血清miR-873、miR-125b-2表达水平联合检测对早期异位妊娠诊断与治疗效果的评估价值

马汇，李利荣，李光

榆林市第一医院体检中心1、妇产科2，陕西 榆林 719000

异位妊娠(ectopic pregnancy，EP)是临床常见输卵管妊娠，具有极大的输卵管破裂甚至死亡的风险，为早期妊娠死亡重要原因[1]。近年来EP 发生率逐渐增加，且呈年轻化发展，给育龄期女性生育及生命健康造成了严重威胁[2]。EP症状不典型，且变化多端，因此仅依靠临床表现很难进行诊断，目前临床常用动态绒毛膜促性腺激素(human chorionic gonadotropin，HCG)测定和B超诊断，但有8%～31%的EP患者可在β-HCG测定过程中出现输卵管破裂或超声检测无法确定，而且B超在EP早期并不完全适用，因此探索新的敏感生物标志物对EP的早期诊断和治疗效果的评估十分必要[3]。游离微小核糖核酸(microRNA，miRNA)能特异性识别靶基因mRNA 3′端非翻译区而负性调节其翻译，由于miRNA 具有组织特异性和检测方便稳定的特点，且其在体液丰度相对较高,目前研究认为可将其作为潜在生物标志物[4]。大量研究表明，miRNA是急性心肌梗死、癌症、自身免疫性疾病等多种病理状态的生物标志物，参与其发生及预后[5]。近年研究显示，miRNA可早期诊断病理妊娠及妊娠并发症[6]。miR-873 是位于染色体9p21.1 上的microRNA，有许多靶向基因，这些基因具有独特的分子功能，如催化活性、转录调控、结合等，有研究表明其可作为诸多癌症和疾病的分子生物标志物[7]。miR-125b-2也是近年来发现的microRNA，有研究表明其与肿瘤、血液病和心脑血管疾病有关[8-10]。近期有研究指出，miR-125b-2 有望作为早期EP 的生物标志物[11]，然而目前尚无研究报道联合检测miR-873、miR-125b-2表达水平与早期EP患者诊断及治疗效果的关系。基于此，本研究将检测早期EP 患者血清miR-873、miR-125b-2 表达水平，并分析其与早期EP发生及预后的关系，现将结果报道如下：

1 资料与方法

1.1 一般资料 选取2019 年1 月至2021 年1 月榆林市第一医院收治的110 例EP 患者作为研究对象(观察组)。纳入标准：(1)符合英国国家健康与临床卓越研究所《子宫内膜异位症的诊断和管理》[12]中EP诊断标准；(2)患者及家属均知情同意；(3)年龄20～40岁；(4)依从性良好者；(5)近期未接受相关治疗者；(6)生命体征平稳，愿意接受保守治疗者。排除标准：(1)不耐受激素治疗者；(2)心血管疾病史者；(3)重要器官功能障碍者；(4)不能接受随访者；(5)临床资料不全者。观察组患者年龄20～40岁，平均(29.13±3.26)岁；孕次1～3次，平均(1.78±0.36)次；孕龄4～12 周，平均(6.07±0.80)次；病程1～10 年，平均(3.43±0.93)年。另选取100 例同时期来我院体检的正常妊娠孕妇作为对照组，年龄20～40岁，平均(28.97±3.12)岁；孕次1～3 次，平均(1.81±0.42)次；孕龄4～11周，平均(6.12±0.76)次。两组孕妇的一般资料比较差异均无统计学意义(P＞0.05)，具有可比性。本研究经我院医学伦理委员会批准。

1.2 治疗方法 EP 患者采用甲氨蝶呤联合米非司酮治疗，肌肉注射甲氨蝶呤(澳大利亚Pfizer；注册证号：H20090207)，50 mg/(m2·次)，1次/d，连续7 d；分别于餐前2 h、晚餐后2 h单次口服米非司酮(湖北葛店人福药业有限责任公司；国药准字：H20033551)，50 mg/次，2次/d，连续7 d；治疗期间减少活动，卧床休息，保持大便通畅。

1.3 血清指标检测 抽取观察组患者治疗前和对照组，以及治疗后有效组和无效组患者5 mL清晨空腹静脉血，3 000 r/min 离心10 min，取上清液，置于EP管，放入-80℃环境中保存。实时荧光定量PCR 试剂盒、反转录试剂盒、血液总RNA 提取试剂盒均由赛默飞世尔科技有限公司提供。试剂盒法提取血清总RNA，微量核酸检测仪(Nanodrop 2000)测定总RNA浓度和纯度，RT-PCR 检测血清miR-873、miR-125b-2 相对表达量，反应体系：94℃1 min，94℃30 s，48～50℃30 s，72℃30 s，重复35次，72℃10 min，根据2-ΔΔCt法计算。miR-873 上游引物为GCAGGAACUUGUGAGUCUCCU，下游引物为AGGAGACUCACAAGUUCCUGC；miR-125b-2 上游引物为GCAAGATCTGTCTAAGTGAACCCAACTGTAATTT-C，下游引物为GCAAAGCTTAAAAACTCCTAGGCA-GAATCTATG-TATGTTC；U6 上 游 引 物 为GCTTCGGCAGCACATATACTAA，下游引物为AACGCTTCACGAATTTGCGT。

1.4 疗效判定标准 参照《妇产科疾病诊断标准》[13]制定疗效判定标准，有效：下腹痛、不规则出血等症状好转，B 超显示异位妊娠灶消失或缩小，血β-HCG降幅超过15%；无效：下腹痛、不规则出血等症状未见好转，异位妊娠灶无改变或扩大，血β-HCG 降幅＜15%或持续升高，或发生异位妊娠破裂、内出血等。

1.5 统计学方法 应用SPSS26.0 统计学软件分析数据。计数资料比较采用χ2检验；计量资料符合正态分布，以均数±标准差(±s)表示，组间比较采用t检验；相关性采用Pearson 相关性分析；采用受试者工作特征曲线(receiver operating characteristic curve，ROC)分析血清miR-873、miR-125b-2 对EP 疗效的评估价值。以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 两组孕妇的血清miR-873、miR-125b-2水平比较 观察组孕妇治疗前晨间空腹血清miR-873、miR-125b-2水平明显低于对照组，差异均具有统计学意义(P＜0.05)，见表1。

表1 两组孕妇的血清miR-873、miR-125b-2水平比较(±s)Table 1 Comparison of serum levels of miR-873 and miR-125b-2 between the two groups of pregnant women(±s)

表1 两组孕妇的血清miR-873、miR-125b-2水平比较(±s)Table 1 Comparison of serum levels of miR-873 and miR-125b-2 between the two groups of pregnant women(±s)

组别观察组对照组t值P值110 100 0.46±0.14 0.82±0.22 14.276 0.001 2.10±0.58 4.14±0.83 20.793 0.001例数miR-873相对表达量miR-125b-2相对表达量

2.2 有效组和无效组患者的血清miR-873、miR-125b-2 水平比较 观察组患者治疗后，有效90 例，无效20 例，有效组患者的空腹血清miR-873、miR-125b-2水平明显高于无效组，差异均有统计学意义(P＜0.05)，见表2。

表2 有效组和无效组患者的血清miR-873、miR-125b-2水平比较(±s)Table 2 Comparison of serum levels of miR-873 and miR-125b-2 between effective and ineffective groups in the observation group(±s)

表2 有效组和无效组患者的血清miR-873、miR-125b-2水平比较(±s)Table 2 Comparison of serum levels of miR-873 and miR-125b-2 between effective and ineffective groups in the observation group(±s)

组别有效组无效组t值P值例数90 20 miR-873相对表达量0.76±0.20 0.50±0.21 5.212 0.001 miR-125b-2相对表达量3.71±0.64 1.72±0.51 13.002 0.001

2.3 血清miR-873 与miR-125b-2 水平的相关性 经Pearson 相关性分析结果显示，血清miR-873与miR-125b-2水平呈正相关(r=0.573，P=0.000)，见图1。

图1 血清miR-873与miR-125b-2水平的相关性Figure 1 Correlation between serum miR-873 and miR-125b-2 levels

2.4 血清miR-873、miR-125b-2 对EP 疗效的评估价值 经ROC 分析结果显示，血清miR-873 联合miR-125b-2 评估EP 治疗效果的曲线下面积(AUC)、灵敏度、特异度均大于单一指标检测，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见表3和图2。

图2 血清miR-873、miR-125b-2评估EP疗效的ROCFigure 2 ROC of serum miR-873, miR-125b-2 to evaluate the efficacy of EP

表3 血清miR-873、miR-125b-2对EP疗效的评估价值Table 3 Value of serum miR-873 and miR-125b-2 in evaluating the efficacy of EP

3 讨论

EP 占所有妊娠的1%～2%，由人工流产、高龄妊娠、输卵管发育不良、输卵管炎症或手术、应用辅助生育技术等多种因素引起，病理机制为输卵管功能性阻塞，损害管状运动，引起纤毛功能障碍，导致受精卵于输卵管内着床[14]。目前临床主要根据临床表现和β-HCG检测、B超检查等诊断EP，但早期EP妊娠产物在子宫体腔外部位，并没有特异性的临床表现，仅10%的EP患者子宫周围附件区能触及包块，10%的患者没有包块、腹部疼痛、阴道流血等典型症状，因此依靠临床表现难以诊断[15]。β-HCG 检测和B 超检查虽然能辅助诊断，但血清β-HCG 会随着孕龄延长而增加，且不稳定，B 超检查也难以发现早期EP 子宫附件包块，因此两者均不能作为早期诊断有效方法。

既往有研究报道通过血清中游离细胞外核酸作为疾病标记物，但mRNA 不够稳定，DNA 虽然稳定但特异性极差，因此均不能作为基本标志物使用[16]。但近年来关于miRNA 的研究结果却为多种疾病诊断提供了指标，研究证实，miRNA 游离于血液中，极为稳定，其异常表达可以在多种病理状态中检测得到[17]。一项miRNAs 微阵列分析研究证实，人体中约有24 种miRNAs与妊娠相关，其表达水平变化可反映胎儿生长受限、自然流产、早产、妊娠期间先兆子痫等病理或生理状态[18]。近年多项研究表明EP 患者血清存在多种miRNA表达异常，如Dominguez等[19]研究发现，EP血清miR-223、miR-451、miR-1288表达较正常妊娠明显提升，血清miR-337-3p、miR-873、miR-30a、miR-196b表达较正常妊娠明显降低。Zhen等[20]研究发现，自然流产和EP 患者血清miR-525-3p、miR-519d、miR-517a 表达较正常宫内妊娠者明显降低。21 号染色体有500 多个注释基因，其中170 个是蛋白质编码，5 个代表microRNA 基因，包括miR-99a、let-7c、miR-125b-2、miR-155 和miR-802 23，与胚胎发育和胎盘生长有密切关系[21]。李艳丽等[11]研究发现，EP 患者血清miR-125b-2 Cq 值明显低于正常孕妇，提示miR-125b-2可作为评估EP的有效指标。本研究结果显示，观察组患者治疗前的血清miR-125b-2 水平明显低于对照组，说明EP 患者血清miR-125b-2 水平明显降低，与前人研究一致。且观察组患者治疗后有效组的血清miR-125b-2 水平明显高于无效组，说明miR-125b-2 在EP 疾病中发挥重要作用，有望作为评估EP 疗效的重要分子。目前关于miR-873 的功能有大量报道，如Chen 等[22]研究发现，其能抑制胶质瘤细胞的增殖，促进其凋亡。一项动物模型研究显示，miR-873 可以对白介素17 诱导小鼠星形胶质细胞产生的炎症因子和趋化因子进行调控，为控制炎性病变关键分子[23]。有研究表明，miR-873 在诸多癌症如肝癌、非小细胞肺癌、结肠癌、胃癌等中表达失调，可作为肿瘤诊断与预后标志物[24-27]。除此之外，miR-873还与多种疾病有关，如多发性硬化症[28]、认知功能障碍[29]、热带病[30]等。然而关于其在EP 中的表达鲜见报道。Lu 等[31]研究显示，EP 患者血清miR-873 水平明显低于流产者。刘利兰[32]研究显示，EP 患者血清miR-873 水平明显低于流产者，且流产者明显低于正常孕妇，可作为EP 诊断指标。本研究结果显示，观察组患者治疗前的血清miR-873 水平明显低于对照组，说明EP患者血清miR-873水平明显降低，与上述研究一致。且观察组患者治疗后有效组的血清miR-873水平明显高于无效组，说明miR-873在EP疾病中发挥重要作用，对评估EP的治疗效果具有重要价值。本研究结果还显示，血清miR-873与miR-125b-2水平呈正相关，说明两者可能存在相互影响。为了提高对EP的诊断价值和预后的评估价值，进一步ROC分析结果显示，血清miR-873 与miR-125b-2 均对EP 疗效有一定评估价值，且联合评估EP 疗效的AUC、灵敏度、特异性均大于单一指标检测，说明联合检测能提升评估价值，但关于两者在EP 中的作用尚不明确，仍有待进一步研究。

综上所述，EP 患者血清miR-873 和miR-125b-2水平均降低，治疗后有效组患者血清miR-873 和miR-125b-2 水平均升高，均可作为诊断EP 和评估EP疗效的生物标志物，且联合检测miR-873 和miR-125b-2可提高对EP的诊断和疗效的评估价值。