幽门螺杆菌感染与胆囊癌组织中Ki67、MMP2及Fas表达的关系

周 瀛，侯立朝，任 利，李衍飞

(青海大学附属医院肝胆外科，青海西宁810001)

幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp)已被世界卫生组织列为Ⅰ类致癌物，与胃癌和原发性肝癌等的发生密切相关［1］。为探讨Hp 感染与肿瘤增殖、凋亡及侵袭的关联，本研究就Hp 感染与胆囊癌组织中Ki67、MMP2 及Fas 表达的关系进行研究。

1 资料与方法

1.1 资料:收集青海大学附属医院2010年5月至2013年8月原发性胆囊癌手术切除病理组织石蜡标本124 例，所有患者术前未经放化疗治疗。男性73 例，女性51 例，平均年龄56.7 岁。另选择同期进行肝脏手术切除或胆囊手术常规切除胆囊30 例作为对照组，标本均为正常组织，其中男性18例，女性12 例，平均年龄51.2 岁。两组在年龄、性别方面无显著性差异。所有标本均经10%甲醛溶液固定，常规脱水、透明、浸蜡和石蜡包埋，并均经HE 染色后确认病理诊断，临床资料完整。本研究经医院伦理委员会批准，实施前签定患者知情同意书。

1.2 方法

1.2.1 主要试剂:兔抗人Ki67 抗体、鼠抗人Fas 抗体(武汉博士德生物工程有限公司);鼠抗人MMP-2 抗体(上海太阳生物技术有限公司);免疫组化试剂盒(北京中杉金桥生物技术有限公司)。

1.2.2 Hp 检测:采用W-S 银染色法与快速尿素酶试验两种方法联合检测Hp，检测结果均为阳性者判断为阳性，均阴性者判断为阴性，单阳性者退出实验。

1.2.3 免疫组化及结果判定:采用S-P 法二步，操作按照试剂盒说明书进行，用PBS 替代一抗作为阴性对照。采用双盲法观察阳性反应。以细胞被染成黄色或棕色为阳性细胞，随机选择6 个高倍视野，每个视野计数400 个细胞，计算阳性细胞数所占的百分比均值，当此均值＞10%即为阳性表达。

1.3 统计学分析:用SPSS 17.0 软件进行数据处理，组间比较采用卡方检验，两变量关联性分析采用Spearman 相关分析。

2 结果

2.1 Hp、Ki67、MMP2 和Fas 在胆囊癌及对照组中的表达情况:胆囊癌组Hp、Ki67 和MMP2 阳性率均显著高于对照组(P＜0.01)、而Fas 阳性率显著低于对照组(P＜0.01)(表1)。

2.2 胆囊癌中Hp 感染与Ki67、MMP2 和Fas 抗原表达的相关性:胆囊癌患者中Hp 阳性表达组的Ki67 阳性表达率明显高于Hp 阴性组(P＜0.001)，胆囊癌中Hp 检出率与Ki67 阳性表达正相关(相关系数r=0.326，P＜0.01)。胆囊癌中Hp阳性组的MMP2 阳性表达率显著高于Hp 阴性组(P＜0.001)，胆囊癌中Hp 检出率与MMP2 阳性表达正相关(相关系数r =0.654，P＜0.01)。胆囊癌中Hp 阳性表达组的Fas 阳性表达率低于Hp 阴性组(P＜0.01)，胆囊癌中Hp 检出率与Fas 阳性表达负相关(相关系数r = －0.259，P＜0.01)(表2)。

3 讨论

研究发现，在日本和泰国83%的胆管癌和胆囊癌患者胆汁中检出Hp，而仅有29%胆囊炎患者检测到Hp［2］。Ki67目前被认为是可靠而全面地反映细胞群体增值活性的客观指标。在本研究中，Ki67 在胆囊癌中检出的阳性率明显增高，且与Hp 感染呈正相关;MMP2 在癌细胞的侵袭和转移中起重要作用，本研究中MMP2 在胆囊癌中阳性率明显增高，且与Hp 感染呈正相关。国内研究［3］显示Fas 在正常宫颈组织中阳性率较高，而在宫颈癌组织中Fas 的阳性率显著下降，与本研究结果一致，Fas 在胆囊癌中阳性率下调，与Hp感染呈负相关。以上研究结果提示Hp 感染与胆囊癌细胞增殖、凋亡及侵袭有关。

表1 胆囊癌及对照组中Hp 感染、Ki67、MMP2 及Fas 抗原检测Table 1 The detection of Hp，Ki67，MMP2 and Fas antigen for gallbladder carcinoma and control group

表2 胆囊癌Hp 感染与Ki67、MMP2 及Fas 表达的关系Table 2 The relationship between Hp expression and Ki67，MMP2，Fas expression in gallbladder carcinoma cells

［1］Wang L，Zollinger T，Zhang J.Association between Helicobacter pylori infection and liver cancer mortality in 67 rural Chinese counties［J］.Cancer Causes Control，2013，24:1331-1337.

［2］Matsukura N，Yokomuro S，Yamada S，et al.Association between Helicobacter bilis in bile and biliary tract malignancies:H.bilis in bile from Japanese and Thai patients with benign and malignant diseases in the biliary tract［J］.Cancer Sci，2002，93:842-847.

［3］张文渊，黄筱纮，平金良.Survivin、Fas 在宫颈癌中的表达及意义［J］.肿瘤学杂志，2013，19:605-609.