胞磷胆碱注射液对大鼠脑缺血组织氨基酸神经递质的影响

胡春荣,马利峰,李凤君,金艺华

(佳木斯大学附属第一医院,黑龙江 佳木斯 154003)

脑卒中是神经科医生临床工作中的常见病种,诊断简单,治疗方法明确 ,但治疗效果均不理想,临床治愈率低,致残率高。目前,脑卒中治疗方法多,药物治疗、手术和介入治疗,但临床效果参差不齐,无论是缺血性还是出血性脑卒中,都会导致脑功能障碍,脑组织缺血及缺氧,脑水肿及临床一系列并发症状的发生,一些基础研究可能会对临床医生的治疗提供帮助。

1 材料与方法

1.1 动物模型的建立

大鼠喂养 3d后 ,参考牛国忠及 Deinsberger W[1]等的方法改进的立体定向自体血脑内注入法,Wistar大鼠均经10%水合氯醛(350mg/kg)腹腔麻醉,俯卧固定于立体定位仪上,头顶部剃毛消毒后正中矢状切开,切口约 1.5cm,钝性分离出前囟,在前囟后1mm,左旁3mm处用牙科钻钻一直径约 1mm小孔。距鼠尾末端约 2cm处剪断,取尾血50 μL,将微量注射器推进至已钻孔内 ,进针5mm(相当于尾状核部)先注入10L,停针2min后缓慢注入剩余 40μL,2min后退针1.5mm停留7min后缓慢将针完全退出。缝合皮肤,回笼饲养。脑出血加 FDPM干预组与上述操作相同 ,但在注血后10min尾静脉注射 FDPM400mg/kg。脑出血前组只进针不注血。大鼠清醒后无偏瘫体征,或血肿沿针道反流,或进入脑室者弃用。本实验选择脑出血后周围缺血组织作为检测部位。

1.2 动物分组及给药

造模成功的大鼠随机分为 3组。假手术组 4只,脑缺血模型组48只,对照组为脑缺血+胞磷胆碱注射液治疗组48只。对照组给予尾静脉注射依胞磷胆碱注射液10mg/kg,模型组大鼠给予尾静脉注射等量生理盐水。对照组及模型组动物即时给药一次,超过24h后给药 2次。两组分别实验前后 (4h、6h、 12h、24h、72h、7d)每时间点各 8只。

1.3 检测方法

谷氨酸和γ-氨基丁酸测定参照试剂盒说明。应用 HITACHI83550型氨基酸自动分析仪测定 Clu、GABA含量。

1.4 统计学处理

2 结果

2.1 脑出血后4h起,Glu含量增高 ,6h、12h、24h、72h明显高于出血前组,持续至7d仍高于脑出血前水平。胞磷胆碱注射液治疗组 Glu水平4h、6h、12h、24h、72h明显高于出血前,至7d与脑出血前比较差异无显著性意义。治疗组4h、6h、12h、24h、72h谷氨酸水平明显低于相同时间点脑出血组(P ＜ 0.05)。见表1。

表1 不同时间点 Glu含量的变化(umol/g;±s;n=8)

表1 不同时间点 Glu含量的变化(umol/g;±s;n=8)

与脑缺血前相比;▲差异具有统计学意义 (P＜0.01)。治疗组与缺血组相比;*差异具有统计学意义 (P ＜0.05)。

组别 脑缺血组 治疗组脑缺血前 3.04±0.16 3.20±1.23脑缺血 4h 5.82±0.95 5.32±1.98脑缺血 6h 16.23±2.98▲ 14.20±2.16脑缺血 12h 26.54±7.36▲ 21.32±5.32*脑缺血 24h 42.13±8.95▲ 30.26±6.93*脑缺血 72h 13.26±5.36▲ 9.76±2.59*脑缺血 7d 6.21±3.21▲ 5.12±1.63*

2.2 脑出血后4h,γ-氨基丁酸含量明显降低,6h、12h、24h、72h、7d γ- 氨基丁酸含量明显低于出血前。6h、12h、24h、72h、7d胞磷胆碱治疗组 γ-氨基丁酸水平低于脑出血前。治疗组 6h、 12h、24h、 72h、 7d GABA水平明显高于相同时间点脑出血组。见表2。

表2 脑缺血后不同时间点γ-氨基丁酸含量的变化(umol/g;±s;n=8)

表2 脑缺血后不同时间点γ-氨基丁酸含量的变化(umol/g;±s;n=8)

与脑缺血前相比;▲差异具有统计学意义 (P＜0.01)。治疗组与缺血组相比;*差异具有统计学意义(P ＜0.05)。

组别 脑出血组 治疗组脑缺血前 3.86±0.69 3.16±0.57脑缺血 4h 3.01±0.56 2.89±0.64脑缺血 6h 2.36±0.32▲ 2.16±0.24脑缺血 12h 1.68±0.31▲ 1.58±0.27脑缺血 24h 1.52±0.25▲ 1.48±0.16*脑缺血 72h 2.16±0.27▲ 1.81±0.32*脑缺血 7d 2.53±0.28▲ 2.21±0.35*

3 讨论

通过临床观察发现,脑缺血后72h患者仍可以出现病情反复变化,病情逐渐恶化进展,甚至昏迷死亡,提示脑血管病变后逐渐演变的一个病理过程,缺血周边组织的继发性损害,在本实验中已经给予得到间接证实。动物实验已证实脑出血周边可有缺血半暗带存在。局部脑血流(rCBF)是描述脑组织缺血的重要指标。Kakim[2]等认为 rCBF低于20mL/(100g·min),脑组织就处于缺血半暗带期 ,即出现神经细胞之间信号传递停止,细胞有氧代谢降低,泵功能抑制,神经细胞去极化,无氧酵解产物如乳酸增多。郭富强等[3]对108例急性脑出血患者也进行了动态 CT、SPECT研究,发现入院时脑 CT显示的血肿体积明显小于 SPECT显示的原发灶缺血体积,证明血肿周边确实存在类似缺血半暗带的 rCBF下降。

在正常人中,兴奋性和抑制性神经递质间保持着动态平衡,体内任何一种神经递质的含量变化都会改变人体的正常生理功能。本实验研究结果:实验后出血4h起,Glu增高,随时间增长,含量也逐渐增加,并且进一步通过胞磷胆碱注射液(CDPC)干预脑出血周边缺血组织发现 Glu含量显著下降。并且胞磷胆碱可以抑制谷氨酸的表达数量,抑制周边组织神经细胞的凋亡。研究证实,GABA能够拮抗 Glu所致的细胞去极化,GABA的去极化拮抗作用能够明显抑制兴奋性神经递质谷氨酸的毒性作用,保护颅脑的功能[4]。

胞磷胆碱注射液价格便宜,是临床的常用药物,对于外伤的脑保护临床应用较多。临床发现对脑中风所致的偏瘫可逐渐恢复四肢的功能,亦可用于其他中枢神经系统急性损伤引起的功能和意识障碍,具有保护作用[5]。本研究还发现 ,胞磷胆碱注射液可以平衡脑内 Glu GABA,促进脑功能的恢复,使脑内神经递质处于动态平衡之中。

[1]Deinsberger W,ogel J,uschinsky W,et al.Experimental intracerebral hematoma reduces the volume of ischemic brain in rats[J].Neurol Res,1999,21(5):517-523

[2]Kakim AM.Chronic cerebral hypoperfusion disrupts discriminativ e behaviorin acquired learning rats[J].J Neurosci Methods,2008,84(1-2):63-68

[3]郭富强,杨友松,宋文忠,等.尼莫地平对脑出血患者局部脑血流、脑水肿及不同时用药临床变化的影响 [J].临床神经病学杂志,2001,1(1):6-9

[4]Fujimura M,M otita- Fujimura Y,Narasimhan P,et al.Copper-zinc super-oxide dismutase prevents the early decrease of apurinic/apyridinic endonuclease and subsequent DNA fragmentation after transient focal cerebral is chemia in mice[J].Stroke,2009,30(11):2408-2415

[5]Qi X,Okuma Y,Hosoi T,et al.Edaravone protects against htpoxia/ischemia induced endplasmic reticulum dysfunction[J].J Pharmacol Exp Ther,2009,311(1):388-93