谷红注射液有效成分介导eNOS与LOX-1对冠状动脉内皮细胞损伤的影响

魏艳胜，张永春，黄陆力，王学惠，张俊彪，刘辉

动脉粥样硬化（AS）是多种动脉闭塞疾病的病理基础，主要表现为内皮细胞损伤、脂质聚集、结缔组织增生和动脉粥样硬化斑块形成，保护内皮细胞完整性是预防AS的关键[1,2]。研究发现，凝素样氧化低密度脂蛋白受体（LOX-1）能通过激活氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）引发内皮细胞炎症和诱导其凋亡，抑制LOX-1表达能降低内皮细胞损伤[3]。内皮型一氧化氮合酶（eNOS）有助于内皮细胞产生舒血管因子一氧化氮（NO），促进eNOS表达降低血管硬度，抑制AS进程[4]。谷红注射液2005年批准为临床心血管疾病治疗药物，与其活性成分羟基红花黄色素A（HSYA）的抗凝血、血管舒张、抗炎等作用密切相关[5,6]。目前关于HSYA在内皮细胞损伤中作用及机制尚不明确，本研究通过在体外模拟AS发生过程，分析HSYA是否通过影响eNOS、LOX-1表达，从而参与冠状动脉（冠脉）内皮细胞的损伤修复，以期为临床诊疗提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料HSYA溶液液配制：取0.9 mg HSYA（北京索来宝生物科技有限公司）溶解于生理盐水中，加入RPMI-1640稀释到浓度分别为1、10、100 μmol/L的溶液。实验试剂：ox-LDL购自Sigma-Aldirich公司，LOX-1、eNOS、β-action抗体试剂盒购自美国Santa Cruz公司，乳酸脱氢酶（LDH）、一氧化氮（NO）试剂盒购自南京建成生物工程研究所，青链霉素、胎牛血清（FCS）、RRMI-1640购自美国Gibco公司，CCK-8检测试剂盒购自上海碧云天生物科技有限公司。实验仪器：CO2培养箱（美国Thermo公司3111型），酶标仪（美国BioTek公司MPR-A100型）。

1.2 细胞培养在加入青链霉素的10% FCS RRMI-1640培养基中培养，培养条件：37℃，5%CO2，95%饱和湿度。待细胞长满培养皿80%加入20 μg/ml ox-LDL刺激为模型组，采用不同浓度（1、10、100 μmol/L）HSYA刺激24 h后继续培养，并分别作为低、中、高HSYA组，另选未处理的HCAECs细胞为对照组，正常培养24 h。……