番木瓜抗炎活性研究

郑雪梅，易 兰

(1. 重庆市合川中西医结合医院，重庆 401520; 2. 西南大学荣昌校区，重庆 402460)

木瓜素有“百益果王”之称，分为蔷薇科木瓜属植物木瓜与热带水果番木瓜科木瓜(即番木瓜Carica papaya Linn.)两种[1-2]。蔷薇科木瓜可食用、药用，花色美丽，可供观赏[1]。番木瓜是番木瓜科(Caricaceae)植物的果实，原产东南亚地区，可食用和药用，但不供观赏[2]。番木瓜既可作为食品，在传统医药中又作为抗菌和避孕药物使用。番木瓜广泛种植于世界各地，中国是主要生产国之一。伊朗德黑兰大学的Mehdipour 等研究发现，番木瓜果汁具有显著的抗氧化活性。研究发现，蔷薇科木瓜属植物所含木瓜总皂苷及白芍总苷对免疫性关节炎大鼠血液的浓、黏、凝、聚状态具有不同程度的改善作用[3-6];木瓜总苷具有抗炎作用[7-8]。但目前关于番木瓜是否具有抗炎活性，尚未见相关报道。本研究中拟对番木瓜的抗炎活性进行研究，报道如下。

1 仪器和试药、动物

FA2104A 型电子分析天平(上海精天电子仪器厂);3K15 型高速台式冷冻离心机(美国Sigma 公司);HH-W420 型数显恒温三用水箱(江苏荣华仪器公司);UV-1800 型分光光度计(日本HITACHI 公司);超纯水仪(美国Millipore 公司);KQ5200DB 型超声波清洗器(江苏昆山超声仪器有限公司)。二甲苯、NaCl、冰醋酸、无水乙醇、甲醇、KOH、角叉菜胶均购于重庆东方化学试剂公司;丙二醛(MDA)测试盒、超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒、肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒和一氧化氮(NO)化学法试剂盒等均购于南京建成生物工程研究所。昆明种小鼠，体重18 ～20 g，SPF级，购自第三军医大学实验动物中心，动物合格证编号为

712099。

2 方法与结果

2.1 乙醇浸膏提取

取干燥番木瓜片100 g，粉碎，过40 目筛，用40%乙醇750 mL在50 ℃水浴中回流提取1.5 h，过滤;药渣再加入40%乙醇750 mL回流提取1 h，过滤。合并2 次滤液，70 ℃下浓缩得到乙醇浸膏。

2.2 试验分组及处理[9]

将30 只雄性小鼠随机分为番木瓜乙醇浸膏高、低剂量组(A1组、A2组)和生理盐水组(B 组)等3 组，每组10 只。A1组和A2组小鼠分别按每1 kg 体重灌胃2.0 g 和1.0 g 番木瓜乙醇浸膏，B组小鼠灌胃等容积的生理盐水。番木瓜浸膏溶于纯化水中，每只小鼠灌胃容积均为每10 g 体重0.2 mL，每天灌胃1 次，连续7 d。

2.3 二甲苯致炎试验[9]

试验动物分组及给药方式同2.2 项，第7 天给药后1 h，以移液枪移取0.15 mL 二甲苯滴加上小鼠右耳，用棉球均匀涂抹小鼠右耳双侧，15 min 后颈椎脱臼处死动物，用直径8 mm 皮带冲于左右耳廓相对应部位各打下一耳片，称重，以左右耳片重之差为肿胀度，计算各组肿胀度值及耳肿胀抑制率，并与B 组比较。耳肿胀度=右耳重-左耳重，耳肿胀抑制率% = [(B 组耳肿胀度-A 组耳肿胀度)/B 组耳肿胀度] ×100%。结果见表1。可见，以二甲苯涂抹小鼠耳廓两面后，可引起鼠耳明显肿胀;灌胃2.0 g/kg 和1.0 g/kg 番木瓜浸膏均可使鼠耳肿胀度显著降低，与B 组比较，差异均非常显著(P ＜0.01)，说明番木瓜乙醇浸膏具有较好的抑制二甲苯诱导小鼠耳肿胀作用。

表1 番木瓜乙醇浸膏对小鼠二甲苯致耳肿胀及角叉菜胶致足肿胀的影响(± s，n=10)

表1 番木瓜乙醇浸膏对小鼠二甲苯致耳肿胀及角叉菜胶致足肿胀的影响(± s，n=10)

注:与B 组比较，△P ＜0.05，▲P ＜0.01。表2 同。

二甲苯致炎试验 角叉菜胶致炎试验组别给药剂量(g/kg)A1 组A2 组B 组2.0 1.0同体积耳廓肿胀度(mg)2.01±0.45▲3.19±2.82▲6.87±2.52抑制率(%)70.74 53.57-足肿胀度(mg)28.1±12.08▲33.1±9.6△42.6±12.95抑制率(%)34.38 22.30-

2.4 角叉菜胶致炎试验[9]

试验动物分组及给药方式见2.2 项，第7 天给药后1 h，在左后足跖注射1%角叉菜胶50 μL 致炎，于致炎后4 h 于踝关节处剪下左右后肢，称重，以左右后肢重之差作为炎症肿胀程度。足肿胀度=左后肢量-右后肢量，足肿胀抑制率% =[(B 组足肿胀度-A 组足肿胀度)/B 组足肿胀度] ×100%。将炎足剥皮剪碎，放入2.5 mL 生理盐水中浸泡40 min，3 000 r/min 离心15 min，上清液即为炎足上清液，于-20℃冰箱保存，备用。结果见表1。可见，角叉菜胶能引起小鼠足爪肿胀反应，灌胃高、低剂量番木瓜乙醇浸膏均能抑制角叉菜胶所致小鼠足爪肿胀，差异显著(P ＜0.05 或P ＜0.01)，高剂量番木瓜乙醇浸膏抗炎效果优于低剂量。

2.5 对炎足上清液中炎性因子及氧化损伤因子含量的影响

取2.4 项下制备的炎足上清液0.5 mL，加0.5 mol/L KOH甲醇液2 mL，在50 ℃下异构化20 min，用甲醇稀释至4 mL，于278 nm 波长处测定吸光度(OD)值，以每g 炎性组织相对应的吸光度值表示前列腺素E2(PGE2)的含量[10]。MDA，NO，TNF-α 含量的测定按照试剂盒说明操作[9]。结果见表2。可见，番木瓜乙醇浸膏灌胃可抑制角叉菜胶所致小鼠炎足上清液中PGE2含量，高剂量抑制作用显著(P ＜0.05)，低剂量抑制作用不显著(P ＞0.05);番木瓜乙醇浸膏灌胃时高、低剂量对角叉菜胶所致小鼠炎足上清液中MDA 均有抑制作用(P ＜0.05)，且灌胃剂量越大，抑制作用越好;番木瓜乙醇浸膏灌胃时高剂量、低剂量均能导致小鼠炎足上清液中NO 含量升高，高剂量组升高显著(P ＜0.05)，低剂量组升高不明显(P ＞0.05)。番木瓜乙醇浸膏灌胃时高剂量与低剂量均能导致小鼠炎足上清液中TNF -α 含量下降，高剂量组下降显著(P ＜0.05)，低剂量组下降不显著(P ＞0.05)。

表2 番木瓜乙醇浸膏对角叉菜胶致小鼠炎足中炎性因子及氧化损伤因子含量的影响(± s，n=10)

表2 番木瓜乙醇浸膏对角叉菜胶致小鼠炎足中炎性因子及氧化损伤因子含量的影响(± s，n=10)

组别PGE2(OD 值)MDA(nmol/mgprot)NO(μmol/L)SOD(U/mL)TNF-α(ng/L)A1 组(2.0 g/kg)0.42 ±0.82△1.42 ±0.85△1.28 ±3.51△112.42 ±6.85 34.02 ±0.95△A2 组(1.0 g/kg)0.59 ±1.65 1.89 ±0.65△1.12 ±0.55 101.98 ±7.55 43.71 ±24.46 B 组0.67 ±0.29 3.07 ±10.29 1.07 ±8.29 103.07 ±8.29 48.83 ±7.27

2.6 对致炎小鼠血清中SOD 含量的影响[9]

试验动物分组及给药方式同2.2 项，用对角叉菜胶致炎按照2.4 项下方法进行。于致炎4 h 后，眼眶静脉取血，血样静置15 min 后，2 500 r/min 离心10 min，取上清液(血清)0.2 mL，按照试剂盒说明操作测定致炎小鼠血清中SOD 含量。结果见表3。可见，番木瓜乙醇浸膏灌胃高剂量能导致小鼠血清中SOD 含量升高，但作用不显著(P ＞0.05)，而低剂量则无此作用。

3 讨论

“十病九炎”。炎症是一种极常见而又十分重要的基本病理过程，也是人类以防御性为主的一种保护性反应。在炎症过程中，由细胞释放或体液中产生的PGE2，MDA，NO，TNF-α 和白细胞介素1α(IL-1α)等炎性因子通过各种途径作用于血管，使血管扩张、通透性增加，引起渗出，吸引白细胞到达炎症部位，导致组织损伤，引起局部炎症反应和全身反应。

抗炎试验多采用化学致炎剂二甲苯引起某些炎症，角叉菜胶所致小鼠炎足中，也可能是造成了过多炎性因子的释放。番木瓜乙醇浸膏的高、低剂量可有效缓解二甲苯所致耳廓肿胀，以及减轻小鼠炎足肿胀度的作用，说明其对炎症反应早期的急性渗出性肿胀有明显的抑制作用。PGE2是重要的炎性因子，灌胃高剂量番木瓜乙醇浸膏能降低角叉菜胶所致小鼠炎足上清液中PGE2含量，具有明显抗炎作用。MDA 是氧自由基攻击生物膜中不饱和脂肪酸而形成的脂质过氧化物，可反映出机体内脂质过氧化和机体细胞受自由基攻击的损伤程度。番木瓜乙醇浸膏灌胃高、低剂量能降低角叉菜胶所致小鼠炎足上清液中MDA 含量，且浸膏灌胃剂量越大，抑制作用越好。NO 作为自由基，可以损伤正常细胞，在心肌和脑组织缺血-再灌注损伤过程中起着重要的作用，低浓度的NO 促进细胞凋亡，NO 含量过低可造成血管过度扩张和渗漏、气道充血、加重气道炎症反应和组织损伤[11-13]。高剂量番木瓜灌胃能导致小鼠炎足上清液中NO 的含量升高，说明能减少炎症反应。TNF-α 也是炎性反应介质，番木瓜灌胃高剂量与低剂量均能导致小鼠炎足上清液中TNF-α 含量下降，降低炎性因子水平。SOD 是机体内清除氧自由基的重要抗氧化酶，对机体的氧化与抗氧化平衡至关重要，能清除超氧阴离子自由基(O2-)，保护细胞免受损伤。SOD 活力的高低间接反映了机体清除氧自由基的能力，是反映细胞膜功能和机体炎性反应的主要指标[13]。番木瓜乙醇浸膏灌胃高剂量也不显著升高小鼠血清中SOD 含量，说明炎性反应中炎性介质的种类是多样的，机体中不同炎性介质对同一种抗炎物质的反应还存在一定差异。

[1] 张 茜，王 光，何祯祥，等. 木瓜种质资源的植物学归类及管理原则[J]. 植物遗传资源学报，2005，6(3):339 -343.

[2] 郑 华，于连松，张汝国，等. 番木瓜果实香气的热脱附-气相色谱/质谱分析[J]. 湖北农业科学，48(5):1 235 -1 237.

[3] 蒋毅萍，徐江平. 木瓜提取物抗炎镇痛作用的实验研究[J]. 热带医学杂志，2012，12(11):1 335 -1 337.

[4] 李 娜，金敬红，姜洪芳，等. 宣木瓜总有机酸的纯化及镇痛抗炎作用[J]. 中国实验方剂学杂志，2011，17(1):113 -117.

[5] 邴飞虹，张国斌，邓成志，等. 木瓜丸对大鼠佐剂性关节炎的防治作用[J]. 中国临床药理学与治疗学，2006，11(5):590 -592.

[6] 杨兴海，吴 杰，郭莲军. 资木瓜皂苷提取工艺的优化及对大鼠佐剂性关节炎抗炎免疫机制的研究[J]. 华西药学杂志，2010，25(5):547 -549.

[7] 张玲玲. 木瓜苷对炎症和免疫反应的影响[D]. 合肥:安徽医科大学，2003.

[8] 戴 敏，魏 伟，汪倪萍，等. 木瓜苷对佐剂性关节炎大鼠的治疗作用. [J]中国药理学通报，2003，19(3):256.

[9] 向少能，刘 媛，王 洁，等. 蝎子草浸膏的抗炎、抗痛风及镇静作用研究[J]. 西南师范大学学报:自然科学版，2010，35(3):162 -167.

[10] 胡扬帆，李胜华. 灰毡毛忍冬花挥发性有机物的抗炎作用及机理研究[J]. 时珍国医国药，2012，23(12):3 031 -3 035.

[11] 李志斌，罗祝泉，邹霞英. 一氧化氮对慢性低氧大鼠肺循环组织细胞增殖/凋亡的影响[J]. 中国病理生理杂志，2002，18(9):1 144 -1 146.

[12] Rachmilewitz D，StamLer Dk，Bachwich D，et al. Gastroenterolory[J] .1993，104(4):766 -772.

[13] 王少华，陈锦先，陈锦先. 丹参对溃疡性结肠炎鼠结肠粘膜SOD 活性和MDA 含量影响的实验研究[J]，中国肛肠病杂志，2000，20(7):3 -5.