功能性便秘患者肠道菌群分布特点

卜 佳，荣 芳（通讯作者），荣雨露，温娟娟

（1 山西大同大学医学院 山西 大同 037009）

（2 大同市第五人民医院消化科 山西 大同 037009）

功能性便秘（FC）是一种常见的消化系统功能性疾病，临床检查无消化道器质性病变，患者出现粪便干结、排便困难、排便次数减少等症状，以60 岁以上老年人最为高发，发病率约为10%～20%[1]。FC 病程长，反复发作，长期发展可诱发结肠癌、心脑血管疾病等，严重影响患者健康。目前，临床对FC 的发病机制尚无统一定论，一般包括胃肠功能动力不足、肠道菌群紊乱、内脏感觉神经障碍等，其中，肠道菌群紊乱是导致FC 的主要原因[2]。肠道菌群分为有益菌和有害菌2 个部分，正常情况下2 个菌群能够维持平衡，以厌氧菌为主的肠道原籍菌（如双歧杆菌、乳酸杆菌），可借助肠黏膜固有屏障和免疫系统，防止外籍菌的黏附。当平衡被打破，有益菌大量减少，有害菌大量繁殖，可引发FC[3]。因此，肠道菌群紊乱是FC 的重要发病原因，研究FC 与肠道菌群之间的关系至关重要。本文分析FC 的肠道菌群变化，现报道如下。

1.资料与方法

1.1 一般资料

将2020 年1 月—2021 年6 月我院消化内科治疗的90 例FC 患者作为观察组，男48 例，女42 例，年龄25 ～78 岁，平均年龄（48.6±11.2）岁；将同期90 例健康体检者作为对照组，男47 例，女43 例，年龄23 ～76 岁，平均年龄（48.1±10.9）岁。两组一般资料比较差异无统计学意义（P＞0.05），具有可比性。纳入标准：所有观察组患者均确诊为FC，至少25%的排便费力及不尽感、排便有肛门梗阻感和堵塞感、便质为干球粪或硬粪、需要手法辅助排便，每周排便＜3 次，症状持续≥6 个月，经B 超、CT、肠镜等检查无肠道器质性病变，血生化检查肝肾功能、电解质、血常规均正常；排除标准：近3个月内使用过抗生素及其他可导致便秘的药物、合并肠道器质性病变、严重内分泌和代谢性疾病等。

1.2 方法

两组分别留取新鲜粪便样本，采用16 S rRNA 细菌检测技术鉴定肠道菌群。将新鲜粪便200 mg 置于无菌离心管中，采用Powerfecal DNA Isolation K i 试剂盒，进行基因组DNA 抽提，用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA。根据乳杆菌、双歧杆菌、大肠埃希菌、梭杆菌、肠球菌的16 S rDNA 基因序列设计PCR 引物，进行荧光定量PCR反应[4]。反应体系共20 FL，上、下游引物各1 μL，反应共40 个循环，将扩增产物用2%琼脂糖凝胶电泳检测，AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒（AXYGEN 公司）切胶回收PCR 产物，Tris-HCl 洗脱，2%琼脂糖电泳检测进行纯化回收，测定纯化产物吸光度值及浓度，换算为各标准品1 yL 的拷贝数用于制作标准曲线。使用系统软件自动分析循环阈值（Ct）与标准曲线，计算乳杆菌、双歧杆菌、大肠埃希菌、梭杆菌、肠球菌的拷贝数，结果用lg CFU/g 湿便表示[5]。

1.3 观察指标

记录双歧杆菌、乳杆菌、大肠埃希菌、梭杆菌、肠球菌的数量；统计放线菌门、变形菌门相对丰度；将观察组分为轻、中度（50 例）、重度（40 例），分析双歧杆菌、乳杆菌、大肠埃希菌、梭杆菌、肠球菌的数量。

1.4 统计学方法

采用SPSS 21.0 统计学软件，计量资料以均数±标准差（± s）表示，两组间比较采用t检验；计数资料以率[n（%）]表示，两组间比较采用χ2检验。P＜0.05为差异有统计学意义。

2.结果

2.1 两组肠道菌群数量比较

观察组双歧杆菌、乳杆菌数量均显著低于对照组，大肠埃希菌、梭杆菌、肠球菌数量显著高于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 两组肠道菌群数量比较（± s, lg CFU/g）

表1 两组肠道菌群数量比较（± s, lg CFU/g）

组别 例数双歧杆菌乳杆菌大肠埃希菌观察组 908.46±0.928.09±0.858.67±0.79对照组 909.59±0.989.02±0.947.24±0.72 t 3.1063.0723.014 P＜0.05＜0.05＜0.05组别 例数梭杆菌肠球菌观察组 9010.01±0.927.96±1.14对照组 907.70±0.866.83±1.03 t 4.0133.175 P＜0.05＜0.05

2.2 两组放线菌门、变形菌门相对丰度比较

观察组放线菌门相对丰度显著高于对照组，而变形菌门相对丰度显著低于对照组，差异均有统计学意义（P＜0.05），见表2。

表2 两组放线菌门、变形菌门相对丰度比较（± s）

表2 两组放线菌门、变形菌门相对丰度比较（± s）

组别例数放线菌门变形菌门观察组900.06±0.020.05±0.02对照组900.01±0.000.14±0.05 t 3.0523.418 P＜0.05＜0.05

2.3 观察组中不同病情严重程度的肠道菌群数量比较

轻、中度患者的双歧杆菌、乳杆菌数量均明显高于重度患者，大肠埃希菌、梭杆菌、肠球菌数量明显低于重度患者，差异有统计学意义（P＜0.05），见表3。

表3 观察组中不同病情严重程度的肠道菌群数量比较（± s, lg CFU/g）

表3 观察组中不同病情严重程度的肠道菌群数量比较（± s, lg CFU/g）

病情严重程度 例数双歧杆菌乳杆菌大肠埃希菌轻、中度508.67±0.908.22±0.877.76±0.79重度407.78±0.827.49±0.768.82±0.81 t 3.0793.0243.148 P＜0.05＜0.05＜0.05病情严重程度 例数梭杆菌肠球菌轻、中度509.89±0.889.80±1.12重度4010.72±0.9310.69±1.24 t 3.0653.073 P＜0.05＜0.05

3.讨论

目前，FC 患者肠道微生态情况日益受到临床关注。临床发现，FC 不仅与肠道动力、生理功能改变、机体解剖结构等有关，而且与肠道微生态紊乱密切相关。正常情况下，肠道内的有益菌和有害菌能维持平衡，相互制约，维持肠道功能的正常运转[6]。当肠道功能发生异常，有益菌与有害菌之间的平衡被打破，可明显减少有益菌数量，增加有害菌数量，导致肠道菌群紊乱。临床研究证实，肠道菌群失调可破坏肠道动力，而恢复肠道菌群平衡有助于改善肠道动力，减少便秘的发生[7]。这主要是由于部分菌株的代谢产物，如短链脂肪酸，二氧化碳、甲烷等气体，可刺激肠道蠕动，降低肠道内pH 值，增加肠道平滑肌运动幅度，缩短肠道转运时间。因此，研究FC 与肠道菌群的关系有重要的临床意义。

双歧杆菌和乳杆菌是主要的有益菌。双歧杆菌具有增强人体免疫、促进营养物质吸收、抗感染、抗肿瘤、清除内毒素等作用，可抑制有害菌的生长繁殖及酵解，直接刺激肠道蠕动，加快粪便在肠道内的推进速度。并能促进多种维生素的合成，提高糖类、蛋白质的吸收及代谢能力，改善便秘症状。某些双歧杆菌合成的小分子量亲脂性分子还具有抗菌活性，发挥杀灭细菌的作用。乳杆菌的菌群分类十分复杂，与健康关系密切。乳杆菌可直接抑制有害菌的生长繁殖，增加有益菌数量，减少内毒素的产生，促进肠胃蠕动，强化胃肠道功能。同时，乳杆菌在肠道内发酵可产生维生素B 族，增强机体健康。

肠球菌、肠杆菌属于中性菌，具有双重作用，正常情况下对机体有益，若增殖失控或转移到其他部位，可引发诸多问题。这类细菌以粪便为食物，增殖失控可使肠道内有害菌大量聚集，使便质干燥、变硬，最终引发便秘。梭杆菌是一种厌氧芽孢菌，是常见有害菌，可在肠道内分解蛋白质，产生氨、胺类、吲哚等有害物质，可破坏肠道健康。大肠埃希菌是常见致病菌，其数量增加，也表明肠道内有害菌明显增加，可抑制有益菌的生长繁殖，造成肠道菌群紊乱。

本文结果显示，观察组双歧杆菌、乳杆菌、大肠埃希菌、梭杆菌、肠球菌数量均与对照组相比，差异有统计学意义（P＜0.05）。进一步证实了FC 患者存在肠道菌群紊乱，而针对性使用微生态制剂治疗能促进肠道菌群恢复平衡，改善肠道动力，治疗FC。

综上所述，FC 的肠道菌群紊乱，需要行微生态制剂治疗以恢复肠道菌群平衡。