酸浆多糖提取工艺研究

马洪波,彭国良,杨 萍,刘 微,张洋婷,刘 敏,郗艳丽,雷钧涛* (.吉林医药学院,吉林 吉林 0;.空军临潼航空医学鉴定训练中心,陕西 临潼 70600;兰州军区临潼疗养院,陕西 临潼 70600)

酸浆亦称红姑娘，为茄科多年生草本植物，其果实具有清热解毒、阵痛、强心、利咽、化痰、利尿、降血糖等功效。现代医学认为[1]酸浆有抗乙肝、治疗上呼吸道感染及糖尿病的作用。多糖是由多个相同的单糖基以糖苷键相连而形成的高聚物，具有生物活性功能，如免疫调节、抗病毒、抗肿瘤、降血压、降血脂、降血糖等。酸浆果含蛋白质、脂肪、糖类、维生素、矿物质、酸浆果红素等[2]。其酸浆中的主要成分是多糖，为了更好地提取出酸浆果实中的多糖，本实验通过优选的单因素进行组合，进行正交实验确定最佳协同作用条件，找到筛选酸浆多糖的最佳提供工艺。

1 材料与方法

1.1 实验材料处理

酸浆购于安徽省亳州市万珍中药饮片厂。称取预处理之后的酸浆粉175 g，加入2.4 L的石油醚(沸程60～90 ℃)于80 ℃的恒温水浴锅上水浴回流脱脂4 h，抽滤，滤液减压浓缩回收石油醚，滤渣自然烘干，备用。

采用热水提取法提取酸浆粗多糖：脱脂酸浆果实→热水提取→抽滤(取滤液)→脱色→醇沉4 ℃冰箱中过夜→干燥→粗多糖[3]。

1.2 供试品溶液的制备

取酸浆粗多糖置于50 mL锥形瓶中，加适量纯水，沸水浴使溶解，趁热过滤，并用热水洗残渣，将洗液与锥形瓶中溶液混合，转移至100 mL容量瓶中，并稀释至刻度，摇匀即得。

1.3 葡萄糖标准曲线绘制

精密称取葡萄糖10.31 mg，置于 10 mL 容量瓶中，加适量水溶解，并稀释至刻度，摇匀。精密吸取0.0、0.1、0.2、0.4、0.6、0.8 mL于25 mL比色管,分别加水补1.0 mL。上述溶液分别加3，5-二硝基水杨酸试液1.5 mL,于沸水浴中加热5 min,流水冷却,加水稀释至25 mL刻度。以相应溶液为空白，在520 nm处测定吸收度。以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标,绘制标准曲线。

1.4 酸浆果实中多糖含量的测定

精密量取供试品溶液2.5 mL，置于50 mL锥形瓶中，加水2.5 mL，加6 mol/L盐酸溶液5 mL，在沸水浴中加热30 min，用流水冷却后加酚酞指示液1滴，用40%氢氧化钠溶液调节至微红色，转移至25 mL容量瓶中，加水至刻度，摇匀，即得总糖溶液。精密量取供试品溶液5 mL，置于10 mL容量瓶中，加酚酞指示液1滴，用40%氢氧化钠溶液调节至微红色，加水至刻度，摇匀，即得单糖溶液。

精密量取上述总糖溶液和单糖溶液1 mL，分别置于10 mL具塞刻度试管中,加纯水至2 mL，分别精密加入3，5-二硝基水杨酸试液2 mL，混匀，在100 ℃水浴中加热5 min，取出，立即用冰水浴冷却至室温,加水3 mL摇匀。用相应的试剂作空白，照分光光度法在520 nm处依法显色，测定吸光度，从标准曲线回归方程中计算出总糖和单糖浓度，由总糖含量减去单糖含量，即得多糖的含量[4]。

1.5 单因素实验设计

选择料液比、醇沉浓度、提取时间、提取次数4个影响因素进行单因素实验，其中料液比分别为1∶30、1∶40、1∶50、1∶60、1∶70，醇沉浓度分别为55%、65%、75%、85%、95%，提取时间分别为1 h、1.5 h、2 h、2.5 h、3 h，提取次数分别为1、2、3次。

1.6 正交实验设计

根据相关文献及单因素实验，选择料液比、醇沉浓度、提取时间、提取次数4个影响因素，每个因素取3个水平，以多糖提取率为主要考察指标，选用L9(34)正交表进行实验。

2 结 果

以粗多糖的含量为指标，在料液比为1∶60、乙醇浓度为85%、提取时间2.5 h、提取次数为2次时，提取出的多糖含量最高。单因素实验设计的因素水平见表1,正交实验表如表2。

按照上述最佳提取工艺提取条件，对一组样品进行验证，测定多糖的提取含量为10.535 3、10.553 3、10.751 7、10.586 6、10.672 1 mg/g。

表 1 因素水平表

表 2 正交实验表

3 讨 论

在本实验中采用热水提取法，料液比1∶60，醇沉浓度为95%，提取次数为2次，提取时间为1.5时提取率最高。测定多糖含量采用的3，5-二硝基水杨酸法不使用硫酸，分别测定总糖和单糖的含量后，进而计算出样品中酸浆多糖的含量，方法学验证表明，该法精密度、重现性等良好，是一种简便、实用的有效分析方法。此外，应用3，5-二硝基水杨酸法时，还应注意，样品测试液制备过程中，酸水解必须控制适宜时间,时间短则多糖水解不完全，时间长则单糖和盐酸发生化学反应生成糖醛，不能和3，5-二硝基水杨酸发生缩合反应。

参考文献：

[1] Yang Xiaoping,Guo Dayong,ZhangJinming,et al.Characterization and antitumor activity of pollen polysaccharide[J].Int Immunopharmacol,2007,7(4):427-434.

[2] 李 蕾,岳喜华,于 欢，等.响应面法优化酸浆果多糖的提取工艺[J].食品与生物技术学报，2009，28(1):53-56.

[3] 葛 玉，段玉峰，刘俊花，等.酸浆果多糖不同提取工艺研究[J].食品科学，2006，27(8)：178-182.

[4] 杨贵明，蒋爱华，薛秋生.用DNS光度法测定还原糖的条件研究[J].安徽农业科学，2006，34(14)：3258.