HBV相关原发肝细胞癌患者T淋巴细胞、壳酶蛋白和DR-70表达水平差异

陈锡莲 杨勇卫 王鹏雁 刘友德 潘伟

1烟台市奇山医院科教科，烟台 246001；2烟台市奇山医院检验科，烟台 246001；3烟台市奇山医院肝病二科，烟台 246001；4烟台市奇山医院医务科，烟台 246001

肝细胞癌一般起病隐匿，其早期诊断依然是亟待解决的一大难题。目前，乙型肝炎病毒（HBV）感染仍是我国肝细胞癌的首要起因［1］。血清纤维蛋白降解复合物（DR-70）具有抗炎、血管生成和趋化活性作用，有研究表明，DR-70水平在恶性肿瘤患者外周血中明显升高［2-3］。壳酶蛋白隶属壳多糖酶家族，有研究表明，肝纤维化程度越严重壳酶蛋白水平越高［4-5］。因此，血清壳酶蛋白水平对于患者肝纤维化进展严重程度的评估和疾病预后的监测具有重要价值。本研究通过探讨不同临床类型HBV感染患者DR-70和壳酶蛋白表达水平与免疫功能的相关性，为HBV相关原发肝细胞癌的早诊早治提供帮助。

资料与方法

1.一般资料

回顾性选取2017年9月至2022年9月在烟台市奇山医院住院及门诊收治的HBV感染患者，所有患者均未接受抗病毒和免疫调解治疗，排除酒精性肝炎、自身免疫性肝炎、药物性肝炎及其他各型病毒性肝炎。共173例，男114例，女59例，年龄（45.38±12.72）岁；诊断符合《慢性乙型肝炎诊治指南（2015版）》［6］。再根据病情分为乙型肝炎病毒携带者59例、慢性乙型肝炎患者51例、肝硬化患者31例和肝细胞癌患者32例。同期收集40例健康查体者作为对照组［男22例，女18例，年龄（39.15±14.95）岁］，均为肝功能正常人群，排除其他疾病（各型肝炎病毒感染及心肺疾病等）。

本研究获得烟台市奇山医院医学伦理委员会批准（烟台市奇山医院伦准202108号）。

2.检测方法

⑴T淋巴细胞采用流式细胞术检测分析，仪器和试剂均为美国贝克曼库尔特公司生产。⑵采用酶联免疫吸附试验双抗体夹心法定量检测血清DR-70水平，试剂购自江苏为真生物医药技术股份有限公司。⑶应用CIA1200全自动化学发光测定仪（江苏泽成生物技术有限公司）检测血清壳酶蛋白水平，试剂购自杭州普望生物技术有限公司。所有试剂在有效期内并按试剂说明书使用。

3.统计学处理

结果

1.不同临床分型患者T淋巴细胞亚群表达水平

慢性HBV感染者CD3+表达水平从乙型肝炎病毒携带者组到肝细胞癌组逐渐降低；CD3+CD4+表达水平在慢性HBV感染者呈现升高的趋势，且在肝硬化患者达到峰值，但与对照组比较差异并无统计学意义（P＞0.05）；CD3+CD8+表达水平在肝硬化患者中最低，与其他组相比，差异均有统计学意义（均P＜0.05）。见表1。

表1 慢性HBV感染者及对照组T淋巴细胞亚群占淋巴细胞百分比（%，）

表1 慢性HBV感染者及对照组T淋巴细胞亚群占淋巴细胞百分比（%，）

注：HBV为乙型肝炎病毒，对照组为健康体检人员。a与对照组相比，P＜0.05；b与肝硬化组相比，P＜0.05；c与肝硬化组相比，P＜0.01

组别肝细胞癌组肝硬化组慢性乙型肝炎组乙型肝炎病毒携带者组对照组F值P值CD3+CD8+23.44±10.37b 17.89±9.15 24.23±9.11b 24.68±8.45b 24.44±7.32b 2.417 0.049例数22 41 51 59 40 CD3+61.43±19.26a 61.77±17.01a 65.05±11.43 66.13±14.23 67.13±9.90 1.623 0.098 CD3+CD4+35.25±15.62 37.16±13.84 35.14±8.23 35.22±7.29 33.12±8.33 1.162 0.187

表2 慢性HBV感染者及对照组外周血DR-70、壳酶蛋白水平检测结果（）

表2 慢性HBV感染者及对照组外周血DR-70、壳酶蛋白水平检测结果（）

注：HBV为乙型肝炎病毒，对照组为健康体检人员。a与对照组相比，P＜0.01；b与乙型肝炎病毒携带者组相比，P＜0.01；c与慢性乙型肝炎组相比，P＜0.01；d与肝硬化组相比，P＜0.01

壳酶蛋白213.11±39.76abcd 139.19±26.19abc 68.06±17.02a 59.72±18.14 30.69±14.68 64.651＜0.001组别肝细胞癌组肝硬化组慢性乙型肝炎组乙型肝炎病毒携带者组对照组F值P值例数32 31 51 59 40 DR-70 30.11±9.96abcd 17.14±8.33abc 8.89±4.34a 7.63±3.46 5.49±3.17 27.570＜0.001

2.不同临床分型HBV感染者DR-70、壳酶蛋白表达水平

DR-70、壳酶蛋白表达水平随患者病情恶化逐渐升高，且均在肝细胞癌组中表达水平达到峰值，与对照组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。

3.肝细胞癌组外周血T淋巴细胞与DR-70、壳酶蛋白水平的相关性分析

肝细胞癌患者外周血CD3+T淋巴细胞表达占比与DR-70水平呈负相关（r=-0.291；P＜0.05）；CD3+CD4+、CD3+CD8+、CD4+/CD8+与DR-70和壳酶蛋白表达水平均无相关性（均P＞0.05）。见表3。

表3 32例肝细胞癌患者外周血细胞因子与DR-70、壳酶蛋白水平的相关性分析

讨论

有研究表明，HBV感染肝细胞后会诱导机体产生免疫反应，导致肝脏炎性损伤，肝炎患者体内都存在着不同程度的细胞免疫功能紊乱［7-8］；机体免疫反应可主动去除病毒，但机体免疫耐受或T细胞应答不足时导致不能清除HBV，致使感染长期存在，亦是造成乙型肝炎病毒携带者者众多的原因之一［9-11］。本研究发现，慢性HBV感染者CD3+表达水平从乙型肝炎病毒携带者组到肝细胞癌组逐渐降低，CD4+/CD8+却不同程度升高，提示机体被HBV持续感染时，感染者在各临床周期存在不同程度的免疫功能异常。

肿瘤细胞能促进纤维蛋白原及纤维蛋白的降解，导致血清中DR-70水平升高。壳酶蛋白参与炎症反应，在肝纤维化、肝硬化、肝细胞癌阶段会出现不同程度的升高，在肝纤维化及肝细胞癌的发生发展中有一定诊断价值。本研究发现：DR-70和壳酶蛋白表达水平随患者病情恶化逐渐升高，且均在肝细胞癌患者中的表达达到峰值。由此表明，血清DR-70和壳酶蛋白可能是一个敏感的原发性肝癌的检测指标，对肝癌有较高诊断价值。与对照组相比，慢性乙型肝炎组、肝硬化组和肝细胞癌组外周血中的DR-70和壳酶蛋白水平均不同程度升高（均P＜0.01），提示二者可能都参与了HBV感染慢性化，二者联合可以作为肝癌早期诊断的一种无创指标，能够提高肝癌的检出率。机体免疫功能紊乱，尤其是调节性T淋巴细胞的调节失调与慢性肝病的发生发展密切相关［12］。本研究亦发现，肝细胞癌患者外周血CD3+T淋巴细胞表达占比与DR-70水平呈负相关（r=-0.291；P＜0.05），表明DR-70参与了肝病的相关进程及原发性肝癌的发生发展，可作为HBV相关肝癌的监测因子，有助于及时发现病情恶化。

综上，机体免疫耐受或T淋巴细胞应答不足是造成乙肝病毒不能清除，致使感染长期存在的主要原因之一，T淋巴细胞与DR-70、壳酶蛋白联合检测可动态监测乙肝病毒感染后的发生发展进程，有助于慢性乙肝的临床诊疗，特别是对肝脏肿瘤的早期诊断具有较大的应用价值。

利益冲突所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明陈锡莲、杨勇卫：论文撰写，数据分析；王鹏雁、刘友德：文献查阅，数据收集；潘伟：论文指导