miR-106a-5p通过调控TLR4表达对类风湿关节炎滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响*

王维学，樊小群，丰景斌，符仲秋，陈希跃

（海南省三亚市人民医院 1.创伤骨科；2.检验科，三亚 572000）

类风湿关节炎（rheumatoid arthritis，RA）是常见的自身免疫性慢性关节疾病，其滑膜组织异常增生和滑膜炎症是常见的病理现象，具有极高的致残率[1-2]。滑膜成纤维细胞是RA 的主效应细胞，其细胞增殖、凋亡和炎症浸润等与RA 发病机制较为密切，严重可导致关节畸形和功能障碍[3-4]。miRNA是一类长度约为18～22核苷酸的非编码RNA分子，在进化上具有高度保守的特性，越来越多的研究表明，miRNA 可以作为RA 的诊断标记物和治疗靶标[5-6]。有研究结果显示，miR-106a-5p在RA患者的多克隆Vγ9Vδ2T 细胞中低表达[7]，但是具体机制尚不清楚。Toll样受体4（TLR4）是免疫系统的病原微生物的主要受体，Li 等[8]研究结果显示，TLR4 在类风湿骨关节中高表达，miR-506通过下调TLR4抑制成纤维样滑膜细胞的增殖并促进其细胞凋亡。本研究通过体外培养滑膜成纤维细胞MH7A，探讨miR-106a-5p 对RA 滑膜成纤维细胞增殖和凋亡的影响，以及是否可能与TLR4 相关，旨在为RA 提供新的潜在治疗标志物。

1 材料与方法

1.1 细胞与主要试剂

RA滑膜成纤维细胞MH7A购买于广州吉尼欧生物公司；胎牛血清、DMEM 高糖培养基购买于Gibco 公司；miR-NC、miR-106a-5p、si-NC、si-TLR4、anti-miR-NC、anti-miR-106a-5p、pcDNA 和TLR4 购买于广州锐博生物公司；Lipofectamine 2000 试剂盒、TRIzol 试剂盒、反转录试剂盒购买于Introvigen公司；Fast SYBR Green Master Mix试剂盒和引物购买上海吉玛公司；TLR4抗体、PCNA抗体、Bax抗体和Bcl-2 抗体购买于Cell Signal Technology 公司；MTT试剂盒购买于上海碧云天生物；凋亡试剂盒购买于上海贝博生物公司；双荧光素酶报告基因试剂盒购买于Promega公司。

1.2 样本收集

本研究中22例RA滑膜组织取自海南省三亚市人民医院类风湿关节炎患者进行膝关节置换手术或切除膝关节滑膜组织，其中男13例，女9例，年龄45～85 岁，平均（62.1±9.8）岁；……