自噬在肝癌SMMC-7721细胞DNA放射损伤修复中的影响*

张华颖，刘 鑫，宋秋露，韦可璇，林春香，赵 伟△

（广西医科大学附属武鸣医院 1.放疗科；2.消化内科,南宁 530000）

原发性肝癌（肝癌）是最常见的恶性肿瘤之一，其在我国的发病例数超过世界总例数的50%[1]。放射治疗是中、晚期肝癌患者有效的治疗方式之一[2-3]。然而，放射抗拒严重影响了肝癌放射治疗的效果。因此，提高肝癌放射治疗的敏感性，对提高肝癌的治疗效果有重要的临床意义。DNA 是放射治疗的靶点，放射治疗可导致DNA损伤并诱导肿瘤细胞凋亡[4]。自噬与肿瘤的发生发展和放射抗拒密切相关[5-6]。但自噬在肝癌细胞DNA 放射损伤反应中的作用及影响目前仍未阐明。因此，本研究以肝癌SMMC-7721 细胞作为研究对象，检测电离辐射（ionizing radiation，IR）后细胞DNA 损伤情况，观察激活和抑制自噬对SMMC-7721 细胞DNA 损伤修复的影响，为提高肝癌放射敏感性提供新的研究思路。

1 材料与方法

1.1 细胞和主要试剂 人肝癌SMMC-7721细胞购自中南大学湘雅医学院。彗星电泳法检测细胞损伤试剂盒（KGA240-50）购自凯基生物公司；自噬激活剂雷帕霉素（Rapamycin）购买于美国Sigma公司；自噬抑制剂3-甲基腺（3-MA）购买于上海爱必信生物公司；微管相关蛋白Ⅰ轻链3（LC3）B 抗体、丝氨酸139 磷酸化形式的组蛋白（γ-H2AX）抗体购自美国Abcam 公司；BCA 定量测蛋白浓度试剂盒、RIPA裂解液、GAPDH、山羊抗兔lgG（H+L）和驴抗兔lgG(H+L)均购自上海碧云天公司；β-actin 购自美国Santa Cruz 公司；DMEM（10566016）高糖培养基、FBS（A3161001）购自美国GIBCO公司；青霉素和链霉素混合液和PBS 缓冲液购自北京Solarbio 公司；ECL发光试剂盒（34577）购自美国Thermo Scientific公司。

1.2 细胞培养与处理 用含有10%胎牛血清（FBS）、1%青霉素和链霉素混合液的DMEM 高糖培养基培养肝癌SMMC-7721 细胞，置于37 ℃、5%CO2培养箱中，隔天换液。……