白藜芦醇抑制HIF-1α对肾癌细胞线粒体功能及抗乏氧增殖的调控*

杨清滔，谷 江△，赵治国，张永春

（1.贵州医科大学附属医院泌尿外科，贵阳 550004；2.贵州医科大学附属白云医院泌尿外科，贵阳 550014；3.武警贵州总队医院外二科，贵阳 550002）

恶性肿瘤细胞侵袭性、异型性的生理特性可导致细胞内相对乏氧环境产生[1]。缺氧可刺激癌细胞内缺氧诱导因子-1α（HIF-1α）表达升高，且上调HIF-1α 表达可促进癌细胞在缺氧环境下增殖[2-4]。研究表明，减弱HIF-1α 的功能可明显抑制肾癌细胞增殖[5]。白藜芦醇（resveratrol，Res）是广泛存在于葡萄、花生和多种传统中药中的一种多酚类化合物，对HIF-1α 有明显的抑制作用[6]，具有降血脂、抗炎、抗氧化及抑制肿瘤细胞增殖、转移和促进凋亡等生物学功能[7-9]。但Res对肾癌细胞抗乏氧增殖的作用及其机制目前尚未完全阐明。本研究用不同浓度Res 干预肾癌细胞，观察常氧和缺氧环境下肾癌细胞的增殖情况、线粒体功能相关指标变化以及HIF-1α 的表达，探讨Res 在肾癌细胞抗乏氧增殖过程中的机制。

1 材料与方法

1.1 细胞和主要试剂 人肾癌GRC-1 细胞株购于上海弗雷堡生物公司。二氯化钴购于成都科龙化工试剂厂；Res 购于Sigma 公司；总RAN 提取试剂盒、逆转录试剂盒、PCR MasterMix 均购于Fermentas 公司；酶联免疫吸附试验（ELISA）试剂盒购于R&D 公司；Fura-2/AM 钙离子探针购于碧云天生物技术研究所。

1.2 细胞分组及处理 将肾癌GRC-1 细胞分为正常组和缺氧组，缺氧组用150 μmol/L 二氯化钴干预GRC-1细胞48 h[10]，构建缺氧GRC-1细胞模型，正常组在正常氧环境下培养。两组培养基中各加入不同浓度（0 μmol/L、20 μmol/L、40 μmol/L 和60 μmol/L）Res进行干预。

1.3 RT-qPCR 法检测HIF-1α 基因表达 提取细胞总RNA，逆转录成cDNA，在PCR 仪器（Eppendorf Mastercycler gradient，22331 型，德国）上进行PCR扩增反应。……