶解并稀释至刻度，摇匀，按拟定的含量测定方法的色谱条件进行测定，结果表明用0.1mol/L HCl溶液提取供试品稳定性较好，用甲醇提取，供试品发生分解。

3.2.2超声提取温度的选择

分别精密称取供试品，分别选用直接超声处理、60℃超声处理、65℃超声处理、70℃超声处理，分别照拟定含量测定方法处理20min，各精密量取20μL注入液相色谱仪，结果表明超声温度为65℃时提取效果较好，故选择65℃为超声的提取温度。

3.2.3超声提取时间的选择

分别精密称取供试品，分别超声处理10min、20min、30min和40min，照拟定含量测定方法处理，各精密量取20μL注入液相色谱仪，结果表明超声时间对盐酸奥昔非君片的提取几乎无影响，为了提取完全，故把超声提取时间定为20min。

3.2.4过滤方法的选择

分别精密称取供试品，照拟定含量测定方法处理，分别进行0.45μm、0.22μm滤膜过滤和直接离心吸取上清液，精密量取20μL注入液相色谱仪，结果表明过滤方法对盐酸奥昔非君片的提取几乎无影响，故选用0.45μm滤膜过滤。

4 方法学研究

4.1 阴性试验

依照厂家提供处方量(辅料及处方由赤峰蒙欣药业有限公司提供)，按供试品溶液制备方法制定阴性供试品溶液，测定，在被检测成分的出峰时间内对测定不存在干扰，结果见图1、图2。

图1 阴性实验图谱

图2 供试品溶液图谱

4.2 线性与范围

精密称取盐酸奥昔非君原料(由赤峰蒙欣药业有限公司提供)8.331mg，置于200mL的量瓶中，加0.1mol/L的HCl溶液溶解并稀释制成每1mL中约含40μg的溶液，摇匀，精密量取上述溶液2μL、5μL、10μL、12μL、14μL、18μL、20μL、25μL、30μL注入色谱仪，记录色谱图；以浓度为横坐标(μg/mL)，以相对应的峰面积为纵坐标(微伏×秒)，进行线性回归。盐酸奥昔非君线性回归方程为：Y=31692X-15462(r=1，n=7)，结果表明盐酸奥昔非君在5～160μg/mL浓度范围内与其峰面积呈良好的线性关系。

4.3 检出限与定量限

将对照品溶液稀释至0.8μg/mL时，测得的响应值约为噪音值的3倍，故本品的检出限为0.8μg/mL，根据检出限推算得到定量限为2.4μg/mL，检出限图谱见图3。

图3 检出限图谱

4.4 精密度试验

照含量测定项下处理对照品溶液1份，连续进样6次，测得盐酸奥昔非君峰面积精密度RSD为0.6%，说明仪器精密度良好。

4.5 稳定性试验

照含量测定项下处理供试品一份，分别于0h、6h、24h、36h、48h、72h进行测定，结果表明盐酸奥昔非君在72小时内性质稳定。

4.6 重复性试验

取同一批号的供试品，精密称取6份，按上述供试品溶液的制备方法和色谱条件进行测定，结果相对标准偏差RSD=0.9%，结果说明该方法重复性良好。

4.7 回收率试验

取0.5片量供试品9份，分别加入盐酸奥昔非君原料药1.6mg、2.0mg、2.4mg，置于100mL量瓶中，照含量测定项下处理，制备供试品溶液。精密量取上述溶液各20μL注入色谱仪，计算回收率，测得平均回收率为100.0%，RSD为0.6%。

4.8 耐用性试验

取含量测定项下供试品溶液进行测定，分别对不同柱温、不同流速、不同流动相比例、不同品牌色谱柱及不同液相色谱仪耐用性进行考察，测定结果见表1～5。

表1 耐用性试验(改变柱温)

表2 耐用性试验(改变流速)

表3 耐用性试验(改变色谱柱)

表4 耐用性试验(改变流动相比例)

表5 耐用性试验(改变液相色谱仪)

从耐用性试验结果可看出，不同柱温、不同流速、不同品牌色谱柱、不同流动相比例及不同液相色谱仪不影响盐酸奥昔非君的测定。

5 供试品测定

按拟定的含量测定法测定供试品，结果见表6。

表6 供试品测定结果